Il sistema immunitario Il sistema immunitario di di DicentrarchusDicentrarchus labraxlabrax

…. e non solo…. e non solo

LymphoidLymphoid OrgansOrgans of Teleostsof Teleosts

trunk kidney

TeleostsTeleosts havehave innate and innate and acquiredacquireddefencesdefences

DIFESE INNATE:DIFESE INNATE:

-- PeptidiPeptidi antibattericiantibatterici-- ComplementoComplemento-- LisozimaLisozima, , TransferrinaTransferrina-- Produzione di ROSProduzione di ROS-- FagocitosiFagocitosi-- IFNIFNαα

Rapide (1 s-10 min), aspecifiche, senza memoria

Attivate da stimolanti (es. glucani)

Inibite da stress

DIFESE DIFESE ACQUISITE:ACQUISITE:

-- AnticorpiAnticorpi-- OpsonineOpsonine/Complemento/Complemento-- Linfociti killer e Linfociti killer e helperhelper antigeneantigene--specificispecifici-- Produzione di Produzione di citochinecitochine e fattori e fattori solubilisolubili

Ritardate (da ore a giorni), specifiche, con memori

Attivate da stimolanti (adiuvanti, probiotici)

Inibite da stress

Cosa sappiamo delle difese immunitarie dei Cosa sappiamo delle difese immunitarie dei teleosteiteleostei in in acquacolturaacquacoltura??

11-- Il sistema immunitario risponde, in quanto stimolando con un anIl sistema immunitario risponde, in quanto stimolando con un antigene o vaccintigene o vaccingenetica si possono misurare, dopo un certo tempo, anticorpi cirgenetica si possono misurare, dopo un certo tempo, anticorpi circolanti specifici colanti specifici (casi a parte: (casi a parte: CodCod, , HaddokHaddok, , IcefishIcefish).).

22-- Il sistema immunitario può essere modulato positivamente da Il sistema immunitario può essere modulato positivamente da immunostimolanimmunostimolantimmunoadiuvantiimmunoadiuvanti, , probioticiprobiotici; negativamente da condizioni di stress ambientale.; negativamente da condizioni di stress ambientale.

33-- Si può effettuare vaccinazione propedeutica Si può effettuare vaccinazione propedeutica massivamassiva e preventiva in età giovane preventiva in età giovan

44-- La vaccinazione terapeutica ha poco effetto nel rallentare gli La vaccinazione terapeutica ha poco effetto nel rallentare gli outbreaksoutbreaks

55-- Alcuni patogeni sono ormai Alcuni patogeni sono ormai ubiquitariubiquitari e, quindi, opportunisti.e, quindi, opportunisti.

66-- Nonostante le somiglianze, e’ difficile applicare le conoscenzeNonostante le somiglianze, e’ difficile applicare le conoscenze immunologicheimmunologichemammiferi ai mammiferi ai TeleosteiTeleostei, e fra questi , e fra questi puo’puo’ essere difficile da specie a specie.essere difficile da specie a specie.

Futuro: vaccini polivalenti, modulazione positiva, parchi riprodFuturo: vaccini polivalenti, modulazione positiva, parchi riproduttori geneticameuttori geneticamenselezionati.selezionati.

Metodi con i quali si studia il sistema immunitario

Cellulari Molecolari

Proliferazioni “in vitro” in Proliferazioni “in vitro” in risposta a stimoli “allo” e risposta a stimoli “allo” e “xeno”“xeno”Misurazione di anticorpi prodotti “in Misurazione di anticorpi prodotti “in vivo” e “in vitro”vivo” e “in vitro”

Attività antibatterica e antiviraleAttività antibatterica e antivirale

CitotossicitàCitotossicità e “e “killingkilling””

Determinazioni delle concentrazioni Determinazioni delle concentrazioni leucocitarieleucocitarie

Metodi con i quali si studia il sistema immunitario

MolecolariMolecolariCellulari

Presenza di espressione Presenza di espressione genica (RTgenica (RT--PCR e PCR e qRTqRT--

