chitin synthesis and inhibition: a revisit
TRANSCRIPT
���� ����� ��� ������ ���� ���� �� -.(431240/ �.//$�+"!( $/�$//.7���919
Chitin synthesis and inhibition: a revisit†Ephraim Cohen�Department of Entomology, Faculty of Agricultural, Food and Environmental Sciences, The Hebrew University of Jerusalem,Rehovot 76-100, Israel
(Rec
� CoUnivE-ma† BasUniv
� .
��������� ���� �� �� �� ����� ������������ ��������� ������������������ �������� �������������
�� �������� ����� ������� �� ��������� ��� ��� ���������� ��������� ����� �� ����� ������� � !�
� ����������� �� �������� ������������ ��� ������������ ������ �� ������ �������� ��� ��������
�� ���� ����� ������������� "��� ������������� ����� ����� ��� �������� ����� �� ����� ��� ���� ����� �� �����
��� #������� � � ���� ������������� ��� �� � ������ �� �������������� ������� �� �������� ��� ��������
������� ������� �� ��������� �������� ���� ������ ���������� ��� �� ������$��� �� ����� ���������
��� ���������� ��� ����� ���� ��� �� ���� ��������� ���������� "� ���� ���� ��� �� ������� ������� ��
�� �� ��������������� ��� ������������� ������ �� ���� �� �� ������������������ ���%�����&
����#�%��� ��� � ������ �� �� ����� �� ������ ����� �� �� ����� ��� ���� ��������� ��������� ���� ��
������ ���������& ���������� �� �� ��������� ���� ��� ��� ������� �� ��� ������& ��� ������������� ��
����� ����� ������ ���� ���������� ���� ������������ #������������� ��� ����������� ��� ����
�$������� ��� ��� �� ��� ���������� � � �� �������������� �� ���! ��� � ��� ��� �������� ��������!�
���� �� ������� ���������� ������� ��'����� �� ���������� � � �� �� ���� ��� ������ �����
��� ������� ��� ������� ������� "� ������ ��������� ��� ��( ������ �� ������ ����� �� �� ��� ��
�� �������� ����� � ������� �� ����� ����������� ��� ���������� �� ������ ���� �� ����� � ���� ��
������������� ��������� ������������� �� �� ������ � ��� ���� ����� �� �� �������� �� �����
������������� ��� ��� �$������ �� ��� ���� �� �� ���� �� ������ �� ���� ��� �������������
� )**+ ������ �� ������ ��� ����
,�������� ������� ������ ��������� ������ ������� ������ �������� �������� �
1 INTRODUCTION������� �� ������ �� ���� ������� �������
�� ��� �� �� ������ � ���� �������� � �� ���
�� ��� �� �������� �� � ���� ���� �� ���� ��
������� �� �� ���� � ����� �� � � � �������
����� � �� ����� � ������ � � � �� ��� ���
���� �� ������ � ��� �� �� ����� � �� ��� ��
���� �� �� ������ ������ �� � ����� �� ������
�� ��� �� ��� ������ �� ����� �������� � ����
����� �� �� ���� ���� �� ��������� ������ ��
������ ������ !� �� � ���� � �������� �� ���
���� �� ����� ����� �� "������� ��� �� ���� � ��
����� �� � �� ��� #��� �������� ���� ��
� ����� �� ����� �� ������ ��� ������ � ��
�� � ��� ������ � �� �� ��� ���� �� �����$
!��������� ���� �������� ����� �� � ������
����� �������� � �� ������ ��������� �� ��
���� ����%� �� ����� ����� � ��� �� �����
����� !� �� �� �� � ����� ���� ������� ���
������� ������� � ��� ����� ����� ��
���� ��� ��� ��� ������� �� ���������
����� �� ��� �� ������ ���������� ���� ����
���� �� �� �� ������� ������ ���� ������
eived 30 November 2000; revised version received 20 March 2001; a
rrespondence to: Ephraim Cohen, Department of Entomology, Facuersity of Jerusalem, Rehovot 76-100, Israelil: [email protected] on a paper presented at the Conference ‘Insect Toxicology 2000
ersity of California at Berkeley, USA, on 17–19 July, 2000
//$ )����� �� ������ !����� �� ���� ���� �� $0.1234567.
