CHANG Medium D with GentamicinFor Human Amniotic Fluid Cells

Catalog No. 99404

ENGLISH

INTENDED USECHANG Medium D with Gentamicin may be used for the following applications: 1. the primary culture of amniotic fluid cells 2. growing passaged amniotic fluid cells 3. the culture of bone marrow cells 4. solid amnion tissue from chorionic villi sampling.

This medium has been designed for use in CO2 incubators (cultures equilibrated with 5%-8% CO2 atmosphere).

The final pH must be 6.8-7.2.

PRODUCT DESCRIPTION CHANG Medium D with Gentamicin was developed for the primary culture of human amniotic fluid cells for use in karyotyping and other antenatal genetic testing. This formula has been optimized for both flask and in situ methodologies.

STORAGE AND STABILITY Store CHANG Medium D with Gentamicin frozen at -10C. Unused CHANG Medium D with Gentamicin can be refrozen or stored at 2C to 8C.

Protect from fluorescent light.

See bottle label for specific expiration date. CHANG Medium D with Gentamicin may be refrozen a maximum of 2 times and stored thawed at 2C to 8C for 14 days without affecting its function. Storage for longer than 14 days is not recommended.

COMPONENTS mg/LSalts .. 8515Dextrose 880Amino Acids 804L-Glutamine .... 257Polypeptides 189Vitamins 61Deoxyribonucleosides .. 35Ribonucleosides . 35Sodium Pyruvate 97Gentamicin Sulfate 50Other Components . 9Steroid Hormones 0.0009Bovine Serum Proteins 12% v/vPhenol Red ......... 10

PRECAUTIONS AND WARNINGS This device is intended to be used by staff trained in procedures that include the indicated application for which the device is intended.

Do not use any bottle in which the sterile packaging has been compromised.

Do not use CHANG Medium D with Gentamicin beyond the expiration date indicated on the label.

PREPARATION FOR USE 1. Thaw CHANG Medium D with Gentamicin rapidly by

swirling bottle in a 37C water bath. 2. CHANG Medium D with Gentamicin contains

the antibiotic Gentamicin (50 g/mL). Additional antibiotics may be added if desired.

ALIQUOTING CHANG MEDIUM D 1. Thaw CHANG Medium D with Gentamicin according

to instructions. 2. Distribute aseptically into convenient sized aliquots

and refreeze. 3. Thaw aliquots in 37C water bath when ready to use.

DIRECTIONS FOR USE Use of CHANG Medium D with Gentamicin for Primary Cultures: in situ Methodologies

1. Centrifuge amniotic fluid at low speed to concentrate the cells.

2. Resuspend the cell pellet in a small volume of the patients own amniotic fluid. For example, aspirate the supernate of 10 mL of spun amniotic fluid to 0.5 mL above the cell pellet and resuspend. Add sufficient CHANG Medium D with Gentamicin to the concentrated cell suspension to allow for final plating volume of 0.5 mL per cover slip (total of 4 coverslips) or 2 mL per flaskette.

DEUTSCH

BESTIMMUNGSZWECKCHANG Medium D mit Gentamicin kann fr folgende Methoden eingesetzt werden:1. Primr Kultur von Amnionzellen2. Kultur passagierter Amnionzellen3. Kultur von Knochenmarkszellen4. Amniongewebe aus Chorion Villi

Probenentnahme.

Dieses Medium wurde hergestellt fr die verwendung in CO2 inkubatoren (Kulturen equilibriert mit 5%-8% CO2 atmosphre).

Der pH Wert muss 6.8-7.2 betragen.

PRODUKTBESCHREIBUNGCHANG Medium D mit Gentamicin wird verwendet zur Primrkultur von humanen Amnionzellen, Karyotyping und anderen prnatalen genetischen Testmethoden. Die Zusammensetzung wurde sowohl fr Flaschen- als auch fr In Situ-Methoden optimiert.

LAGERBEDINGUNGEN UND STABILITTCHANG Medium D mit Gentamicin gefroren bei -10C. Ungebrauchtes CHANG Medium D mit Gentamicin kann wieder eingefroren oder bei 2 C to 8 C im Khlschrank aufbewahrt werden.

Vor fluoreszierendem Licht schtzen.

