Desarrollo de nuevas metodologías para determinación de capacidad antioxidante

de polifenoles

Ph.D. Elias Atala Riffo

Resumen de la evidencia científica de la relación entre consumo de frutas y verduras y disminución del riesgo de padecer enfermedades crónicas.

Boeing et al. Critical review: vegetables and fruit in the prevention of chronic diseases. Eur J Nutr. (2012) 51(6):637-63

FRUTAS & HORTALIZAS

(PFT)

Se han descrito más de 3000 polifenoles diferentes.

(n)ROO• + PhOH → (n)ROOH + PhO• / (n)ROO• + PhOH → (n)ROO− + [PhOH]•+

Transferencia de Hidrogeno (HAT) / Transferencia de Electrones (SET)

PhOH

ROO•

Acción antioxidante directa

ROOH

8

Método ORAC

C. López-Alarcón, E. Lissi, Free Radical Research, 39;7 (2005) 729–736.D. Di Majo et al. Journal of Food Composition and Analysis, 24 (2011) 265-269.

BLANCOANTIOXIDANTERADICAL LIBRE

Ensayos competitivos de un antioxidante (PhOH) y una molécula blanco (MB)

ROO.Ensayo ORAC

]XH[

]Estándar[

controlEstándar

controlXH

ABCABC

ABCABCORAC

Método ORAC:

(1)

(2)

(3)

(4)

9

Metodologías tipo ORAC

ORAC-Fl

Ampliamente utilizada.Creación de bases de datos

para una amplia variedad de frutas y verduras.

www.PortalAntioxidantes.com

H. Speisky et al. Journal of Agricultural and Food Chemistry, 12;60 (2012) 8851-8859.E. Pino, A. M. Campos, E. Lissi, International Journal of Chemical Kinetics, 35;10 (2003) 525–531.

Relacionados con la estequiometria de XH

frente a ROO●

Generación de tiempos de inducción por XH

ORAC-PGR

Cambios en la vi de consumo de PGR

Relacionado con la reactividad de XH frente a

ROO●

Estiman capacidad AOX a pH neutro

COOH

HO OO

Fluorescein (FL)

SO3H

HO OO

OH OH

Pyrogallol red (PGR)

COOH

HO OO

Fluorescein (FL)

SO3H

HO OO

OH OH

Pyrogallol red (PGR)

Diferentes moléculas blanco: Diferente información antioxidante

ER+

Producto de oxidación de PGR

Mecanismo de acción antioxidante indirecto de polifenoles

Aumento en la producción celular de enzimas antioxidantes

POLIFENOLES¿o metabolitos

oxidados?

XIC of -MRM (34 pairs): 300.961/150.900 Da ID: querc-1 from Sample 9 (Q Base) of p071015.wiff (Turbo Spray) Max. 2.1e6 cps.

0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 26 28 30 32 34 36 38 40 42 44 46 48Time, min

0.0

5.0e5

1.0e6

1.5e6

2.0e6

2.5e6

3.0e6

3.5e6

4.0e6

4.5e6

5.0e6

5.5e6

6.0e6

Inte

ns

ity, c

ps

36.32

29.86 39.87

1 2

4

5

6

7

8

9

10

11

123

0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50

0

200

2

-2000

12

11

109

8

76

5

4

3

1

m U

.A. 2

70 n

m

Time / min

PeakStructuralassignment*

Present in reduced Q preparation

1 isomer of protocatecuic acid (5) (not confirmed)

No

2 No

3 No

4 No

5 No

6 No

7 No

8No

9 Q isomer Yes

10 No

11 Reduced Quercetin(Q)

Yes

12 Not detected Yes

•Zhou & Sadik. J. Agric. Food Chem. 2008, 56, 12081-12091.

HO

OH

O

OH

OH

HO

OH

O

O

OH

OH

HO

HO

OH

O

OH

OH

O

O

OH

O

O

OH

HO

O

OH

OH

OH

O

OOH

HO

O

O

O

O

OOH

HO

H

OH

OH

O

O

OOH

HO

OH

HO

HO

O

O

O

C A

B

Estudio por cromatografía liquida de alta resolución y dilucidación estructural de los productos de oxidación de quercetina en medio básico. A: Cromatograma obtenido por DAD. B : Cromatograma obtenido por detección ESI-MS-MS. C: Asignación estructural de los peaks obtenidos por ambos métodos.

Agradecimientos:Universidad de Talca

Comité organizador PIEI-ESLab. AOX INTA-UCH

Lab. Radicales Libres PUC

Muchas gracias