�������� �� ���������� �� �� �� �� � ����� ��
� ���� ���� ����� ���� ���� ������������ �����
#��� ���������� ���� �� ����� �� �� ��� �������
�� �&������ �� �� ����� �� ��� ����� ��
������ ����� �%��� � �����
2 CHITIN FORMATION'� ����� �� ������ �� ��� ��������� �� ������
������� ���������� ��� �������� � �� �� ����
������ �� ���������� ���� ����� �� �� ��� ���
��� �� �� ��� �� �� ��������� �� ������ �� �� ��
��� ��� ������� �� ���� � ���� � ������� ��
� �� ����� ��� �� �� �� ����� � ��� ���� ��
������ �'�� $�� #� ���� �� ���� ��������(
�� )&����� ���� ���� ������ �� ��� � ���� �
� ���� � ������ ��� ������ ������� �������
������� �� �� ����� �� �� ����� � *+,����������������
��� )������� �� ������ ������ ��)� ������ �������
�� ��� � ���������� � �� ��� ���� ����
���� ��� �� �� ��������� - �) ���� ��
ccepted 4 May 2001�
lty of Agricultural, Food and Environmental Sciences, The Hebrew
’, organized by John E Casida and Gary B Quistad, and held at the
//$789/�// 431
Figure 1. Events associated with chitinformation and deposition. (?)=exactmechanism unknown.
������ ��������� ��� ����������
�� �%�� ������ ����� �� � � �� ����� ��
������ ������������ �� � �������� #���
����� ������� ��� � ������� ��
����� ������ ����� � ���� � ������� �� ��
��� #� ������� ��� �� � ������� �� �� �����
���� ������ �������
��� #� � ��������� �� ����� � � ��� �� ����
��� �
�� � ������%���� �� ��� ��� �� �� ����� �� ��� �
���� ��� ��� �������
��� -��������� ���� ������� � ����� �� �� �����
� � ����� �� �� �� ����� ��� ����
, � �� �� ������ ���� ���� ������ �������� ��
��� �� ����� � �� ��������� ����� �)
������� -� �� � ����� �� ������ �� �����
�������� �� �� �� �� ������� �� �� ���� ��
� � ����������� ���� ����� �������
)�� �� �� � ����� ��� ��� ���� ���� � ��
�� ���� �������� �� �) ������ �� � �� ������
����� ��� �� ������� �� ����� #� ����
�������%� %������� �) �� � ����������� ����
���.�9 �� �� �� ���� ��� ������� �%��
�� ����� � �� ���� �� ������ ��� �� ���� ������� �� ������� ������2�������� ������ � �����
�� �� �%���9�3 :� ���������� �������� � ��
������� �� ����� �� ����� �� ������ ���� ��
���� �����
���� ���� �� ���431240/ �.//$�
2.1 Trafficking and insertion of CS units���������� ��� ������� �� �� ���������� ����
�) ������� �� �� ������� �� �� ���� ��
��� �� ��� ������ ������ ���� ����� �������0�1
#� ������ �� ���� ��������� ������ � ��
����� ���; ������� ��� �� �� �� � ��� ��� �� �)
����� �� ������ ��������� #�� ������� �����
� ����� � �� �� ��������� ������� �� ��
<����� ������ %������� �) ����� �� #� ���������
������� ��� ���� �� ���� ��� � �� �� �)
����� � ����������� �������9 #� �� ������ ��
�� ����� ���� �� �� �� ������ � ��������� � ���
�� ��� ��� ��� ���� ������� �������
���� � ����� �%���� ����� ��������� � �� ��
��� ������ ���� �� ���� ��� ���5 *��� ����
������� �� ������ ����� � �� ���� �� ������
��� ����� ������ �� ����� !� �� ���� ��� �� ��
�) ��� �� ��� ��� �� �� ������ ���� ���������
�� &��������� � �� ���� ������ �����
��� ���� ������� �� �� ������ � � ����
�� � ������ ���� �� ��������� ������ =� �� �
�� ��% �� �� ����� �� ��� ���� �� �������� � �
� � ������ ����� ��4 !�� ���� �� �) ���� ����
��� ��� � �� � ��������� ������� � ��
��������� ���� ��������� ������� ������� ��
������� �� � ����� �� ��������� � ������ #�
����� � �� �� ��� ������ ���� ���� �� � �����
������� ���� �� ������
43;
Figure 3. Number of publications investigating chitin synthase (CS). g-number of studies on the CS gene and CS gene expression.