Das Verfallsdatum steht chargenspezifisch auf dem Flaschenetikett. CHANG Medium D mit Gentamicin kann maximal 2 mal wieder eingefroren werden oder bei 2 C bis 8 C fr 14 Tage ohne Qualittsverlust aufbewahrt werden. Eine lngere Khlschranklagerung kann nicht empfohlen werden.

BESTANDTEILE mg/LSalze ..................................................................8515Dextrose .......................................................................880Aminosuren ................................................................804L-Glutamin ...................................................................257Polypeptides .................................................................189Vitamine .........................................................................61Deoxyribonukleoside .....................................................35Ribonukleoside ..............................................................35Natrium Pyruvat .............................................................97Gentamicin ... 50andere Komponenten ... 9Steroid Hormone . 0.0009Bovine Serum Proteine 12% v/vPhenol Rot .....................................................................10

VORSICHTSMASSNAHMEN UND WARNUNGENDiese Vorrichtung ist fr die Anwendung durch Personal vorgesehen, das in Verfahren ausgebildet wurde, welche die fr diese Vorrichtung angegebene zugelassene Anwendung beinhalten.

Keine Flaschen verwenden, deren sterile Verpackung beschdigt wurde.

CHANG Medium D mit Gentamicin sollte nicht ber das verfallsdatum (siehe Etikett) hinaus verwendet werden.

GEBRAUCHSVORBEREITUNG1. CHANG Medium D mit Gentamicin durch Schwenken

im 37 C Wasserbad schnell auftauen.2. CHANG Medium D mit Gentamicin enthaelt das

antibiotische Gentamicin (50 g/mL). Mehr antibiotika knnen, falls gewnscht, zugefgt werden.

ALIQUOTIEREN VON CHANG MEDIUM D1. CHANG Medium D mit Gentamicin entsprechend

den instruktionen auftauen.2. Aseptisch in gewnschte aliquots aufteilen und

einfrieren.3. Aliquots vor gebrauch im 37 C wasserbad auftauen.

GEBRAUCHSHINWEISECHANG Medium D mit Gentamicin fr Primrkulturen: In Situ Methoden

1. Amnionf lssigkei t bei niedr igen Drehzahlen zentrifugieren, um die Zellen zu konzentrieren.

2. Das Zellpellet in einer kleinen Menge patienteneigener Amnionflssigkeit resuspendieren. zB: den berstand von 10 ml der zentrifugierten Amnionflssigkeit bis auf o,5 ml ber dem Zellpellet aspirieren und resuspendieren. Ausreichend CHANG Medium D with Gentamicin zu der konzentrierten Zellsuspension

ITALIANO

USO RACCOMANDATOCHANG Medium D con gentamicina pu essere utilizzato nelle applicazioni:1. colture primarie di cellule di liquido amniotico2. colture secondarie di cellule di liquido amniotico3. colture di cellule di midollo osseo4. tessuto amniotico da villi coriali

Questo terreno e stato sviluppato per luso in incubatore con CO2 (colture equilibrate in atmosfera con il 5 - 8% di CO2).

Il pH finale deve essere fra 6.8 7.2.

DESCRIZIONE DEL PRODOTTOCHANG Medium D con gentamicina stato sviluppato per colture primarie di cellule di fluido amniotico umano per la determinazione del cariotipo ed altri test genetici prenatali. Questa formula stata ottimizzata per sistemi in fiasca e metodologie in situ.

ISTRUZIONI PER LA CONSERVAZIONEConservare il CHANG Medium D con gentamicina congelato a una temperatura tra -10C. Il terreno non utilizzato pu essere ricongelato o conservato a 2 - 8C.

Proteggere dalla luce fluorescente.

Far riferimento alle etichette dei singoli componenti per le date di scadenza specifiche. Il CHANG Medium D con gentamicina non pu essere ricongelato per pi di 2 volte; una volta scongelato pu essere conservato a 2 - 2-8C per 14 giorni prima delluso senza che le prestazioni risultino alterate. Si raccomanda di non conservarlo a 2-8C per pi di 14 giorni.

COMPONENTImg/L

Sale ............................................................................... 8515Destrosio ........................................................................ 880Aminoacidi ...................................................................... 804Glutamina-L .................................................................... 257Polipeptidi ........................................................................ 189Vitamine ............................................................................ 61Desossiribonucleosidi ......................................................35Ribonucleosidi ..................................................................35Piruvato di Sodio ............................................................. 97Gentamicina Solfato..........................................................50Altri Componenti ................................................................. 9Ormoni Steroidei ........................................................ 0.0009Proteine Da Siero Bovino ........................................... 12% v/vRosso Fenolo .................................................................... 10

PRECAUZIONI E AVVERTIMENTIQuesto dispositivo previsto per luso da parte di personale addestrato nelle procedure che comprendono le applicazioni indicate per le quali il dispositivo previsto.

