观察性和无菌培养技术实验 -...
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书书书
观察性和无菌培养技术实验
实验一 显微镜下的生命世界
实验二 培养基制备和灭菌技术
实验三 细菌的简单染色和革兰
氏染色
实验四 常见食物营养成分的
鉴定
实验五 草履虫的形态结构与生
命活动
实验六 果蝇的形态、生活史和
饲养技术
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显微镜下的生命世界
实验目的
◇了解普通光学显微镜的构造和各部分的性能,学习并掌握其正确的使用及维护
方法。
◇了解真核细胞的各种形态及其形态与机能的关系,理解细胞是生命体结构与生
命活动的基本单位。
◇了解真核细胞与原核细胞、动物细胞与植物细胞结构的异同点。
◇在显微镜下观察水中的各种微小生物,认识常见的细菌和真菌,进一步认识生
命的多样性。
◇学习临时装片方法、某些细胞器的活体染色方法和细菌的一般染色方法。
◇了解生物绘图的意义和方法,初步学习生物绘图技术。
一、实验原理
生命的存在具有多层次性。从宏观角度来看,在个体水平上,千姿百态的动、植物
强烈地表现出的生命多样性,使整个大自然显得生机盎然、绚丽多彩。然而,随着显微
镜的发明和显微技术的发展,人们的观察进入生命的微观世界后,不仅看到了肉眼所
不能见到的形形色色的单细胞生物和低等多细胞生物,而且越来越深刻地认识到所有
宏观生物都是多细胞生物,细胞是除病毒以外所有生命体结构与生命活动的基本单
位,同时其自身又是多层次的复杂结构体系。
生物细胞可分为原核细胞和真核细胞两大类。原核细胞由细胞膜、细胞质和核物
质等部分组成,不具有典型的细胞核结构及多种细胞器,如细菌细胞。真核细胞由原
核细胞进化而来,其内部结构与机能更复杂和多层次化。在结构上,真核细胞突出表
现为以膜系统的分化为基础,形成了有膜包围的典型细胞核和结构与功能更专一的多
种细胞器,如线粒体、高尔基体、内质网、溶酶体、叶绿体及液泡等。并且,构成真核生
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第一模块
物的真核细胞种类繁多,形态各异,其形态的多样性又与其机能密切相联。
在显微镜下观察生命世界,使人们进一步认识到生命的多样性、层次性和整体性,
进一步认识到细胞的结构,以及其形态结构与机能的密切联系。
细胞内的结构在自然状态下近于无色,一般要经过染色后方可在普通光学显微镜
下显示得较清楚,这样便能形成足够的反差以区分细胞组分。不同的细胞组分对各种
染料的亲和力不同。两者间亲和力强,染色就深,否则,染色就浅或无染色。一般生物
染料不能穿透细胞膜,只有用化学试剂或热固定细胞,破坏细胞膜结构后,染料才能进
入细胞内部发挥其染色作用。有些染色剂对细胞无毒或毒性很小,并能进入活细胞内
染色,显示活细胞的某些结构,称活体染色。活体染色分体内活染和离体活组织染色
两种,体内活染是使染料进入生物体内进行染色,离体活组织染色是对离体但仍保持
生活状态的活细胞进行染色。
二、实验材料
人口腔黏膜细胞、新鲜菠菜叶、洋葱鳞茎、颤藻和池塘水,酿酒酵母菌悬液、枯草芽
孢杆菌斜面、金黄色葡萄球菌斜面、放线菌培养物、根霉培养物和平菇斜面,生霉的面
包、馒头或橘皮。
各种动植物组织器官切片标本,细菌三型制片标本,青霉素制片标本及酵母菌制
片标本。
三、实验器材与试剂
(一)器材
普通光学显微镜,放大镜,解剖器械,接种环,消毒牙签,载玻片,盖玻片,吸水纸,
擦镜纸和酒精灯。
(二)试剂
醋酸洋红染液、0.1mol·L-1稀碘液、0.1%碱性湖蓝BB、中性红·詹纳斯绿染液、
乳酸石炭酸棉蓝染色液、石炭酸复红染色液、0.1%美蓝染色液、50%乙醇、香柏油、二
甲苯和0.85%生理盐水。
