high performa liquid chromatograph
TRANSCRIPT
HIGH PERFORMA LIQUID
CHROMATOGRAPH
Indriyanti Widya
Department of Pharmacy, Health Faculty
University of Darussalam Gontor
2016
HISTORICAL
Historically, high-performance liquid chromatography (HPLC) can be traced back to the amino acid analyzers of the early 1960s. By 1975, liquid chromatographic instrumentation was described in the United States Pharmacopeia.
Since that time, HPLC has become the most popular chromatographic technique in the pharmaceutical laboratory
DEFINITION
Merupakan teknik pemisahan senyawa dengan cara melewatkan senyawa melalui fase diam (stationary phase) dengan menggunakan fase gerak (mobile phase) mengaliri semua ini
Senyawa dalam kolom akan keluar dari kolom atas dasar kepolaran yang berbeda, sehingga akan mempengaruhi kekuatan interaksi senya-wa dengan fase diam dan fase gerak
Dari kromatogram dapat diidentifikasi waktu retensi (tR) dan luas area/tinggi puncak
Kedua hal ini berguna untuk : analisis kualitatif digunakan informasi tR, analisis kuantitatif digunakan informasi luas area/tinggi puncak kromatogram
QUANTITATIVE AND QUALITATIF ANALYSIS
USABILITY HPLC
Pemisahan sejumlah senyawa organik, anorganik, maupun senyawa biologis
Analisis ketidakmurnian (impurities)
Analisis senyawa tidak mudah menguap (non volatile)
Penentuan molekul-moleku netral, ionik, maupun zwitter ion
Isolasi dan pemurnian senyawa
Pemisahan senyawa-senyawa yg strukturnya hampir sama
Pemisahan senyawa-senyawa dlm jml sekelumit (trace elements)
Menetapkan kadar senyawa-senyawa tertentu
EXCESS HPLC
KCKT dapat dipakai untuk senyawa non volatile dan senyawa berbobot molekul tinggi.
KCKT dapat dipakai untuk senyawa anorganik yg sebagian besar non volatile.
KCKT biasanya dilakukan pada suhu kamar sehingga aman bagi senyawa yg tidak tahan panas
Pada KCKT kemungkinan intaraksi antara fase gerak dan fase diam besar sekali (mencakup antaraksi ikatan hidrogen dan reaksi ion) proses pemisahan lebih optimal
Fase gerak pada KCKT dapat diubah dengan mencampur pelarut dalam berbagai gradient
Dapat digunakan untuk menganalisis beberapa senyawa sekaligus (secara simultan)
SHORTAGE OF HPLC
Sulit untuk mengidentifikasi senyawa, kecuali jika HPLC dihubungkan dg spektrometer massa
Jika sampel yang digunakan sangat kompleks, maka resolusi (pemisahan) yg baik sulit diperoleh
RESOLUTION
Tingkat pemisahan komponen dalam suatu campuran dengan metode kromatografi direfleksikan dalam kromatogram yang dihasilkan
Untuk hasil pemisahan yang baik, puncak-puncak dalam kromatogram harus terpisah secara sempurna dari puncak lainnya dengan sedikit tumpang tindih (overlap) atau tidak tumpang tindih
RESOLUTION Resolution is a measure of the effective separation of
adjacent analyte peaks.
Resolution of two peaks is aided by thermodynamic factors, which give rise to partitioning and separation (ie-K), and it is countered by kinetics, which can give rise to additional dispersion of a peak, making otherwise well separated peaks merge with each other.
COMPONENTS OF HPLC INSTRUMENTS
1.Wadah fase gerak
2.Sistem penghantaran fase gerak = Pompa
3.Alat utk memasukkan sampel
4.Kolom
5.Detektor
6.Wadah penampung buangan fase gerak
7.Tabung penghubung
8.Suatu komputer atau integrator atau perekam
CAUTION
Fase gerak sebelum digunakan harus dilakukan degassing (penghilangan gas)
Pelarut yang digunakan harus dengan kemurnian tinggi (HPLC grade)
SYUKRON