Non usare flaconi in cui la confezione sterile sia stata compromessa.

Non usare il CHANG Medium D con gentamicina dopo la data di scadenza indicata sulletichetta.

PREPARAZIONE PER LUSO1. Scongelare velocemente il CHANG Medium D con

gentamicina agitando la bottiglia in un bagno di acqua a 37C.

2. CHANG Medium D con Gentamicina contiene lantibiotico Gentamicina (50g/mL). Supplementare antibiotici possono essere aggiunti se e desiderato.

ALIQUOTARE IL CHANG MEDIUM D1. Scongelare CHANG Medium D con gentamicina

secondo le istruzioni.2. Suddividere, in ambiente sterile, il terreno in aliquote

ericongelare.3. Scongelare le aliquote in un bagno di acqua a 37C

quando si devono usare.

ISTRUZIONI PER LUSO DEL PRODOTTOUso del CHANG Medium D con gentamicina per colture primarie: Metodologie In Situ.

1. Centrifugare il fluido amniotico a velocita bassa per concentrare le cellule.

2. Risospendere il pellet cellulare in una piccola quantit di liquido amniotico della paziente. Ad esempio, aspirare il surnatante di 10 mL di liquido amniotico centrifugato fino a 0.5 mL al di sopra del pellet e e risospendere. Aggiungere alla sospensione concentrata di cellule una quantit di CHANG Medium D con gentamicina atta a ottenere un volume finale di 0.5 mL per coverslip (per un totale di 4 coverslip) o di 2 mL per fiasca.

ESPAOL

APLICACINCHANG Medium D con Gentamicina se puede utilizar en las siguientes aplicaciones:1. Cultivo primario de clulas de lquido amnitico.2. Cultivo de clulas del lquido amnitico derivadas del

cultivo primario.3. Cultivo de clulas de mdula sea.4. Tejido amnitico slido obtenido de vellosidades

corinicas.

Este medio ha sido diseado para ser utilizado en incubadores de CO2 (cultivos equilibrados en una atmosfera con 5% - 8% CO2).

El pH final debe ser de 6.8 a 7.2.

DESCRIPCIN DEL PRODUCTOCHANG Medium D con Gentamicina es un medio desarrollado para el cultivo primario de clulas humanas de lquido amnitico, para anlisis de cariotipo y otras pruebas genticas de diagnstico prenatal. Esta Formula Se Ha Optimizada Para Metodologias En Frasco E In Situ.

CONSERVACIN Y ESTABILIDADConservar CHANG Medium D con Gentamicina congelado entre -10C. Una vez descongelado, se puede recongelar o se puede conservar refrigerado entre 2C y 8C.

Proteger este producto de la luz fluorescente.

CHANG Medium D con Gentamicina es estable hasta la fecha de caducidad indicada en el envase. Una vez descongelado, se puede conservar refrigerado entre 2C y 8C un mximo de 14 das sin que ello altere su funcionalidad. Es posible hacer alcuotas y recongelar CHANG Medium D con Gentamicina un mximo de 2 veces.

COMPONENTES mg/LSales .................................................................. 8515Dextrosa ............................................................... 880Aminocidos ......................................................... 804L-Glutamina .......................................................... 257Polipptidos .......................................................... 189Vitaminas ............................................................... 61Desoxirribonuclesidos ........................................... 35Ribonuclesidos ..................................................... 35Piruvato de Sodio ................................................... 97Gentamicina ............................................................50Otros Componentes ................................................. 9Hormonas Esteroides ...................................... 0.0009Protenas de Suero Bovino ............................ 12% v/vRojo Fenol .............................................................. 10

PRECAUCIONES Y ADVERTENCIASEste disposit ivo debe ser uti l izado por personal capacitado en procedimientos que incluyan la aplicacin prevista para el mismo.

No usar frascos en los que el envase estril est daado.

No usar CHANG Medium D con Gentamicina despus de la fecha de caducidad indicada en la etiqueta.