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显微镜下的生命世界
四、实验操作
Ⅰ.光学显微镜的使用
(一)光学显微镜的构造
显微镜的种类繁多,结构也很复杂。但是无论哪一种显微镜,按其结构特点均可
分为机械装置和光学系统两大部分(图11)。
图11 显微镜的外形
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第一模块
!.机械装置
显微镜的机械装置是由精密而牢固的零件组成,主要包括镜座、镜臂、载物台、镜
筒、物镜转换器和调焦装置等。
(1)镜座 显微镜的基座,用以支持整个镜体的平稳。
(2)镜臂 其作用是支持镜筒、载物台、聚光器和调焦装置等。
(3)载物台 镜臂基部的一个方形或圆形的平台,可放置玻片标本。台中央有一
个通光孔。台上有的装有标本片夹,有的装有带有标尺的标本移动器,游标尺可用来
测量标本的大小和标记被检部分。
(4)镜筒 显微镜上部圆形中空的长筒。上端放置目镜,下端连接物镜转换器。
其作用是保护成像的光路与亮度。
(5)物镜转换器 固着在镜筒的下端,可以左右自由转动,有3~4个螺旋圆孔,为
安装物镜的部位。旋转转换器,即可把所需倍数的物镜固定在使用的位置上,使物镜
与目镜的光线合轴。
(6)调焦装置 为了得到清晰的物像必须调节物镜与标本之间的距离,使其与物
镜的工作距离相等,这种操作称为调焦。在镜臂两侧有大小调焦螺旋各一对,旋转时
可使镜筒上升或下降。大的一对是粗调焦螺旋,调动镜筒的升降距离大,旋转一周可
使镜筒移动2cm左右;小的一对是细调焦螺旋,调动镜筒距离小,旋转一周可使镜筒移
动约0.1~0.2mm。
(7)聚光器调节螺旋 在镜柱的左侧或右侧,旋转它时可使聚光器上下移动,借以
调节光线,但简单的显微镜没有这种装置。
(8)倾斜关节 为连接镜柱与镜臂的关节,可使镜体在一定范围内后倾便于观察,
但复杂的显微镜没有这种装置。
".光学系统
显微镜的光学系统主要包括物镜、目镜和照明装置。
(1)接目镜 装于镜筒上端,放大倍数通常有5×,10×,16×等几种,一般常用10×。
(2)接物镜 装于镜筒下端的物镜转换器上,通常有10×,40×,100×(油浸物镜)
等几种。物镜和目镜配合所取的乘积如表11所示。
(3)聚光器 位于载物台下面,由集光镜(一组透镜)和虹彩光圈组成。可以聚集
由反光镜反射来的光线,通过调节高低而得到强度不同的光线。光圈位于聚光器中
央,由许多铜片组成,有一操纵柄,可用铜片分开或聚合而使光圈放大或缩小,以便控
制透入的光线。根据光线的强弱,适当调节光圈,可以增加物像清晰度。
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显微镜下的生命世界
表11 物镜和目镜配合所取的乘积为放大倍数
目
镜
放大倍数
物 镜5× 10× 16×
10× 50× 100× 160×
40× 200× 400× 640×
注:“×”代表倍数。
(4)照明装置 主要为反光镜(或内置光源)。反光镜为聚光镜下面的一双面镜,
镜分平凹两面,可以任意方向转动,其功能是将光源射来的光线,反射到聚光器,再射
出镜筒。平面反射平行光线,宜于强光下使用;凹面反射集中成束的光线,宜于弱光下
使用。
(二)光学显微镜的使用方法
!.安装
根据实验需要装配适当的物镜和目镜,调节聚光器的光栏,使数值孔径等于物镜
的数值孔径。
".低倍镜的使用
总的原则是“先低倍,后高倍;先接近,后渐离”。“先低倍,后高倍”指观察任何标
本都必须先用低倍镜,因低倍镜的视野大,容易发现目标和确定观察部位。先用低倍
镜找到清晰物像后,用手移动转换器,直接换高倍镜即可。“先接近,后渐离”指将所观
察的标本放置在载物台上,转动粗调螺旋使低倍镜镜头与玻片标本的间距很小,边观
察边用粗调螺旋慢慢升起镜筒(或下降载物台),直至物像出现后再用细调螺旋调节至