PCRPCR))Determinazione dell’antigene(i) Determinazione dell’antigene(i) riconosciuto(i)riconosciuto(i)

Clonaggio di geni di interesseClonaggio di geni di interesse

Espressione di proteine Espressione di proteine ricombinantiricombinanti

Espressione dei geni di Espressione dei geni di interesseinteresse

TrasfezioneTrasfezione di geni di di geni di interesseinteresse

Analisi extraAnalisi extra-- ed ed intracellulariintracellulari delle interazioni delle interazioni ligandoligando--recettorerecettore

Lab of Lab of AnimalAnimal BiotechnologyBiotechnology: :

CellularCellular and and molecularmolecular markersmarkers availableavailable forfor seasea bassbass

MabMab antianti-- thymocytesthymocytes and and peripheralperipheral T T cellscells

MabMab antianti-- immunoglobulinsimmunoglobulins and and BB--cellscells

MabMab antianti-- complementcomplement (C3)(C3)

MolecularMolecular probesprobes forfor::

ILIL--11ββ, IL, IL--10, CD8a, 10, CD8a, TT--cellcell receptorreceptor((VbVb, Va), , Va), ImmunoglobulinImmunoglobulin ((IgLCIgLC), ),

MHCI, MHCII, IFN, CiclooxygenaseMHCI, MHCII, IFN, Ciclooxygenase--2 2 , , MxMx

ContinuousContinuous embryonicembryonic cellcell line line (DLEC)(DLEC)

RiboprobesRiboprobes forfor “in “in situsitu” ” hybridisationhybridisation

ProtocolsProtocols forfor::

LeucocyteLeucocyte purificationpurification, , leucocyteleucocytestainingstaining, , cellcell proliferationproliferation, , secondsecond

messengersmessengers detection, detection, transfectiontransfection, , immunoenzymaticimmunoenzymatic analysisanalysis, , fishfish

vaccination…vaccination…....

In progress:In progress:

EST EST librarieslibraries fromfrom fishfish challengedchallenged

withwith variousvarious pathogenspathogens,,

MicroarrayMicroarray chip(s)chip(s)

SeaSea bassbass isis, at , at presentpresent, the , the onlyonly marine teleomarine teleo

speciesspecies forfor whichwhich allall thesethese markersmarkers are are avaiavail

IMMUNITA’ UMORALEIMMUNITA’ UMORALE

Produzione di anticorpi specifici “in Produzione di anticorpi specifici “in vivo”vivo”

Produzione di anticorpi specifici “in Produzione di anticorpi specifici “in vitro”vitro”

B-cell

BcR

Ag

The binding of an antigen isenough to activate B lymphocytesfor somatic ricombination of BcRand for antibody secretion

Test the Test the efficiencyefficiency of a of a stimulantstimulant(e.g. a vaccine) through (e.g. a vaccine) through BB--cellcell

activitiesactivities

Rationale: B-cells from immunised fish shouldproduce antigen-specific antibodies and maintaina memory for the antigen.Methods: ELISA and “In vitro” production of specific antibody by HK

leucocytes.

BB--cellcellactivitiesactivitiesBB--cellcellactivitiesactivities

IMMUNITA’ UMORALE “in vivo”IMMUNITA’ UMORALE “in vivo”

Antigene sintetico: Antigene sintetico: apteneaptene (DNP) e molecola (DNP) e molecola carriercarrier (KLH)

0

0,5

1

1,5

2

2,5

3

2 2,3 2,6 2,9 3,2 3,5 3,8 4,1Log reciprocal serum dilution

Abs.

492

nm

0

0,05

0,1

0,15

0,2

0,25

2 2,3 2,6 2,9 3,2 3,5 3,8 4,1Log reciprocal serum dilution

Abs.

492

nm

DNPDNP--KLHKLH KLHKLH

(KLH)

ELISA di Anticorpi specifici antiELISA di Anticorpi specifici anti--DNPDNP--KLH e KLH nel KLH e KLH nel siero di pesci immunizzati per via siero di pesci immunizzati per via intraperitonealeintraperitoneale (30 (30

giorni).giorni).