PREPARACIN DEL PRODUCTO 1. Descongelar CHANG Medium D con Gentamicina

rpidamente poniendo la botella al bao Mara a 37C y movindola en crculos.

2. CHANG Medium D con Gentamicina contiene el antibitico Gentamicina (50 g/mL). Si se desea, se puede aadir antibiticos adicionales.

PARA ALICUOTAR CHANG MEDIUM D1. Descongelar CHANG Medium D con Gentamicina de

acuerdo a las instrucciones.2. En condiciones de esterilidad, distribuir en alcuotas de

tamao conveniente, y recongelar.3. Descongelar las alcuotas al bao Mara a 37C en el

momento de utilizarla.

INSTRUCCIONES DE USOUtilizacin de CHANG Medium D con Gentamicina en cultivos primarios: Metodologa In Situ

1. Centrifugar el lquido amnitico a baja velocidad para concentrar las clulas.

2. Resuspender el precipitado de clulas en un volumen pequeo del propio lquido amnitico de la paciente. Por ejemplo, aspirar el sobrenadante de 10 mL dejando 0.5 mL de lquido, y resuspender. Aadir suficiente CHANG Medium D con Gentamicina a la suspensin concentrada de clulas para alcanzar un volumen de cultivo final de 0.5 mL por cubre-objetos (un total de 4 cubre-objetos por muestra), o 2 mL por frasco.

FRANAIS

UTILISATION CONSEILLE Le milieu CHANG Medum D avec Gentamicine peut tre utilis pour les applications suivantes :1. La culture primaire des cellules du liquide amniotique.2. Le repiquage des cellules du liquide amniotique.3. La culture des cellules de la moelle osseuse.4. La culture des tissus des prlvements de villosits

choriales.

Ce milieu est destin une utilisation en incubateur (Cultures equilibrees en atmosphere CO2 (5%-8%)).

Le pH final doit tre entre 6.8-7.2.

DESCRIPTION DU PRODUITLe milieu de CHANG Medium D avec Gentamicine est dvelopp pour la culture primaire de cellules amniotiques humaines utilises pour les caryotypes et autres tests de diagnostic antenatal.

CONSERVATION ET STABILITConserver le milieu de CHANG Medium D avec Gentamicine congel entre -10C. Le milieu de CHANG Medium D avec Gentamicine non utilis peut tre recongel ou conserv entre 2C et 8C.

Protger de la lumire fluorescente.

La date dexpiration figure sur ltiquette. Le milieu de CHANG Medium D avec Gentamicine peut tre recongel 2 fois au maximum et conserv entre 2C et 8C pendant 14 jours sans altration de ses capacits. Il nest pas recommand de le conserver au del.

COMPOSANTS mg/LSels .................................................................... 8515Dextrose ................................................................880Acides amins ..............................................................804L-Glutamine ..................................................................257Polypeptides .................................................................189Vitamines ........................................................................61Dsoxyribonuclotides ...................................................35Ribonuclotides ..............................................................35Pyruvate de sodium ........................................................97Sulfate de Gentamicine ..................................................50Autres composants ...........................................................9Hormones strodes ................................................0.0009Protines de Srum Bovin 12% v/vRouge de Phnol ...........................................................10

PRCAUTION ET MISE EN GARDECe dispositif est destin une utilisation par un personnel form aux procdures comprenant lapplication indique pour laquelle le dispositif est destin.

Ne pas utiliser de flacon dont la strilit de lemballage a t compromise.

Ne pas utiliser le milieu de CHANG Medium D avec Gentamicine au del de la date dexpiration figurant sur ltiquette.

PRPARATION1. Dcongeler le milieu de CHANG Medium D avec

Gentamicine rapidement en agitant le flacon dans un bain marie 37C.

2. Le milieu de CHANG Medium D avec Gentamicine contient lantibiotique Sulfate de Gentamicine (50 g/mL). Ajouter les antibiotiques additionnel.

PRPARATION DALIQUOTS DE MILIEU DE CHANG D1. Dcongeler le milieu de CHANG Medium D avec

Gentamicine en suivant les instructions.2. Distribuer strilement en volumes utiles et recongeler.3. Dcongeler les aliquots au bain marie 37C avant

lemploi.

