TP extraction des enzymes et synthèse enzymatique de

glucosides

Année Scolaire 2012/2013

TS

EXTRACTION DES ENZYMES ET SYNTHESE ENZYMATIQUE DE GLUCOSIDES

Aide fournie par les élèves du GLFL à l’Université de Grenoble

Protocole expérimental

_ Extraction des enzymes

_ Réaction de glycolisation

_ Identification des produits de synthèse

Groupe 1

Fruit choisi : Orange

Groupe 3

Fruit choisi : Amande

Groupe 4

Fruit choisi : Grenadine

Groupe 10

Fruit choisi : Poivron rouge

Groupe 11

Fruit choisi : Raisins

Groupe 12

Fruit choisi : Avocat

Groupe 13

Fruit choisi : Fève

Groupe 14

Fruit choisi : Citron

Groupe 15

Fruit choisi : Pomme

Extraction des enzymes

Il appartient à la famille Solancae

Fruit choisi: Poivron rouge

Filtrer sous pression réduite et mettre à l’étuve (40 ⁰C) pour éliminer l’acétate d’éthyle résiduel. On obtient ainsi une poudre de pépins dégraissé

_ Fabriquer une solution aqueuse S contenant 1 mL d’eau et 9 mL d’alcool benzylique.

_ Boucher et agiter.

_ Mélanger dans un tube à essais environ 1 g de poudre de pépins dégraissée, 0,3 g de glucose et 5 mL de la solution S.

_ Boucher et agiter.

_ Placer le tube à essai dans un bain marie à 45 °C pour 48 h.

Identification des produits de synthèses (Chromatographie sur couche

mince)

Et après la révélation à l’UV, puis au

permanganate de potassium (KMnO₄)

VOICI LES RÉSULTATS !

Groupe 3

Fruit choisi : Amande

Alcool Benzylique

Mélange réactionel

Glucose + Eau

Groupe 10

Fruit choisi : Poivron rouge

Groupe 12

Fruit choisi : Avocat

Alcool Benzylique

Mélange réactionel

Glucose + Eau

Les raisins:

Éluant utilisé : Mélange d’acétate d’éthyle et d’éthanol en proportion 9/1 Mélange réactionnel : 0,16g de poudre d’amande, 0.24g de glucose, 5 Ml de solution d’eau et d’alcool benzylique

Apparition d’un nouveau produit

synthétisé mais qui n’as pas migré.

Choisir un autre éluant.

Tache trop grosse pour la solution

d’acide benzylique et d’acétate d’éthyle : il faut diluer encore plus .

Résultats :

MR +

glucose

MR +

acétate

d’éthyle

+ alcool

benzyliq

ue

Éluant utilisé : Mélange d’acétate d’éthyle et d’éthanol en proportion 7/3 Mélange réactionnel : 0,16g de poudre d’amande, 0.24g de glucose, 5 Ml de solution d’eau et d’alcool benzylique

La tache a migré donc l’éluant est plus

propice. Il semble que les taches les

plus marquées sont celles de l’alcool

benzylique et celles peu visibles sont

celles du nouveau produit.

Les cas négatifs CAS DE LA POIRE:

RÉVÉLATION À LA LAMPE ULTRAVIOLETTE:

•PRÉSENCE DE DEUX TACHES À LA MÊME HAUTEUR

UNIQUEMENT

• PAS DE TACHE CORRESPONDANTE AU GLUCOSE

• PAS DE NOUVEAUX PRODUITS FORMÉS

Révélation au permanganate de potassium:

Une seule tache marron apparaît correspondant à la tache de l’alcool benzylique et l’acétate d’ éthyle dans le mélange réactionnel.

Il n’y a pas de nouveaux produits formés.

Des résultats imprévisibles

Un minimum de rigueur est nécessaire lors de la réalisation de la CCM

Présence d’une tache en dessous

de la ligne de dépôt Présence d’un nombre anormal

de taches

Cas Positifs Cas négatifs

Amande sèche? Ananas

Orange? Fève

Pomme? Citron

Raisin? Grenade

Poire

Poivron Rouge

Pomelo

Prune

Tomate

Avocat?

Fraise?

Conclusion

Merci