Risposta antibatterica “in vivo”Risposta antibatterica “in vivo”

0

0,05

0,1

0,15

0,2

0,25

0,3

0,35

0,4

0,45

2 2,3 2,6 2,9 3,2 3,5 3,8 4,1 4,4 4,7 5 5,3Log reciprocal serum dilution

A492

nm

Pre-immune

Immune

ELISA di Anticorpi specifici anti-Vibrio nel siero di pesci dopo 20 giorni di immunizzazione i.p., senza richiamo

Risposta antibatterica “in vivo”Risposta antibatterica “in vivo”

0

0,2

0,4

0,6

0,8

1

1,2

1,4

2 2,3 2,6 2,9 3,2 3,5 3,8 4,1 4,4 4,7 5 5,3log reciprocal serum dilution

Abs

492

nm

ImmunePre-immune

Pesci di 2 g

ELISA di Anticorpi specifici anti-Vibrio nel siero di pesci immunizzati un anno prima con vaccino commerciale per

immersioneIl siero di questo gruppo di animali è capace di agglutinare “inIl siero di questo gruppo di animali è capace di agglutinare “invitro” vitro” VibrioVibrio anguillarumanguillarum vitalevitale

RISPOSTA ANTIBATTERICA “in vivo”RISPOSTA ANTIBATTERICA “in vivo”La vaccinazione per immersione contro La vaccinazione per immersione contro PhotobacteriumPhotobacterium damselaedamselae

richiede un richiamo dopo 20 giornirichiede un richiamo dopo 20 giorni

P. damselae, 64 days (30 days after boosting)

0

0,1

0,2

0,3

0,4

0,5

0,6

2 2,3 2,6 2,9 3,2 3,5 3,8 4,1Log reciprocal serum dilution

Abs.

492

nm

preimmune

immune

Pesci di 100 g

ELISA di Anticorpi specifici antiELISA di Anticorpi specifici anti--P. P. damselaedamselae nel siero di pesci nel siero di pesci immunizzati.immunizzati.

RISPOSTA ANTIBATTERICA “in vivo”, effetto di RISPOSTA ANTIBATTERICA “in vivo”, effetto di immunoadiuvanteimmunoadiuvante: : E.coliE.coli LTK63 ricombinanteLTK63 ricombinante

a

0

0,05

0,1

0,15

0,2

0,25

2 2,3 2,6 2,9 3,2 3,5 3,8 4,1

b

0

0,1

0,2

0,3

0,4

0,5

2 2,3 2,6 2,9 3,2 3,5 3,8 4,1

c

0

0,1

0,2

0,3

0,4

0,5

0,6

0,7

0,8

2 2,3 2,6 2,9 3,2 3,5 3,8 4,1

2121 49 (28*)49 (28*) 70 (49*)70 (49*)

Pesci di 1,5 gcontrol Phda Phda + LTK63

ELISA assay.ELISA assay.ELISA assay on pooled sera of young sea bass (1.5 G) vaccinatedELISA assay on pooled sera of young sea bass (1.5 G) vaccinated against against PhotobacteriumPhotobacterium damselaedamselae baba

tested at day 21 (a), 49 (b), and 70 (c) after vaccination. Conttested at day 21 (a), 49 (b), and 70 (c) after vaccination. Control fish= black bars, vaccinated fish = emptyrol fish= black bars, vaccinated fish = empty

LTK63LTK63--treated fish = grey bars. Xtreated fish = grey bars. X--axis is the log of reciprocal serum dilution.axis is the log of reciprocal serum dilution.

