Testprinzip: einstufiger Sandwich-Assay

Ru

BiotinyliertermonoklonalerAntikörper gegenHumaninsulin

Streptavidin-Mikropartikel

Humaninsulin in der Probe

Ruthenylierter monoklonalerAntikörper gegen Humaninsulin

9 Min. 9 Min.Ru Ru

Messung

ElecsysT InsulinTestbeschreibungElektrochemilumineszenz-Immunoassay (ECLIA) zur In-vitro-Bestimmung von Humaninsulin in Serum und Plasma

IndikationDie Insulin-Bestimmung im Serum wird im Wesentlichen bei Patienten mit Hypoglykämie-Symptomatik durchgeführt. Sie dient zur Ermittlung eines Glukose/Insulin-Quotienten sowie zur Abklärung von Fragestellungen bzgl. der Insulinsekretion. Obwohl die Suffizienz des Pankreas zur Insulinsynthese häufig über die Bestimmung des C-Peptids bewertet wird, kann auch hier auf eine Bestimmung des Insulins in der Regel nicht verzichtet werden. So können z.B. durch die therapeutische Verabreichung von Insulinen nicht humanen Ursprungs Insulin-Antikörper gebildet werden. In diesem Falle gibt die Konzen-tration von Insulin im Serum die freie und damit biologisch wirksame Menge des Hormons wieder, während die Bestimmung des C-Peptids die gesamte endogene Insulinsekretion des Patienten darstellt. Elecsys Insulin zeigt keine Reaktivität auf die Insulinanaloga Lispro, Aspart und Glargin. Eine zu niedrige Konzentration von freiem, biologisch aktivem Insulin kann zur Entwicklung eines Diabetes mellitus führen. Andererseits ist eine autonome, nicht regulierte Insulinsekretion in der Regel die Ursache für eine Hypoglykämie. Der Zustand wird durch Hemmung der Glukoneogenese ausgelöst, z.B. infolge schwerer Leber- oder Nierensuffizienz, Inselzelladenom, Karzinom oder als Hypoglycaemia factitia.1-9

Schritt 1 (9 Minuten):20 μL der Patientenprobe werden mit einem biotinylierten monoklonalen Antikörper und einem mit Ruthenium-Komplex markierten Antikörper inkubiert, beide gegen verschie-dene Humaninsulin-Epitope. Es bildet sich ein Sandwich-Immunkomplex, wobei das Insulin einen biotinylierten und einen ruthenylierten Antikörper trägt.

Schritt 2 (9 Minuten):Nach Zugabe der Streptavidin-beschichteten Mikropartikel wird der Sandwich-Komplex über die Wechselwirkung von Biotin mit Streptavidin an die Festphase gebunden.

Schritt 3 (Messung):Das Reaktionsgemisch wird in die Messzelle überführt, wo die Mikropartikel auf der Ober-fläche der Elektrode magnetisch fixiert werden. Anschließend werden die ungebundenen Sub-stanzen entfernt. Durch Anlegen einer Span-nung wird die Lumineszenzreaktion erzeugt. Dabei wird Licht emittiert und über einen Photomultiplier gemessen. Die Signalstärke verhält sich proportional zur Analytkonzentra-tion in der Probe.

Roche Diagnostics Deutschland GmbHSandhofer Straße 11668305 Mannheimwww.roche.de

COBAS, COBAS E, ELECSYS, LIFE NEEDS ANSWERS und MODULAR sind Marken von Roche.

© 2012 Roche Diagnostics. Alle Rechte vorbehalten.

06923321990 ➀ 1112 -

Roche Diagnostics (Schweiz) AGIndustriestrasse 7CH-6343 Rotkreuz, ZGwww.roche.ch

Roche Diagnostics GmbHEngelhorngasse 3A-1211 Wienwww.roche.at

ElecsysT Insulin Test-CharakteristikaTestdauer 18 MinutenTestprinzip einstufiger Sandwich-AssayKalibration 2-PunktProbenmaterial Serum

Li-Heparin, K3-EDTA-NatriumzitratplasmaHämolyse stört

Probenvolumen 20 μLNachweisgrenze 0,20 µU/mL (1,39 pmol/L)Messbereich 0,20–1.000 µU/mL (1,39 – 6945 pmol/L)Rückführbarkeit 1. IRP-WHO-Referenzstandard 66/304 (NIBSC)Zwischenpräzision (CLSI)(Reproduzierbarkeit)

Elecsys® 2010 Analyzer, cobas e 411 Analyzer:2,5 – 2,8 % (6,36 – 747 µU/mL)

ModulAr AnAlytics E170, cobas e 601 Module,cobas e 602 Modul: 2,4 – 4,9 % (5,93 – 339 µU/mL)

Referenzbereich* bei nüchternen, gesunden Menschen5.– 95. Perzentile

2,6 – 24,9 μU/mL (17,8 – 173 pmol/L)

* Jedes labor muss die Übertragbarkeit der Referenzwerte auf seine eigene Patientenpopulation überprüfen und bei Bedarf eigene Referenzbereiche erstellen. Falls unplausibel hohe insulin-Werte gemessen werden, wird eine Fällung möglicher Anti-insulin-Antikörper durch Polyethylenglykol (PEG) empfohlen.

BestellinformationenProdukt Inhalt BestellnummerElecsysT Insulin 100 Tests 12 017 547 122Insulin CalSet 4 × 1 mL 12 017 504 122 PreciControl Universal (2 Level) je 2 × 3 mL 11 731 416 190

literaturverweise1 Lang, D.A., Matthews, D.R., Peto, J., Turner, R.C. (1979). Cyclic oscillations of basal plasma glucose and insulin concentrations in human beings. N Engl J Med; 301:1023-

1027.2 Arnqvist, H., Olsson, P.O., von Schenck, H. (1987). Free and Total Insulin as Determined after Precipitation with Polyethylene Glycol: Analytical Characteristics and Effects of

Sample Handling and Storage. Clin Chem; 33(1):93-96.3 Clark, P.M. (1999). Assays for insulin, proinsulin(s) and C-peptide. Ann Clin Biochem; 36(5):541-564.4 Tietz, N.W. (1995). Clinical Guide To Laboratory Tests. 3rd ed. Philadelphia, Pa: WB Saunders Co: 366-367.5 Sapin, R., Le Galudec, V., Gasser, F., Pinget, M., Grucker, D. (2001). Elecsys Insulin Assay: Free Insulin Determination and the Absence of Cross-Reactivity with Insulin

Lispro. Clin Chem; 47:602-605.6 Sapin, R. (2003). Review: Insulin Assays: Previously Known and New Analytical Features. Clin Lab; 49(3-4):113-121.7 Sapin, R. (2002). The Interference of Insulin Antibodies in Insulin Immunometric Assays. Clin Chem Lab Med; 40(7):705–708.8 Owen, W.E. (2004). Cross-Reactivity of Three Recombinant Insulin Analogs with Five Commercial Insulin Immunoassays. Clinical Chemistry 50, No. 1.9 Package Insert, Elecsys Insulin, Roche Diagnostics 2011.