物像清晰为止。具体步骤如下:
(1)检查 右手握镜臂,从镜箱内取出显微镜,左手托镜座,轻轻放在实验桌上。
先检查一下显微镜各部件有无损坏,如发现有损坏或性能不良,立即报告教师请求
处理。
(2)准备 将显微镜放于前方略偏左侧,必要时使镜筒倾斜(有的显微镜本身已经
倾斜)以便观察。转动粗调节螺旋,将镜筒略升高使物镜与载物台距离略拉开。再旋
转物镜转换器,将低倍镜对准载物台中央的通光孔(可听到“咔哒”声)。
(3)对光 打开光圈,上升聚光器,双眼同时睁开,以左眼向目镜内观察,同时调节
反光镜的方向,直到视野内光线明亮均匀为止。由于反光镜的平面镜易把其他景物映
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第一模块
入视野,因此一般用凹面镜对光;用内置光源时,使用光亮调节器调光。
(4)放标本片 标本片的盖片朝上,将标本片放到载物台前方,然后推到物镜下
面,用压片夹压住,如有标本移动器,可用上面的弹簧夹夹住标本片,然后把要观察的
部分移到通光孔的正中央。
(5)调节焦距 总的原则是“先接近,后渐离”。先接近即从显微镜侧面注视物镜
镜头,同时旋转粗调节钮,使镜筒缓慢下降(或使载物台缓慢上升)至低倍镜头与玻片
间距离5mm左右。后渐离即再用左眼从目镜里观察视野,左手慢慢转动粗调节螺旋,
使镜筒缓缓上升(或使载物台缓慢下降),使低倍镜头与玻片间的距离逐渐增大至视野
中出现物像为止。如物像不太清晰,可转动细调节螺旋,使物像更加清晰。
(6)计算倍数 由所用的目镜放大倍数与物镜放大倍数相乘,就能算出物像与原
物的放大倍数。例如:5×的目镜和10×的物镜所放大的物像,是原物的5×10倍,即
50倍。如果物像不在视野中央,就得一边观察,一边用手移动玻片。选择一个适当的
部分移至视野的中央。镜中所成的像是倒像,玻片移动方向应与物像移动方向相反。
如果按上述操作步骤仍看不到物像时,可能由以下原因造成:
第一,转动调节螺旋太快,超过焦点。应按上述步骤重新调节焦距。
第二,物镜没有对正,应对正后再观察。
第三,标本没有放到视野内,应移动标本片寻找观察对象。
第四,光线太强,尤其是在观察比较透明的标本片或没有染色的标本时,易出现这
种现象,应将光线调暗一些后,再观察。
#.高倍镜的用法
(1)依照上述操作步骤,先用低倍镜找到清晰物像。
(2)将需要观察的部分移到视野的中央。
(3)眼睛从侧面注视物镜,用手移动转换器,换高倍镜。
(4)眼睛向目镜内观察,同时微微上下转动细调节螺旋,直至视野内看到清晰的物
像为止。
如按上述操作仍看不到物像时,可能由下列原因造成:
第一,观察的部分不在视野内,应在低倍镜下寻找到后,移到视野中央,再换高倍
镜观察。
第二,标本片放反了,应把标本片放正(盖玻片向上)后,再按上述步骤操作。
第三,焦距没调好,应仔细调节焦距。
有的显微镜高倍镜与低倍镜不配套,从低倍镜转换高倍镜时,往往转不过来或撞
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显微镜下的生命世界
坏标本,如遇到这种情况,可把镜筒略升高(或下降载物台),直接用高倍镜调焦。方法
是:从侧面注视物镜,调节粗调节螺旋,使高倍镜头下降至与标本片最短距离,再观察
目镜视野,慢慢调节细调节螺旋,使镜头缓缓上升,直至物像清晰为止。
如需要更换标本片时,应该先把镜筒升高(或使载物台下降),然后把标本片移到
载物台前方,再取下。
$.油镜的使用方法
(1)先用低倍物镜观察标本的概况。
(2)更换高倍物镜,把所要观察的部分移在视野中央。
(3)把镜筒上升约1.5cm,再把油镜转到工作位置。
(4)在盖玻片上所要观察的位置滴一小滴香柏油,细心拧动粗调螺旋,使镜筒慢慢
下降(或载物台慢慢上升)。这时要从侧面仔细观察物镜前端与标本之间的距离,先使
物镜前端与油滴接触,然后再慢慢下降镜筒(或慢慢上升载物台),直至物镜前端接近