RISPOSTA “in vivo”, effetto di RISPOSTA “in vivo”, effetto di immunoadiuvanteimmunoadiuvante: (IL: (IL--11ββ ricombinante)ricombinante)

0

0,1

0,2

0,3

0,4

0,5

0,6

2 2,3 2,6 2,9 3,2 3,5 3,8 4,1Log rec. serum dilution

Abs

492

nm

P BS

P BS +Vibrio

P BS +Vibrio+IL-1be t a

0

0,2

0,4

0,6

0,8

1

2 2,3 2,6 2,9 3,2 3,5 3,8 4,1Log rec. serum dilution

Abs

492

nm

PBS

PBS+VibrioP BS +Vibrio+IL-1-be t a

Immunizzazione intraperitoneale

ELISA dopo 30 giorni

Pesci di 150 g

ELISA dopo 60 giorni

RISPOSTA “in vivo”, effetto di RISPOSTA “in vivo”, effetto di probioticiprobiotici

Espressione COX-2/actina

0

0,2

0,40,6

0,8

1

1,2

1,41,6

1,8

2

control pro-car1 pro-car2

CO

X-2,

esp

ress

ione

rela

tiva

RT-PCR su RNA estrattoda cellule di intestino

Cellule a 51 dph(cellule/mm2)

Controllo Pro-carrier 1 ∆%

EGC 19 ± 6 19 ± 3 0Linfociti T 1158 ± 149 1252 ± 274 + 8

Cellule a 74 dph(cellule/mm2)

Controllo Pro-carrier 1 ∆% Pro-carrier 2

EGC 163 ± 221880 ± 95Linfociti T

∆%

108 ± 28 235 ± 31* + 118 + 511374 ± 192 2814 ± 576* + 105 + 37

* p<0.05

Analisi immunoistochimica quantitativa

Pesci di 50 g

RISPOSTA “in vivo”, effetto di RISPOSTA “in vivo”, effetto di CpGCpG--nucleotidinucleotidi

RISPOSTA “in vivo”, effetto di RISPOSTA “in vivo”, effetto di immunostimolantiimmunostimolantiPesci di 50 g15 giorni di trattamento

complementoHSP 70

HSP 70lisozima

RISPOSTA “in vivo”, effetto di RISPOSTA “in vivo”, effetto di immunostimolantiimmunostimolanti45 giorni di trattamento

complemento

lisozima

Proteina totale sierica

Pesci di 50 g

RISPOSTA “in vivo”, effetto di RISPOSTA “in vivo”, effetto di immunostimolantiimmunostimolanti

Conta dei linfociti B e linfocitiT tramite analisi citofluorimetrica

Pesci di 50 g

Intestino B-cells

PBL B-cells

Intestino T-cells

PBL T-cells

Effetto “in vivo”: concentrazione di ossigeno Effetto “in vivo”: concentrazione di ossigeno discioltodisciolto

0

1

2

3

4

5

6

7

8

normossia iperossia0

5

10

15

20

25

30

35

normossia iperossia

2211

Quantità di immunoglobuline totali Quantità di immunoglobuline totali sierichesierichein spigola (1) e sarago in spigola (1) e sarago pizzutopizzuto (2) determinate tramite ELISA(2) determinate tramite ELISA

Effetto “in vivo”: concentrazione di ossigeno Effetto “in vivo”: concentrazione di ossigeno disciolto disciolto sulla conta sulla conta linfocitarialinfocitaria

Linfociti T (%)Linfociti T (%) Linfociti B (%)Linfociti B (%)

normossianormossia iperossiaiperossia normossianormossia iperossiaiperossia

------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------

timotimo 264264 726726 aaaaaa 78***78*** 54.5**54.5**

renerene 9898 8484 8686 367***367***,,aaaaaa

milzamilza 138138 9292 212*212* 308***308***,a,a

intestinointestino 119119 552552 aaaaaa 109109 22***22***,a,a

branchiebranchie 25142514 70137013 aaaaaa 76**76** 61***61***

sanguesangue 8585 3232 10101010 109109

----------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------LL’’analisi statistica del T di analisi statistica del T di StudentStudent per dati non appaiati (a due code) risulta: significativamente per dati non appaiati (a due code) risulta: significativamente

differente da cellule positive per DLT15 (***) P<0.001; (**) P<0differente da cellule positive per DLT15 (***) P<0.001; (**) P<0.01, (*) P<0.05; .01, (*) P<0.05;

da da normossigenatinormossigenati ((aaaaaa) P<0.001; () P<0.001; (aaaa) P<0.01, () P<0.01, (aa) P<0.05.) P<0.05.