INSTRUCTIONS DUTILISATIONUtilisation Du Milieu CHANG Medium D Avec Gentamicine Pour Cultures Primaires : Methode In Situ

1. Centrifuger le liquide amniotique 1000 tours/min pendant 5 minutes pour concentrer les cellules.

2. Resuspendre le culot dans un petit volume du liquide amniotique de la patiente. Par exemple, aspirer le surnageant obtenu en centrifugeant 10 ml de liquide amniotique et resuspendre le culot dans 0,5 ml de ce liquide. Ajouter suffisamment de milieu de CHANG Medium D avec Gentamicine au culot de cellules concentres resuspendues pour obtenir un volume final ncessaire pour 4 lamelles (0,5 ml par lamelle) ou 2 ml par flaskette.

3. Incubate cultures undisturbed at 37 C 5%-8% CO2 atmosphere.

4. Flood cultures on day 2 by adding 2 mL of CHANG Medium D with Gentamicin.

5. After 4 to 5 days, the cultures should be checked for growth. Cultures should be fed once growth has been observed. Feed cultures by removing all of the culture supernatant and replacing with 2 mL fresh CHANG Medium D with Gentamicin. It is recommended that cultures be fed every 2 days thereafter.

6. Check cultures for growth on/or after day 5, and harvest when sufficient colonies are observed.

7. Best results are obtained when the cultures are fed with CHANG Medium D with Gentamicin the day before the harvest.

Use of CHANG Medium D with Gentamicin for Primary Cultures: Flask Methodologies

1. Centrifuge amniotic fluid at low speed to concentrate the cells.

2. Resuspend the cell pellet in a small volume of the patients own amniotic fluid. For example, aspirate the supernate of 10 mL of spun amniotic fluid to 1 mL above the cell pellet and resuspend. Add 4 mL of CHANG Medium D with Gentamicin for a total volume of 5 mL per flask.

3. Incubate cultures undisturbed at 37 C 5%-8% CO2 atmosphere.

4. Check for growth on day 5. Change medium with fresh CHANG Medium D with Gentamicin and harvest if sufficient cell growth is observed.

5. Check cultures for growth and completely CHANGe medium every day thereafter until sufficient colonies are observed and are ready to harvest.

6. Best results are obtained when the cultures are fed with CHANG Medium D with Gentamicin the day before the harvest.

Use of CHANG Medium D with Gentamicin for Growing Passaged Amniotic Fluid Cells:

To passage the cells, treat the cultures with trypsin (or pronase, etc.) as you would normally do when cells are grown in conventional medium. However, protease treatment should be carefully monitored. Amniotic fluid cells grown in CHANG Medium D with Gentamicin tend to be more sensitive to protease treatment than amniotic fluid cells grown in conventional medium. It may be necessary to modify your protocol to take this into account.

The pH of the medium used to feed the cultures must be between 6.87.2 (i.e. the medium must be slightly yellowish salmon color). pH can easily be adjusted by placing the medium in a 5%-8% CO2 incubator with the cap slightly loosened for about 30 minutes.

Note: Calcium Oxalate crystals commonly form in CHANG Medium D. The presence of these crystals has not been shown to cause any detrimental effect on product performance.

CHANG Medium D with Gentamicin contains the antibiotic Gentamicin. Appropriate precautions should be taken to ensure that the patient is not sensitized to this antibiotic.

QUALITY ASSURANCESTERILITY Serum used in the production of CHANG Medium D with Gentamicin has been tested for viral contamination per CFR Title 9 Part 113.53. It has also been screened for mycoplasma. CHANG Medium D with Gentamicin is sterilized by filtration through a 0.1 micron filter. Samples of CHANG Medium D with Gentamicin are tested for possible bacteriological contamination following the sterility testing protocol described in the current USP Sterility test .

CHANG Medium is a registered trademark of Irvine Scientific.

zugeben: 0.5 ml pro Deckglas (maximal 4 Deckglser) oder 2 ml pro Kulturflasche

3. Kulturen ungestrt bei 37 C in 5%-8% CO2 atmosphre inkubieren.

4. Am 2. Tag die Kulturen mit 2 ml CHANG Medium D mit Gentamicin In fluten.

5. Nach 4 bis 5 Tagen sollte das Wachstum der Kulturen berprft werden. Die Kulturen sollten gefttert werden, sobald sie wachsen. Dazu wird der Zellkulturberstand entfernt und durch 2 ml neues CHANG Medium D mit Gentamicin ersetzt. Danach sollten die Kulturen alle 2 Tage neu gefttert werden.