而没有碰到盖玻片为止。这步操作要特别小心,防止油镜压碎标本或损坏油镜(油镜
的工作距离约0.2mm)。
(5)眼睛从目镜中观察,拧动细调螺旋,使镜筒慢慢上升(或载物台慢慢下降)至能
看清标本。这步操作要特别注意不要把细调螺旋的方向拧错,以防压碎标本。
(6)观察完毕后,提升镜筒(或下降载物台)约1cm,把油镜转离光轴,及时做好清
洁工作。先用干的擦镜纸擦1~2次,把大部分油去掉,再用二甲苯滴湿的擦镜纸擦两
次,最后再用擦镜纸擦一次。擦拭时要顺镜头的直径方向,不要沿镜头的圆周擦。擦
拭要细心,动作要轻,不可用力擦,如果聚光器上有油滴也要同样清洁。载玻片上的油
可用“拉纸法”擦净,即把一小张擦镜纸盖在载玻片油滴上,在纸上滴一些二甲苯,趁湿
把纸往外拉,这样连续操作3~4次,即可清除油渍。
(7)把聚光器下降约1cm,把物镜转离光轴,使镜筒下端正好对在两个物镜之间。
下降镜筒或载物台至原来位置,把载物台上的标本移动器移到适当位置,把反光镜转
到垂直方向(或关闭内置光源开关)。
Ⅱ.细胞的形态结构
(一)真核细胞形态的观察(示范)
显微镜下观察各种动植物组织器官切片标本,了解不同组织细胞的形态特征以及
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第一模块
与其功能的关系(图12)。
图12 形状不同的细胞
(引自吴敏,2001)
!.人血涂片
观察成熟的红细胞、各类白细胞形态。观察人的成熟红细胞的形态特征,该特征
与其携带O2和CO2的机能有何联系?
".平滑肌切片
观察动物平滑肌细胞形态结构特征,该特征与其收缩机能有何联系?
#.小肠横切片
观察小肠壁内表面单层柱状上皮细胞形态结构特征,该特征与其吸收机能有何
联系?
$.兔脊髓横切片
观察脊髓灰质前角运动神经元,试述神经元胞突适应接受刺激和传导神经冲动的
形态特征。
%.小白菜下表皮平铺片
观察表皮细胞的形态及表皮上两个肾形保卫细胞围成的气孔。思考叶表皮气孔
与蒸腾作用、气体出入机能的关系。
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显微镜下的生命世界
(二)动物细胞的结构
!.口腔黏膜细胞涂片标本的制备与观察
(1)人口腔黏膜细胞涂片标本的制备 吸取醋酸洋红(或碘液),滴一滴于干净载
玻片中央,将消毒牙签粗的一端伸入口腔,在口腔颊内壁上轻轻刮取黏膜上皮细胞,将
刮下的白色粘性物质放入载玻片上的染液内,分散均匀。染色10~30分钟后,盖上盖
玻片,即用镊子夹取盖玻片的一侧,将另一侧边缘先接触载玻片上的染液,然后将整块
盖玻片慢慢盖上,注意两玻片之间不要有气泡。若盖玻片周围的染液过多,可用吸水
纸吸去盖玻片边缘多余的染液。
(2)观察 将以上制备的标本片置于显微镜载物台上,有盖玻片的一面向上。用
标本移动器的卡片卡紧,并转动标本移动器的螺旋,移动标本片,使待观察的材料处于
物镜正下方。在低倍镜下,可见人口腔黏膜上皮细胞呈扁圆形或扁平多边形。再寻找
较分散、轮廓清晰的单个细胞,移至视野中央转高倍镜观察。高倍镜下,可见细胞外仅
有一大致可辨的细胞界限,即细胞膜。扁圆形细胞核呈鲜红色(如用碘液染则为深黄
色),位于细胞中央或近中央,细胞质为浅红色(或浅黄色)。
".人口腔黏膜细胞线粒体活体标本的制备和观察
取3~4滴中性红·詹纳斯绿染液于一干净载玻片中央。用消毒牙签刮取口腔颊
黏膜细胞,用力稍重点,以获得生活力较旺盛的细胞。将刮取物置于载玻片上的染液
中,混匀,盖上盖玻片,2~3分钟后置显微镜下观察。
先用低倍镜然后用高倍镜观察。在高倍镜下,可见颊黏膜细胞的细胞质中,散布
一些被染成亮绿色的短杆状和圆形颗粒,此为线粒体。
(三)植物细胞的结构
!.洋葱鳞片表皮细胞临时装片标本的制备与观察
(1)临时装片的制备 取一干净载玻片,滴一滴碘液在玻片中央。用尖头镊子从