DLT15= antiDLT15= anti--linfociti T; DLIg3= antilinfociti T; DLIg3= anti--linfociti B.linfociti B.

RISPOSTA ANTICORPALE“in vitro”RISPOSTA ANTICORPALE“in vitro”

vitro

RISPOSTA ANTIBATTERICA “in vitro”RISPOSTA ANTIBATTERICA “in vitro”ImmersionImmersion--vaccinationvaccination againstagainst PhotobacteriumPhotobacterium damselaedamselae

and and immunoadjuvanticityimmunoadjuvanticity of E. coli rLTK63 of E. coli rLTK63

a

0

0,1

0,2

0,3

0,4

0,5

0,6

0,7

21 40 70

b

0

0,1

0,2

0,3

0,4

0,5

0,6

21 40 70

HKHK GillsGills

control Phda Phda + LTK63

“In vitro” production of anti-Phda immunoglobulins.

Head kidney and gill leucocytes at indicated days incubated withHead kidney and gill leucocytes at indicated days incubated with the immunisation antigen the immunisation antigen ((PhotobacteriumPhotobacterium damselaedamselae bacterinbacterin) adsorbed onto plastic for 48 hours at 18 ) adsorbed onto plastic for 48 hours at 18 °°C. Cells were then C. Cells were then

removed and specific antibody detected by ELISA. removed and specific antibody detected by ELISA.

IMMUNITA’ UMORALE “in vitro”IMMUNITA’ UMORALE “in vitro”

Produzione di anticorpi specifici anti: P.damselae da leucociti di branchie e rene cefalico

"In vitro" Ig, P. damselae

0

0,05

0,1

0,15

0,2

0,25

0,3

Gills pre Gills post HK pre HK post

Abs.

492

nm

64 days after boosting

IMMUNITA’ CELLULAREIMMUNITA’ CELLULARE

T-cell

TcR

CD4-8

APC

MHC

AgTT--cellcell

activitiesactivities

Activation of T-cell populations triggersomatic ricombination of TcR, T-cells proliferation

and cytokine production

Profilo linfocitario

DLT15= T-cellsDLIg3= B-cells

Linfociti T (%)Linfociti T (%) Linfociti B (%)Linfociti B (%)

normossianormossia iperossiaiperossia normossianormossia iperossiaiperossia

----------------------------------------------------------------------------------------------------

timotimo 264264 726726

--------------------------------------------------aaaaaa 78***78*** 54.5**54.5**

renerene 9898 8484 8686 367367******,,aaaaaa

milzamilza 138138 9292 212*212* 308308******,a,a

intestinointestino 119119 552552 aaaaaa 109109 22***22***,a,a

branchiebranchie 25142514 70137013 aaaaaa 76**76** 61***61***

sanguesangue 8585 3232 10101010 109109

----------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------

Questa distribuzione è correlabile allo “uptake” dell’antigene?

AbundanceAbundance of of TT--cellscells in the intestinein the intestine

TT--cellscells

BB--cells

T-lymphocytes in the gut

0

20

40

60

80

100

120

anterior middle posterior

relativ

e ce

ll nu

mbe

r

T-cellsEpithelial cells

cells

MayMay thisthis bebe importantimportant forfor oraloral vaccinationvaccination??

Relative density of T-immunoreactive cells in seabass lymphoid organs (quantitative immunocytochemistry)

0100200300400500600700800900

1000

28 35 41 49 56 70 86

days post-hatching

num

ber o

f cel

ls/1

0000

mic

ron2

0

5

10

15

20

25

30

35

28 35 41 49 56 70 86

days post-hatching

num

ber o

f cel

ls/1

0000

mic

ron2

0

1

2

3

4

5

6

7

8

28 35 41 49 56 70 86

days post-hatching

num

ber o

f cel

ls/1

0000

mic

ron2

0

1

2

3

4

5

6

28 35 41 49 56 70

days post-hatching

num

ber o

f cel

ls/1

0000

mic

ron2

thymus

intestine

kidney

spleen

Relative density of B-immunoreactive cells in seabass lymphoid organs during development

