INMUNODIAGNOSTICO DEL VIRUS DE INMUNODEFICIENCIA HUMANA VIHLic TM William Edwin Alvarado Juarez

VIRUS DE INMUNODEFICIENCIA HUMANAEl VIH es un virus de la familia de los lentivirus. Virus ARN.Existen dos tipos de virus VIH-1 y VIH-2. Los VIH-1 se clasifican en tres grupos distintos (M,N,O), el ms importante es el grupo M que se subdivide en 9 subtipos de la A a la K. En Amrica del Norte, Central y Sudamrica predomina el grupo B.

Lentivirus de la familia RetroviridaeRNA GENMICO DE 8500 NUCLETIDOSPROTEINA DE CUBIERTA EXTERNA GP120TRANSCRIPTASA INVERSAPROTENA P24 DEL COREMEMBRANA LIPDICA

Ciclo Vital del VIHRpida replicacin10 billones de viriones diarios

Alta tasa de mutacin1 sustitucin del genoma por ciclo

Recombinacin 7-30 recambios por ciclos

Viriones libresLinfocitos CD4 infectados CD4 en reposo sin DNA del VIH integradoViriones en las celulas dendriticas folicularesMacrofagos InfectadosCD4 en reposo con Provirus integrado provirusVida Media, dias 30 60 90 120??Finzi. Cell 1998;93:665.Estimacion de la Vida Media de Compartimentos Celulares y Extracelulares del VIH

Laboratorio de enfermedades infecciosas -Hospital Roosevelt*PRUEBAS DE LABORATORIOMtodos Directos: Evidencian/cuantifican la presencia de antgenos en la muestra. PCR cualitativa, PCR cuantificadacultivo y aislamiento viral, antigenemia P-24)

Laboratorio de enfermedades infecciosas -Hospital Roosevelt*PRUEBAS DE LABORATORIOMtodos Indirectos: Evidencian la presencia o ausencia de anticuerpos totales en la muestra.Son los ms utilizados.Pruebas rpidasELISA

Laboratorio de enfermedades infecciosas -Hospital Roosevelt*Diagnstico de VIH Se usan dos niveles de pruebaserolgicas:Pruebas de Tamizaje: Ensayos inmunoenzimticosTest de aglutinacinTest de deteccin rpidaTienen alta sensibilidad. La posibilidad de tener falsos negativos es bajo.

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Laboratorio de enfermedades infecciosas -Hospital Roosevelt*Uni-Gold RecombigenMultispot HIV-1/HIV-2Reveal G2OraQuick AdvancePruebas rpidas disponibles en el mercado

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Laboratorio de enfermedades infecciosas -Hospital Roosevelt*PRUEBAS DE ELISA:Primera Generacin: Los antgenos utilizados provienen del lisado viral de un cultivo

Segunda Generacin: Los antgenos corresponden a protenas recombinantes o Pptidos sintticos.

Tercera Generacin: Pptidos recombinantes sintticos de VIH-1, 2, 0.

Cuarta Generacin: Se adicion el p24.

Laboratorio de enfermedades infecciosas -Hospital Roosevelt*Pruebas de confirmacin: Tienen alta especificidadWestern BlotInmunofluorescencia Indirecta.RadioinmunoprecipitacinLIA

PUEDEN SER UTILIZADAS PARA DISMINUIR LA POSIBILIDAD DE OBTENER RESULTADOS FALSO POSITIVO.

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Laboratorio de enfermedades infecciosas -Hospital Roosevelt*Western BlotPrueba de confirmacinPrincipio: Ensayo inmunoenzimticoDetecta anticuerpos contra protenas especficas del VIH 1Interpretacin: visualMuestras: suero y plasmaVolumen: 20 lTiempo: 3.5 hrs Sensibilidad: 100%Especificidad: 100%

Laboratorio de enfermedades infecciosas -Hospital Roosevelt*Nomenclatura de las bandas en Western Blot