6. Kulturwachstum am oder nach dem 5.Tag berprfen, und wenn ausreichend Kulturen vorhanden sind, ernten.

7. Die besten Ergebnisse werden erzielt, wenn am Tag vor der Ernte nochmals mit CHANG Medium D mit Gentamicin gefttert wird.

Anwendung von CHANG Medium D with Gentamicin fr Primre Kulturen: Flaschenmethode

1. Amnionf lssigkei t bei niedr igen Drehzahlen zentrifugieren, um die Zellen zu konzentrieren.

2. Das Zellpellet in einer kleinen Menge patienteneigener Amnionflssigkeit resuspendieren. zB: den berstand von 10 ml der zentrifugierten Amnionflssigkeit bis auf 1 ml ber dem Zellpellet aspirieren und resuspendieren. 4 mL of CHANG Medium D mit Gentamicin zugeben zu einem Gesamtvolumen 5 mL pro Kulturflasche.

3. Kulturen ungestrt bei 37 C in 5%-8% CO2 Atmosphre inkubieren.

4. Kulturwachstum am 5.Tag berprfen. Medium mit frischem CHANG Medium D mit Gentamicin austauschen und bei ausreichendem Zellwachstum ernten.

5. Kulturwachstum 5.Tag berprfen und jeden Tag das Medium vollstndig tauschen bis ausreichend Kolonien vorhanden sind. Danach ernten.

6. Die besten Ergebnisse werden erzielt, wenn am Tag vor der Ernte nochmals mit CHANG Medium D mit Gentamicin gefttert wird.

Anwendung von CHANG Medium D mit Gentamicin zur Kultur passagierter amnionzellen

Zum Passagieren der zellen werden die kulturen mit Trypsin (oder Pronase, etc.) behandelt. Genau so, als wren die zellen in einem konventionellen Medium gewachsen. Allerdings sollte die Protease Behandlung sorgfltig beobachtet werden, da amnionzellen, die in CHANG Medium D mit Gentamicin kultiviert wurden, sensitiver reagieren als Zellen nach Behandlung in konventionellen Medien. Unter Umstnden muss das protokoll entsprechend modifiziert werden.

Der pH des medium mit dem die Kulturen gefttert werden, muss im Bereich 6.87.2 liegen. (d.h. das Medium sollte eine leichte gelb-rosa Frbung haben). Der pH kann einfach eingestellt werden, indem das Medium mit leicht geffnetem Verschluss fr ca. 30 Minuten in einen 5%-8% CO2 Inkubator gestellt wird.

Achtung: in CHANG Medium D mit Gentamicin bilden sich gewhnlich Kalzium Oxalat Kristalle. Das Vorhandensein dieser Kristalle hat bislang keinen mindernden Einfluss auf das Zellwachstum gezeigt.

CHANG Medium D mit Gentamicin enthaelt das antibiotische Gentamicin. Passende Vorsichtsmassnahmen sollten verwendet werden, um zu sichern, dass der Patient nicht zu diesem Antibiotikum sensibilisiert wird.

QUALITAETSSICHERUNGSTERILITTSerum fr die Produktion von CHANG Medium D mit Gentamicin wurde auf virale kontamination nach CFR Title 9 Part 113.53 und mycoplasma kontamination getestet. CHANG Medium D mit Gentamicin wurde sterilisiert durch Filtration mit einem 0.1 filter. Proben von CHANG Medium D mit Gentamicin sind auf mgliche bakterielle kontamination getestet nach dem Sterilitts Test Protokoll beschrieben unter Steril itt (durch aktuellen USP Sterility Test ).

CHANG Medium ist ein eingetragenes Warenzeichen von Irvine Scientific.

3. Incubare le colture a 37C in atmosfera 5%-8% CO2.

4. Al secondo giorno, aggiungere 2 mL di CHANG MEDIUM D con gentamicina alle colture.

5. Dopo 4 o 5 giorni, controllare la crescita delle colture. Arricchire le colture non appena si osserva una crescita rimuovendo il surnatante e sostituendolo con 2 mL di CHANG Medium D con gentamicina fresco. Si raccomanda di continuare ad arricchire le colture in questo modo ogni 2 giorni.

6. Controllare la crescita delle colture dopo 5 giorni, e prelevarle quando si osservano un numero sufficiente di colonie.

7. Risultati migliori si ottengono arricchendo con CHANG Medium D con gentamicina le colture il giorno prima della raccolta.