00,10,20,30,40,50,60,70,80,9

1

28 35 41 49 56 70 86

days post-hatching

num

ber o

f cel

ls/1

0000

mic

ron2

thymus

0

0,51

1,5

22,5

3

3,54

4,5

28 35 41 49 56 70 86

days post-hatching

num

ber o

f cel

ls/1

0000

mic

ron2

0

0,5

1

1,5

2

2,5

28 35 41 49 56 70 86

days post-hatching

num

ber o

f cel

ls/1

0000

mic

ron2

kidney

spleen

0

0,2

0,4

0,6

0,8

1

1,2

28 35 41 49 56 70 86

days post-hatching

num

ber o

f cel

ls/1

0000

mic

ron2

intestine

CON QUESTI DATI POSSIAMO AFFERMARECON QUESTI DATI POSSIAMO AFFERMARECHE CHE DICENTRARCHUS LABRAXDICENTRARCHUS LABRAX E’ E’

IMMUNOLOGICAMENTE COMPETENTEIMMUNOLOGICAMENTE COMPETENTEA 3 MESI DI A 3 MESI DI ETA’ETA’

InterleukinInterleukin--10: 10: anan importantimportant regulatorregulator of immune of immune responsrespons

TT--cellcellMHCI MHCII

CytotoxicityCytotoxicity HelperHelper activityactivity

Th1 Th2

IFNγ IL-10

activationactivation deactivationdeactivation

CD8 CD4

BB--cellscells and and TT--cellscells can can bebe immunopurifiedimmunopurified withwith mAbmAb

PurifiedPurified BB--cellscells havehave ananenhancedenhanced proliferativeproliferative

capabilitycapability

0

1

2

3

4

5

6

leucocytes DLIg3-purified

Prol

ifera

tion

inde

x (a

rbitr

ary

units

)

HK leucocytes from Vibrio-immunised fishincubated “in vitro” with antigen.

ATP- luminescence assay

A A typicaltypical TT--cellcell activityactivityThe oneThe one--way way mixedmixed leucocyteleucocyte reactionreaction (MLR)(MLR)

Stimulator PBL (inactivated byirradiation or mitomycin)

EffectorPBL 1

Blood

PBL

Effector PBL 2Effector PBL …n° 25Effector / Stimulator ratio = 5:1

““in vitro” MLRin vitro” MLR

Metodo di indagine: Metodo di indagine: AlloreazioneAlloreazione di PBL contro di PBL contro PBL irradiati (MLR). Conta PBL irradiati (MLR). Conta linfocitarialinfocitaria tramite FACStramite FACS

*

a

0

5

10

15

20

25

30

0 2 4Weeks

Perc

ent o

f pos

itive

cells

b

0

5

10

15

20

25

30

0 2 4Weeks

Perc

ent o

f pos

itive

cells

Control PBL MLR

B cells= Empty barsT cells = solid bars

B cells= Empty barsT cells = solid bars

FlowFlow cytometriccytometric analysisanalysis of MLRof MLR

DMEM

PBL MLR

2 2 weeksweeks MLR: MLR: effectseffects of of cyclosporincyclosporin--AA (5 (5 µµg/ml)g/ml)cyclosporin A is known in mammals to inhibit T-cell activities through the depression of T-cells growth factors production, by preventing activation of transcription factors involved

in cytokine expression.