�� �����
����������� �� ���� � �� �� ��� �� �� �
����� ����� ������$/ �� �� �� ���� ���� ���
������� �� �� �� ���� ������ �� ������ !� ��
����� ��� ��� �� ����������� ������ �
��� ��� �� ����� ��� �� ����� >��� �� ��� ��
����� ������ ��� ����� ����� � �� ��
���� ��� � ��&��� � �� ���� �� ��� ������ ��
��� �� �����$$�$. #�� �� ����� ��� ��
�� ������ ���� ���� ������ �� ��� � �� ��� ������
�� �����$9 �� � � �� � ����� � �� �)
�%����
#� ����� �) ����� ��� ������ ���� ������
��� ����� ���� �� ����� � ������ �� ����
��� �� ��� �� �� �� �� �� ����� ,��������
����� ��� �� ���� � ��� ���� �� �� �� � ���%�
���� �� ��� � ����������$3 "� �� ������
��� �� ����� ���� �� �������� �� �) � ��� ���
���� � � � ���������������$0 �� ��� ��
�� ��� ����� ���� � �� �������� �� � �������
�� �� �) ����� ������ �� ���� ��� � ��
������� �� ������$1 �� ��� ���� ����� ��
����� ��� � ��� ��� ������ �� ��� ������� ���� �
��������� �� ��������� �������� ������ �������� ��
������ ����� �� � ������$;
2.2 Catalysis������ �'�� .� �� �������� � � ��� ���������
�� ���$23� ��� ��������+���������� ����%� ��
��� ������� ��������� ��� � �������
������� >� .�3�$�$1�� #� ������� ������ ������ �� ����� �� ������%� �� ��� ������ ��� ��
�� �������$5 �� �� ���� ��� ��� �� �������������� ��� ����� �� �� ���� ������ ������ � �����
���� �� �������� �� �� �� ���� � ���� ��������$4
�) ������ � ������ �� ������ ������ �� ��
��� ������� ���� ����������� �� �� ���� ��
�%��� � ��� ���� "��� �� ��� �� �
�� �� �� ����� �) �%��� � ��������� ���
�� �� =���� ����� '�� 9 ��� ��� �� ����
�� ����������� ����� ���� �) ���� $4;/ �� �� ��
$444 �� 0�� ��� ���� #� �?� ��� �� �� �������
����� ���� � ������ ���� �� ����� �%���� �
�� ����� �� ���� �) � �� ����� ������ �� ��
������ -� ��� � �� ������ ���� ���� �) ��
��� � � �� ������� ���� ������� �� �&������
�� �� ����� �) ���� � �� �� ��� �� �� ��
�������� ������./ +� ��� �� � ��� $44$2$440�
���� �� 0/@ �� �� ����������� ��� ���� �� �)
Figure 2. The dimer unit of chitin.
435
��� #��� � ���� ��� �� �� 10@ �� ����
����������� �� ������� $4412$444� >��� �� �� ����
�� ����� �) �� � �� ���� ��� ������ ���
����� �� �) ��� � �� ���� �� ������ ��
�� ����� �� #��� �� �� �� � �����.$ #� ���
�&��� ����� ���� ���� ����� �� ����� �)
��� ����� �� ���� �� ����� �� ���� �� �����
�� ����� ����� � ���� "� �� ���� �� �� �����
���� ��� �&��� �� ����� �) ������� ��� ��
������ � ����� � ������ �� ���� ���
����� �� ���� ��� �� �%�� �� �� ����
��� �� #� ���� �� ���� ������ �� �� �����
��� ����� �� ���� � � �$02$5� ��� �� �� �����
����� � �� ������� ��� �� �� � ����� �
������ ����� � ������� �� ��� �� � �� �
�������� �� � "�� ������ ������ ���� ��
������� ������ �������� ����������� ���� �
������� ������ �� � �������� � ������� &�� �
�� �) ���������
#� ������� ������ �� ����� �� ���� ���
�&��� �� ���� �� ���� �� ����� �� ����� �)
�%���� ��� �� ��������� #� ��� �������
�������� �� ����� �� ���� �� �� �������� � ���
�� *+,��������+���������� �� �� �����
������ �� � ����� � ����� � ���� � �����
� � � �� � ��� �� ����� !� �� �� ��������%�
��� �� �� ��� ��� ������ ����� � � � ���
���� ����� &�� � �� �� ���2�� �������
����� �� ����� ��� ���� ��� �� ��� �� ��
������� �����..�.9 #� �� ������� �� ���
�� ���� � �� ������� ���������.3
2.3 Post-catalytic processes,����������� ���� ��� �� ��� ������ ������
�� � ��������� �� ����� � � ��� �� ����
��� ��� !� �� �� �� ������� ������� ���
���� ���� �� ���� � �� �� ��� ��� �����
� % � ��� �����&���.3 �� � ����� � ���
���� �� �� � ���� �� � �� �� ���� �����
� ��������� �� ������� ����� ���� �� -�������
� � ���� �� � ����� � ������ �� �� �����
���� ���� �� ���431240/ �.//$�
������ ��������� ��� ����������
�) �� �������� ����� � ���� ������������ �� ����
�� ���� � � ������ �� ����� �������
!�������� ������ ����� � ������� � ��� ��
���� ��� � ����� �� �� � ��� ��� ���
������ ����� ���� � ��� �� � ������ � � �
�� �� �� �� ������� �� ������� �� ���� �
!�� ����� ��� ��� ������� ���� ����� �
������������ � ����� �� ������ �� � �) �����
������ �� �� �� ����� �� � ������� ��� ��
�� ���� #��� � ���� �� � �������� �� ���������
��� ��� ��� ��� ��� �������� ���� � ����A��
B���� � ������ �� ����� C� �� ����� �� �����
������ � ���� �� ������$1 :� ���� ����� �� ��
����� � �� �������� ������� �� ������� �
��������� �� �� �� � ���������� � �� ��% ��
�� ��� ��� ��� � ���� �� ������� ���������
3 INHIBITION OF CHITIN SYNTHESIS!� �� �� � ����������� ��� �?� � ���� ��
�������� � ��� ������ �� ������ �������� � �� �'��
3�� "� � ���� ����� ������� �� �������� ���
����� �� ���� ��� ����� �� ����� � �������
�� ����������� ������� �� �����.0�.1 �� �����
�)�.; !�� ����� ��� ���������� ����� �� � ��
������� ���� � ����� �� � ������� �� � ���
���������� ������ ,�������� �� ��� � ��
������ ���� ������ � �������� ����� � � ���� �
����%� �� ���� ������ ������������� ������ ��
D��� ��� �� ���������� ��� �� ������� � ��
���� �� ������ �� ����� ��� ����������.;
�� ��� ���� ����%���� � ��������� �� ��������
�� �� ������������
#� ����� � ��� �� ������ � �� �� ������
���� ��������� � ,������ +��� �#� :�� �����
� ����� � �������%��� � ����� �� ���������
���������� �� ��� ���.5 #� ���� � ����� �� �
� ������ ������� ��� �� ������ ������ �����
� �� ���� �� ������� � ������ )��� ��
��� �������� �� ��A���%� �� �+������� � �� � ��
���� ����%� ��������� �� ���� ���� ���� �� ��
������ ������ ���� ��������� �� �� ����
��� �� � ���� ������ ��������
#� ���������� ���� � �� ���&� ��
������� �� ���� ��� �� ������ #�� �� �����
������� �������� �� ������ � � ����� ���� �� ��
�� ����� �� �� ������� �� �� ���� � � � ����
Figure 4. Structures of selected chitin synthesis inhibitors.