洋葱肉质鳞片内表面撕下一小块膜质表皮,平铺在载玻片的碘液滴上,用解剖针将其
轻轻压入液滴中,使之展开,盖上盖玻片(操作同上)。用吸水纸吸去盖玻片周围多余
的碘液。
(2)观察 将制备好的装片标本置于显微镜下观察。先用低倍镜观察,可见许多
长柱状细胞排列整齐,彼此相联。选择其中一个较典型的细胞移至视野中央,再转换
高倍镜观察。
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第一模块
在高倍镜下可见细胞最外面为一层棕黄色较厚的结构,即细胞壁。细胞壁以内是
着色较浅、近于透明的细胞质。细胞质内有一个或几个、或大或小的透明液泡,在细胞
中央或靠近细胞壁,有一个椭圆形细胞核。调节细调螺旋,可见核内有1~2个染成棕
黄色、折光较强的核仁。细胞质外围有一薄层细胞质膜,但在光镜下不易分辨。
".菠菜叶肉细胞叶绿体的观察
取一新鲜菠菜叶片,用镊子撕去一小块下表皮,用小刀轻轻刮取表皮以内的叶肉
细胞,置于载玻片的水滴中,分散均匀,盖上盖玻片,制成菠菜叶肉细胞临时装片标本。
将所制标本装片置于显微镜下,先用低倍镜再转用高倍镜观察,注意叶肉细胞内叶绿
体的形态和数目。
(四)原核细胞的结构
!.制备临时装片
取新鲜颤藻,用解剖针挑少许丝状体,置于载玻片上的水滴中,使藻丝分散后,用
吸水纸将水吸去。再加一滴0.1%的碱性湖蓝BB溶液,染色1~2分钟,盖上盖玻片。
".观察
将所制装片置低倍镜下观察,可见颤藻的藻丝由单列细胞组成,细胞呈短圆柱状
或盘状,藻丝顶端细胞呈帽状。选择其中较清晰的细胞,转高倍镜观察。可清楚地看
到细胞内呈深蓝色的中央体,在细胞壁以内,中央体四周未着色的是周质。
Ⅲ.一滴池塘水中的微小生物
生命科学是实验科学,同时也是发现科学。我们知道水是无色、无味、透明的液
体。但有的水体,特别是富营养化的水体往往呈现蓝绿色、红色等颜色,而且发出很臭
的气味,这样的水体含有害物质,不能饮用。这是什么原因造成的呢?天然情况下,江
河湖泊中大型水体生物物种丰富。鱼类为什么不断长大呢?通过本次实验,我们将有
所理解,有所收获。
一滴池塘水中含有众多的微小生命,它们大多因个体微小而无法用肉眼识别,必
须借助显微镜才能观察清楚。镜下可见,水中微小生物种类繁多有单细胞植物和动
物,也有低等多细胞生物。它们是水生生物的重要组分,也是池塘生态系统食物链的
重要一环。
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显微镜下的生命世界
(一)制备临时装片
用浮游网到池塘采集水生生物样品,分装成两瓶,一瓶按100mL样品加入1.5mL
鲁哥氏液的比例进行固定(鲁哥氏液:6g碘化钾溶于20mL水中,溶解后加入4g碘,充
分摇动待碘完全溶解后再加80mL水,溶液即配制完成)。另一瓶不固定,采样后立即
观察(一般不能过夜,因为时间越长,藻类植物就越少,浮游动物种类也就越少,但优势
种明显,而且个体也越大)。
用滴管吸取池塘水水样一滴于载玻片中央,慢慢盖上盖玻片,制成临时装片,置于
显微镜下观察。
学生观察两种方法获得的水样,结果有何不同。
(二)池塘水中的藻类植物
!.兰藻门
(1)颤藻属(犗狊犮犻犾犾犪狋狅狉犻犪) 植物体为不分支单列细胞的丝状体,每个细胞圆筒形
丝状体外有一极薄不易看到的胶鞘。注意丝状体是否有前后伸缩和左右摆动的现象。
在丝状体上常出现死细胞,死细胞呈双凹形,将丝状体分为几段,每一段为一藻殖段
(连锁体),藻殖段可长成新丝状体(图13)。
(2)螺旋藻属(犛狆犻狉狌犾犻狀犪) 单细胞或多细胞组成丝体、无鞘、圆柱形,呈疏松或紧
密而有规则的螺旋状弯曲。细胞或藻丝顶部常不尖细,横壁常不明显,不收缢或收缢,
顶细胞圆形,外壁不增厚(图14)。
图13 颤藻
图14 螺旋藻
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第一模块