0

2

4

6

8

10

12

14

Control MLR MLR + Cs A

CytotoxicityCytotoxicity assayassay of MLR of MLR culturescultures

4 days

ATPATP--basedbased luminometricluminometricassayassay

PBL andPBL andMLRMLR SAFSAF--1 1 fibroblastsfibroblasts

((fromfrom seasea breambream))

% % cellcell viabilityviability = (E+T) = (E+T) –– E / T x 100E / T x 100

RationaleRationale: target (: target (damageddamaged) ) cellscells shouldshould havehave lesslessintracellularintracellular ATPATPAdvantageAdvantage: : effectoreffector cellscells maymay bebe removedremoved easilyeasily

E T

E+T

XenogeneicXenogeneic reactionreaction (PBL on (PBL on mitomycinmitomycin--treatedtreated SAFSAF--1 1 cellscells))

Assay: IIF and flow cytometry with mAb DLIg3 and DLT15

Xenoreaction B-cells: 4 days

0

5

10

15

20

25

30

control xeno

Perc

ent p

ositi

ve c

ells

in P

BL ANOVA test, p=0.016

Xenoreaction T-cells, 4 days

0123456789

10

control xeno

Perc

ent p

ositi

ve c

ells

in P

BL ANOVA test, p=0.013

Cytotoxicity in xenoreaction at 4 days

0

50

100

150

200

20;1 10;1 5;1 1;1E:T ratio

perc

ent t

arge

t sur

viva

l

E = PBL T = SAF-1 cells

Assay: luminometric determinationof intracellular ATP

NN--endend

CC--endend

NN--endend

CC--endend

OncorhynchusOncorhynchus mykissmykiss ILIL--11

DicentrarchusDicentrarchus labraxlabrax ILIL--11

bb--bulgebulge looploop

bb--bulgebulge looploop

FishFishimmunopharmacologyimmunopharmacology

C-end

N-end

Dominio III

Dominio II

Dominio I

IL-1

IL-1R

Trout IL-1 receptor (Il-1RI)

Trout IL-1 bound to Il-1RI

A A syntheticsynthetic peptidepeptide derivedderivedfromfrom the the bulgebulge looploop hashas goodgoodimmunoadjuvantimmunoadjuvant activityactivity

TOO EXPENSIVE, AT PRESENT,TOO EXPENSIVE, AT PRESENT,FOR APPLICATION FOR APPLICATION IN FISH FARMINGIN FISH FARMING

SIXTH FRAMEWORK PROGRAMMEPRIORITY 5FOOD QUALITY AND SAFETY

SIXTH FRAMEWORK PROGRAMMEPRIORITY 5FOOD QUALITY AND SAFETY

Improved immunity of aquacultured animals(IMAQUANIM)

Disease modelsVaccination

ImmunostimulationChallenge

Stress

Previously characterised defense gene elements

New genes related to immune defensemechanisms

Genomics of immunity- Qualitative and quantitative assays for gene expression - Functional analysis

Differential displaySubtractive hybridisationMicroarray

Homology cloning

Platform for better disease protection- Gene array assays for quantitative and qualitative determination of immuno competance and vaccine efficacy.- Assays for determination of pathogen-related immunological status

Immune response analysesHistological studies

New vaccinestrategies

Antibodies to Key molecules

AntibodyResponseassays

Immuno-Stimulants

WP2.2-2.3

WP2.4

WP3.2

WP10.1

WPs1-2

WP3.1+3.3

WP4.1-12.1

WP3.2+ WP13.1

Contributo alla divulgazione in acquacoltura:

LA RICERCA SCIENTIFICA INNOVATIVA IN ACQUACOLTURA: LA GENOMICA PER IL MANTENIMENTO DELLA SALUTE DELLE SPECIE ALLEVA

Elisa Randelli, Daniela Casani, Francesco Buonocore, Giuseppe Scapigliati

Bollettino API, in stampa, 2006

RINGRAZIAMENTIRINGRAZIAMENTI

Lab di Biotecnologie AnimalLab di Biotecnologie AnimalUnivUniv. Della . Della TusciaTuscia, VT, VT

ScottishScottish FishFish ImmunologyImmunologyResearchResearch CentreCentre, Aberdeen , Aberdeen University, UKUniversity, UK

ICRAM, RomaICRAM, Roma

M.I.P.AM.I.P.A, 4C, 5C, 4C, 5C

EU 5FP FISHAID EU 5FP FISHAID EU 6 FP IMAQUANIMEU 6 FP IMAQUANIM

Nuova Azzurro, Nuova Azzurro, CivitavecchiaCivitavecchia