7/24/2019 Ekspresi overproduksi

1/5

Ekspresi (Bahan)

ATIII cDNA (phATII1-113) dikloning ke pBR322

Thrombin

Ani-h!man ATIII anisera and radioimm!ne

assa" grade bo#ine ser!m alb!min Na 12$ iodide and %"bond N

Elecrophoresis reagens

&' cells ild-"pe Bac!lo#ir!s DNA and hep*+ 133

Tiss!e c!l!re media and reagens

7/24/2019 Ekspresi overproduksi

2/5

BrATIII diekspresi dalam sel &' dandikenali oleh Anih!man ATIIIAniser!m !n!k mengkon,rmasiidenias dari proein Dilak!kanpeng!.ian kemamp!an ani-AT111anisera !n!k mengenal kompleks

dengan imm!nopresipiasi

7/24/2019 Ekspresi overproduksi

3/5

Ani-AT111 aniser!m diambahkan danmaerial imm!noreaci#e diink!basi denganproein A-sepharose lal! disenri'!gasi

&ampel lal! dilar!kan dalam &D& b!/er dandipecahkan dengan &D&-0AE dalam 1gel poliakrilamid 4ompleks erben!kdengan penambahan 12$I- hrombin ke

medi!m "ang dipanen dari BrATIII-1- danBrATIII-2-in'eced &' cells 4em!dian akandikenal oleh ani AT111 aniser!m

7/24/2019 Ekspresi overproduksi

4/5

E. coli e5pression hos B+21 (DE3) dig!nakan!n!k ekspresi "ang lebih baik dari rekombinan&ak-hir!log 4oloni &ak di!mb!hkan hingga 67-68 9D :n!k rekombinan p;9+D I6 saa 9D

mencapai 67-686 k!l!r didinginkan di s!h! 1$dera.a selama 3 meni dan diind!ksi dengan 1m< I0T

&eelah sel rekombinan p;9+D I B+ 21 dan

pET28a=B+21 diind!ksi6 mereka dis!spensi dalam0B& dan proein ekspresi dipecah di 12separaing gel 1 m< I0T "ang diind!ksi di B+21diideni,kasi dalam 12 &D&-0AE

7/24/2019 Ekspresi overproduksi

5/5

Optimalisasi komponen denganone factor-at-a-time

>akor seperi karbon dan nirogen dig!nakan !n!kopimalisasi komponen medi!m

Efek Karbon- dalam medi!m ?E6 D