(3)念珠藻属(犖狅狊狋狅犮) 念珠藻为球状或片状的胶质群体,呈蓝绿色或蓝黑色。
图15 念珠藻属
显微镜下观察:看到在胶质内埋有许多由圆形
细胞连成的弯曲藻类。在藻丝上除营养细胞
外,尚有异形胞。异形胞的内部物质较均匀透
明、易识别,两个异形胞之间的藻丝,称为藻殖
段(图15)。
(4)鱼腥藻属(犃狀犪犫犪犲狀犪) 植物体为单一
丝状、不定形胶质块或柔软膜状。藻丝等宽或
末端尖细,直线或不规则的螺旋状弯曲状。细
胞呈球形或桶形。孢子一个或几个成串,紧靠
异形胞或位于异形胞之间(图16,17)。
图16 鱼腥藻属 图17 鱼腥藻
".绿藻门
(1)小球藻属 为淡水中最常见的单细胞藻类。在低倍视野中,它们像绿色的小
点单独或群聚成团。换高倍镜观察,小球藻为圆形或准椭圆形,细胞内有一个杯形载
色体。
(2)衣藻属 也是常见单细胞藻类。先低倍镜后高倍镜观察,可见细胞呈卵形、椭
圆形或圆形,细胞壁较厚,胞内也存在载色体。与小球藻最大的不同是其体前端有两
根鞭毛,能游动。
(3)空球藻属 群体球形或卵形,由16、32或64(常为32)个细胞组成,群体细胞
彼此分离,排列在群体胶被的周边,群体胶被表面平滑或具胶质小刺,个体胶被彼此融
合。细胞球形、壁薄,前端向群体外侧,中央有2条等长的鞭毛,基部有2个伸缩泡。
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显微镜下的生命世界
色素体杯状,仅有一个种,其色素体为长线状,有1个或数个蛋白核。眼点位于细胞前
端(图18)。
图18 空球藻
(4)盘星藻属 植物体为盘状或星状,浮游,由2~128个细胞排列成为一层细胞
厚的定形群体,群体完整无孔或有穿孔,边缘细胞常有1、2或4个突起,有时突起上有
长的胶质毛丛,群体内部细胞多角形,无突起。细胞壁平滑无花纹,或有颗粒、细网纹。
幼小细胞的色素体周生、圆盘状,随细胞成长而扩散;成熟细胞具1,2,4或8个细胞核
(图19,110)。
图19 单突盘星藻 图110 双突盘星藻
(5)水绵属 取水绵少许,放置于玻片水滴中,盖上盖玻片,置于显微镜下观察。
植物体是由长筒形细胞连成的不分支的丝状体,每个细胞内有一条或数条呈带状
的色素体,呈螺旋形绕于原生质体外围,上有一列淀粉核。细胞核由原生质联络丝将
其与周围的原生质连着,细胞中有一大液泡(图111)。
取水绵接合生殖制片,观察水绵接合生殖情况。(示范)
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第一模块
图111 水绵属的生活史
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显微镜下的生命世界
#.硅藻门
在显微镜的低倍视野中还可以看到一类形状比较特殊的单细胞藻类———硅藻(图
112)。它们的形状多样,有圆形、新月形或弓形等,但细胞壁是由两个瓣片套合而成
的,转高倍镜观察,可见瓣面上有花纹。硅藻在海水尤其是淡水中分布普遍,是鱼类和
很多其他水生动物的食物,硅藻死亡后,其细胞壁形成的硅藻土有多种工业用途。
图112 池塘水中的部分硅藻
(三)池塘水中的微小动物
!.绿眼虫
眼虫是单细胞生物 在低倍镜下观察,可看到许多绿色游动的小虫子,这就是眼
虫(图113(f),图114(a))。找到一个游动缓慢的眼虫,移至高倍镜下观察可见,眼虫
的前端钝圆,后端尖削,虫体前端有一个红色的眼点,细胞内有许多绿色的椭圆形小体
———叶绿体,因此身体呈绿色,并因这两个特征被称为绿眼虫。将光线调得暗些,可看
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第一模块
见虫体的前端有一根鞭毛在不停地摆动,正是这根摆动的鞭毛带动身体运动。
".喇叭虫