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Gen

Protena

Denominacin

CDC

OMS

env

Precursora de la envoltura

gp160

gp160

Al menos 2 bandas

Glucoprotena externa

gp120

gp120

Glucoproteina transmembrana

gp41

gag

Precursora del core

p55

Precursora del core

p40

Protena principal

p24

p24

Protena de la matriz

p17

pol

Transcriptasa inversa

p66

Transcriptasa inversa

p51

Endonucleasa

p32

Laboratorio de enfermedades infecciosas -Hospital Roosevelt*Ventajas de las pruebas rpidas de VIHVersatilidad y existencia de diferentes principios inmunolgicos as como en las muestras biolgicas que se pueden utilizar.No necesitan un laboratorio muy sofisticado para utilizarlas.La realizacin y la interpretacin de los resultados obtenidos es fcil.Los resultados preliminares se obtienen en poco tiempo, y cuando se combinan los resultados definitivos los podemos obtener en menos de una horaPersonal a nivel tcnico las puede realizar con la debida capacitacin y supervisin de un profesional con experiencia.

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Laboratorio de enfermedades infecciosas -Hospital Roosevelt*Fortalezas de las pruebas rpidas de VIHAlgunas se pueden almacenar a temperatura ambiente.Se optimiza el uso de los recursos y el tiempo comparado con el ELISA.Los resultados obtenidos son igual de confiables que los resultados del ELISA y con menos limitaciones tcnicas.Algunas requieren poca inversin econmica.

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Laboratorio de enfermedades infecciosas -Hospital Roosevelt*Debilidades de las pruebas rpidas de VIHEl costo comparado de estas pruebas con el ELISA puede a veces ser mayor.Presencia de falsos positivos por lo que necesitan confirmacin de los resultados obtenidos. El periodo de ventana es mas largo por lo que podemos tener resultados falso negativo comparado con el ELISA de cuarta generacin.

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Laboratorio de enfermedades infecciosas -Hospital Roosevelt*Causas de resultado falso-positivo:Relativas al suero:Relativo a la calidad y manipulacin de la muestra:Calidad, extraccin, almacenamiento y contaminacin de la misma, estabilidad y calidad de los reactivos. Relativas a la presencia de auto anticuerpos:Presencia de enfermedades autoinmunes (AR, LES).Relativas a otras condiciones: Vacunaciones, Enf. Virales, I Renal, Cirrosis, Enfermedades hemato -oncolgicas, alcoholismo, embarazo, etc.

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Laboratorio de enfermedades infecciosas -Hospital Roosevelt*Causas de resultado falso- negativo:Periodo de ventanaTratamiento con inmunosupresoresProcesos malignosTrasplante de mdula seaDisfunciones de las Clulas BFactores reumatoidesPrdida de estabilidad de los reactivosReactivos que detectan principalmente p24Pobre respuesta inmune

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Laboratorio de enfermedades infecciosas -Hospital Roosevelt*Seleccin de pruebas rpidas de VIH apropiadasEs necesario tomar en cuenta tres factores:El objetivo de hacer la prueba.Sensibilidad y especificidad de la prueba.Prevalencia de la infeccin de VIH en la poblacin que ser tamizada con las pruebas.

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Laboratorio de enfermedades infecciosas -Hospital Roosevelt* Eleccin de Pruebas rpidas de VIH

Los tres objetivos para hacer un tamizaje de anticuerpos contra VIH son:Tamizaje de donadores de sangre u rganos.Para fines epidemiolgicosDiagnstico de personas infectadas.

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*FAMILIA RETROVIRIDAE,SUBFAMILIA LENTIVIRUS. LOS NICOS QUE INFECTAN HUMANOS.CORE (CENTRO) CONTIENE LAS NUCLEOPROTENAS, RODEADO DE ENVOLTURA COMPUESTA POR BICAPA LIPDICA EN LA QUE SE INSERTAN LAS PROTENAS GLICOSILADAS DE SUPERFICIE (GP120) Y TRANSMEMBRANA (GP41).A. PROTEINA DE CUBIERTA EXTERNA GP120B. PROTENA P24 DEL COREC. RNA GENMICO DE 8500 NUCLETIDOSD. TRANSCRIPTASA INVERSAE. MEMBRANA LIPDICA

PROTEINA DE CUBIERTA EXTERNA GP120RNA GENMICO DE 8500 NUCLETIDOSTRANSCRIPTASA INVERSA**Four rapid tests approved by the FDA are currently commercially available: The Uni-Gold, Multispot, Reveal, and OraQuick Advance.