���� ���� �� ���431240/ �.//$�
�� ������� �� ������ ������ ���� �� �� �� ��
����� ��� ����� �������� �� �� �� ��� ����� ��
�� � �� ���� ������ � ��� � ��������� ��
���� "� �� ���� �� ��� � �� ��� �� ������
�� ���� �� ����� ���� ������ �� �� �� ��
� � �� ������ ��� ���� �� ����� � ��
� ����� � ���� ����� � �� � ���� �� ��
����������� ���� �� �� �� ���� �� ��� ����
��� � �� ����
)����� ���� ���� �� ��� ������� �� �����
�� �� �� ��������� �� �� ��������� ��
���� � �� � �������� ���� ���� � � ����
������� ������ ������� ���� ��������� �� ��
�) �����3 � �� � ���� � �� ������ �� �)��������
��� ������ �� ���� � ���� �� ���� ��� ��.4
������ �������� �� � ������� ����� �� ����
��������� �� ������ ��� ��� �� ����� ������� -�
������� �� ��� �������� �� ��� ����������. �����
������� ���� � � � ����� �������� "� �?�
���� �� ���� ����� �� ����� �) �� ��� ��
�� � �%�� ������� �������� � ����� �
������� #�� ��� ������� ������ ����� ���
�� �� ������ � ��������� � ��� �� ���� ���
� �� !� �� ������� �� ������ ��� �� � �����
� � ������ ������� �� ���������� �� ������
�������� �� ���� �� -� �� ����� �) �� �� ��
������ � ��� � ��� � ������ ���� �� ����� ��
��������� �� ��� ��������� ����� ������ ��
���� ��
4 CONCLUDING REMARKS������ �������� �� ��������� ���� �� �&�����
� �� �� ��������� ��� ����� �� �� �����
��������� �� ���������� � ���� ������� ��� ��
����� ��� �� ��� ������ C� �� ����� �����
����� �) ��� �� �� ����� ����� ����� �)
����� � � �� ����� �� ��� �� ����� ���� ��
��� ������� �� ��� � ��� �� �� ��� ���
�������� �� �� ��� ������� �%�� � ��� �
�� � ����� ���� � ������� �� � ��������� ��
������ ����� � � ��� �� ���� ��� �� )���
������ �� ���� �������� �� �� ���� ��� ����
�� ����� ��� ���� ��� ��������� ��������� ��
���� ���� �� ����� �� ��� ����� � ��� ��
��� ������ �� � �� ������ �� ����� ��� � ���� ��
������� ������� ����� � ���� ��� ����
���� �� ���� �� ������ ��� ������( �������� ���
���� � �� ������� ���� �� ���� � ����� ��������
�� � �� � ��������� ���� #� ������ �� � ��
���� � �� ������� �� �� �� ����� �� �� �������
������� ���� �� �� ��� � �� �� ���������
� ��� �� ��� � ��� )��� � ��� �� ���� ������
�� �� ������ �������� �� ���� �� �� ���� �
ACKNOWLEDGEMENTS! ��� + C��� #��� �� � ������� ���� �����
���� ���� �� ������� �� �&������ �� �� �����
������ ������ ���
434
�� �����
REFERENCES$ ���� >� >�� ����� �������� � � � ��� �� ��� ���� ��� ��
���������� ��� ������������� � �� ���� D>� >���� )����
,������ �� -��� ��� �� .929. �$44/��
. ���� >� ������ ��������� �( �������� �� ����������� ����
��� ���� �� /)(;$249 �$45;��
9 )� �� E �� )������ �� #� ������ �� �� ���������
�� �� �������� �� ���������� ������ ������ ������� ���
��������� ���� +-*(402$// �$44;��
3 !���� ) �� =����� '� +�A���%� ��������� ����� ��
�������� �� �-=,������� � ���� ��� �� �� ����
����� �������� �� �� -� ��� ��� ��� �� ���� �� ��
����� ����������� ������ ������ ����� ���� ))(142;. �$44.��
0 � � �>� C��%�F D �� � ���� ��< �� )� )� ����
�� � ���� ����� �� ������ ������ ����������� �� ���
��� ��� �� �������� �� ������ ���� ���� ���� �� � ./(30;/2
30;3 �$4;1��
1 C��%�F D� G��%�C�� � > �� � ����� ��< �� )�
, �� ��� �� ������ ������� �� ������ ��������� � ��
��� ���� ������� ���!��� " ���� ��� )-)(999529939 �$4;;��
; )���� DF� +�� -�� H�� I� )?���� E- �� J �� "� #�
�����%���� �� ������ ������ �� ��� ���� ������ �������
����� �� ���������� ������� ����������� +0)($04$2$041
�$441��
5 G��� ����� =� -�� ���� �� �� � ��������� ������ ��
01(.142.4. �$441��
4 H����� <� =� ��?�%� ,� )���� +G �� "� ��� F�
������ �������� �� ��������� #��$���������� ������ ������ !!�
)����� ����� �� ���� A�%� �� �� ��� � � ���������
������� �� ������ ��� �� ���� � ���� ������ ������ �������
).(542$/5 �$443��
$/ ���� >� �� ����� ������ �������� �� � �����( �� ����� ��
�� ���� �� ��� ��� ���� ��� " ���� ���� +2(.532.43 �$45.��
$$ G�� =� #� �� ���� � ������ �� ������� ����� ������
���� �� �� ���������� ������ ���������% ������ ����� ���
���� ������� I�� .� � �� E �� <- �� <��� � G!�
, ���� , ��� "��� �� �� 5;2$34 �$450��
$. ���������� E�� *�� ������ � ����� �� �� ������ �� ��
��� ����A�� �������� ������ �� � ��� ���������� ��
��������� �������� �� &����� ' ���� +.($9$2$3/ �$450��
$9 G�� = �� F�� ,� -������� �� �� ��� �� ����
��� � ��&�� �� ��� ������ �� ����� �� � ������
&����� ' ���� ++(.;;2.4$ �$4;4��
$3 � ��� C+� =�� ������� �� �� A������ �� �� ��� �� ��� ���
�( ���� �� )-/(3302303 �$4;0��
$0 '�?�� =� =� ����� F� "�� - �� # �� =� :��� �����
40/
�� ������� ������ ������ ���� ������ ���� ��� ������
������ ������� ��� �� �� )/2(;02;5 �$44;��
$1 ���� >� ������ �������� �� �� ����� � � ��� �� �����
��� ������ ���� ������ ������ ������� ))(.302.1$ �$449��
$; "� ��� F� G��� +- �� G�� �-� !��������� �� ������
� �������� �� ������ ����� �� ������ �������������� ������ � ��
��� ��( >����� �� ������ �� ���������� " ������ �������
)3(3;209 �$459��
$5 � ��� �K� +� #� � ���� �� ���� �� ������ �������������
����������� " ������� ������ ����� /(1142159 �$40;��
$4 =�� C �� ��� ��� D� #� �� ���� �� ��������� " ��� ����+)*($1;2$5$ �$4;5��
./ ����� �'� <����� �� ������ ������� �� ������ ��������
�� ������ ���� ��� ��������� 0.(0/0209/ �$449��
.$ #��� CG� I������ #� D������ )>� D �� D �� , ��� C+�
!���� ������ ������� �+:- �&���� �� � ���%���� ��
�� ������ ��� " ������ )2.(1/.021/3. �.///��
.. J� #� J���" � #� : ?�� #� )���� =� - ��� =
�� J���" � =� =������� ����� �� ������ ������
. �� ������� ���� ����������� !���������� �� �������� ����
��� ����� ������� �� ��� ������� �������� ��� " ������
)-1(43$243; �$445��
.9 )�� !=� � ��� C= D � '� =� < �� C- �� F� ����
�� =��������� ������� �� ���������� � ��� ��( !��
��������� �� ������� �� ������ " ��������� +..($3$42$3.3
�$440��
.3 +�� +,� ������� �����������( >������� ���� �� ��������
��� �� ������ ���� ��� ����� ������� ����� ��� ���� -*(.302
.;1 �$444��
.0 � ���� ��< �� ) �� G����� >� !��������� ������� ���!�� ��
���������+( >����� �� ������ �������� �� �� ���������
��������� " )�� ��������� .+(9/$29/4 �$4;.��
.1 F� � =� E � � E �� =���� #� !�� ����� ���� ��������
�� ���� ��� �� ������ �������� ���� ���� ��� /1(1442
;/0 �$4;3��
.; ���� > �� ���� D>� !��������� �� &������� ��� ������
�������� ������ ������ ������� +/($.42$91 �$45/��
.5 I ���� - �� ' �� �+� ��%�������� � �L �� � ��� ��
���������� ��� � ��� ���� ������ ���������� �� ���������
��� ����� �� ��� *+�� �������� � �� ,���� DC� -�)
)�������� ) ��� -� ��� ������ )������ B���������
+�� �� .9;2.;/ �$4;;��
.4 : �� J �� =����� '� +�A���%� �� ����� ����
���� <#,��������� �.� � ���� � ��,����� �� ��� �����
������ � �� �� �������� �� �� ���� ����� � ���
��� ���� ����������� � ������� G� ������ ������ ����� ����
)0($//42$/$0 �$443��
���� ���� �� ���431240/ �.//$