在低倍镜下移动装片,寻找单细胞动物喇叭虫(图113(c),114(b))。其虫体可
伸缩,伸展时,体呈喇叭形;体表有成行的纤毛,口围有一圈口缘小膜带,顺时针旋至口
旁。多数种类的大核呈念珠状或长棒状;小核多个、极小。
图113 池塘水中的部分微小生物
(引自吴敏,2001)
#.钟虫
在低倍镜下继续寻找钟虫(图113(d),114(c))。钟虫形体似倒置的钟,钟口边
缘有纤毛,纤毛不停地快速摆动,虫体其他部分无纤毛。反口端有一柄,钟虫凭借柄附
于水草或其他物体上,轻触载玻片,可见柄能伸缩。钟虫是单细胞动物。
$.大草履虫
在低倍镜视野中,继续寻找较眼虫稍大的单细胞动物———大草履虫(图113(g),
114(j))。草履虫一般运动迅速,为了限制草履虫的游动以便观察,制作装片时,将少
许棉花撕松,铺在载玻片上,滴一滴池塘水,盖好盖玻片。如果草履虫运动仍很迅速,
可将吸水纸放在盖玻片的一侧吸去部分水(注意不要吸干)再进行观察。
在低倍镜下可见虫体酷似倒置的草鞋底。将光线调暗一些,可看到虫体满覆纤
毛,不时地摆动。
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显微镜下的生命世界
%.轮虫
轮虫是体型极小的多细胞动物。在低倍镜下观察,虫体前端呈轮盘状,沿轮盘边
缘丛生着纤毛,纤毛不停地摆动,使虫体运动。身体中部即躯干部膨大,其内是内脏。
躯干部向后渐削细,为足部。调节标本移动器,将轮虫的足部移至视野中央,其足末端
有细细的趾附着于玻片或其他物体上(图113(h),114(d))。
&.常见的其他部分微小动物
如水蚤(图114(e)、(f)、(g)),球虫(图114(h)、(i))。
图114 池水中的部分微小动物
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第一模块
Ⅳ.常见的细菌和真菌
细菌属原核生物,一般直径在1μm(10-6m)左右,需借助显微镜来观察,细菌形态
千差万别,但基本形态可分为球状、杆状和螺旋状三种(图115(a))。丝状原核生物放
线菌由分支发达的菌丝组成,根据菌丝的形态和功能又可分为营养菌丝(基内菌丝、基
质菌丝)、气生菌丝和孢子丝三种(图115(b))。
霉菌、酵母菌以及蘑菇等均是真菌,属真核生物。霉菌菌体由菌丝构成,菌丝呈管
状,直径约2~10μm,在固体培养基上,部分菌丝伸入培养基内吸收养料,称为营养菌
丝;另一部分则向空中生长,称为气生菌丝;有的气生菌丝发育到一定阶段,分化为繁
殖菌丝(图115(c))。酵母菌是一类单细胞的真核微生物,一般呈卵圆形、圆形、圆柱
形或柠檬形(图115(d)),大小约(1~5)μm×(5~30)μm,最长可达100μm。蘑菇是
大型真菌(图115(e))。
(一)细菌类
!.观察细菌三型制片标本
先在低倍镜下找到待观察的样品区域,并用标本移动器将其移至视野中央。然
后,将低倍镜移开,在待观察的样品区域滴一滴香柏油,再用油镜观察。注意识别球
状、杆状和螺旋状三种细菌形态,观察在细菌细胞中是否有明显的细胞核。观察完毕,
清洁油镜头。
".活菌形态观察(示范)
取两块载玻片各滴一滴生理盐水,用牙签分别挑取少量枯草芽孢杆菌和金黄色葡
萄球菌培养物,涂匀,盖上盖玻片,用相差显微镜观察。
#.采用印片法观察放线菌形态
(1)取样 用解剖刀将平板上的菌连同培养基切下一小块,菌面朝上放在一载玻
片上。
(2)印迹 取另一洁净载玻片置酒精灯火焰上微热后,盖在菌上,轻轻按压,使培
养物(气丝、孢子丝或孢子)粘附(“印”)在该载玻片的中央。
(3)固定 取下已印迹的载玻片,有印迹的一面朝上,通过微火2~3次固定,此时
用手摸载玻片反面,以不烫手为宜。
(4)染色 将印迹载玻片置水平位置,滴加石炭酸复红染液覆盖印迹,染色约1
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