Uso Di CHANG Medium D Per Colture Primarie: Metodologie In Fiasca1. Centrifugare il liquido amniotico a bassa velocit per

concentrare le cellule.2. Risospendere il pellet in una piccola quantit di liquido

amniotico della paziente. Ad esempio, aspirare il surnatante di 10 mL di liquido amniotico centrifugato fino a 1 mL al di sopra del pellet e risospendere. Agguingere 4 mL di CHANG Medium D con gentamicina per ottenere un volume totale di 5 mL per fiaschetta.

3. Incubare le colture a 37 in atmosfera al C 5%-8% CO2.4. Controllare la crescita al 5 giorno . Sostituire il terreno

con CHANG Medium D con gentamicina fresco e raccogliere se si osserva una sufficiente crescita cellulare.

5. Controllare la crescita e sostituire il terreno ogni giorno successivo al quinto fino a che le colonie sono in quantit sufficiente e pronte per la raccolta.

6. Migliori risultati si ottengono con colture arricchite con CHANG Medium D con gentamicina il giorno prima della raccolta.

Uso di CHANG Medium d per colture secondarie di liquido amniotico:

Per trasferire le cellule, trattare le colture con tripsina (o pronase, etc.) come nel caso di colture in terreno convenzionale. In ogni caso il trattamento con proteasi deve essere accuratamente monitorato. Le cellule di liquido amniotico coltivate in CHANG Medium D con gentamicina tendono a essere pi sensibili al trattamento con proteasi rispetto a quelle coltivate in un terreno tradizionale. In ragione di ci pu essere necessario modificare il protocollo.

IL pH del terreno utilizzato deve essere compreso tra 6.8 e 7.2 (il terreno deve avere un colore leggermente giallo tendente al salmone). Il pH pu essere aggiustato facilmente ponendo il terreno in un incubatore con CO2 al 5% - 8% con il tappo svitato per circa 30 minuti.

Nota: Nel CHANG Medium D si possono formare cristalli di Ossalato di Calcio. La presenza di questi cristalli non alterano n laqualit ne le performance del prodotto.

CHANG Medium D con Gentamicina contiene lantibiotico Gentamicina. Si devono perci prendere dovute precauzioni per assicurarsi che il paziente non sia sensibile a questo antibiotico.

ASSICURAZIONE DI QUALITSTERILITAIl siero usato per la produzione di CHANG Medium D con gentamicina stato estato per escludere contaminazione virale secondo la procedura CFR Titolo 9 Parte 113.53. Il siero stato testato anche per determinare eventuali contaminazioni da micoplasma. Il CHANG Medium D con gentamicina sterilizzato per filtrazione mediante un filtro da 0.1 mm e sono testati per escludere eventuale contaminazione batteriologica seguendo il protocollo delle prove di sterilit descritto nella corrente test di sterilit USP .

CHANG Medium un marchio registrato di Irvine Scientific.

3. Sin perturbarlos, incubar los cultivos a 37C en una atmosfera de 5% - 8% CO2.

4. En el da 2 del cultivo, aadir 2 mL de CHANG Medium D con Gentamicina.

5. A los 4 o 5 das, comprobar el crecimiento en los cultivos. Una vez que se observe crecimiento, aspirar todo el medio de cultivo y aadir 2 mL de CHANG Medium D con Gentamicina fresco. A partir de este momento, es recomendable cambiar el medio de los cultivos cada 2 das.

6. Comprobar el crecimiento de los cultivos durante o despus del quinto da, y sacrificar cuando se observe que hay suficientes colonias.

7. Se obtienen mejores resultados cuando se realiza un cambio de medio con CHANG Medium D con Gentamicina el da anterior al sacrificio.

Utilizacin de CHANG Medium D con Gentamicina en cultivos primarios: Metodologa en frasco.

1. Centrifugar el lquido amnitico a baja velocidad para concentrar las clulas.

2. Resuspender el precipitado celular en un volumen pequeo del propio lquido amnitico de la paciente. Por ejemplo, aspirar el sobrenadante de 10 mL dejando 1 mL de lquido y resuspender. Aadir 4 mL de CHANG Medium D con Gentamicina para obtener un volumen total de 5 mL por frasco.

3. Sin perturbarlos, incubar los cultivos a 37C en una atmsfera de 5% - 8% CO2.

4. Revisar el crecimiento en el da 5. Cambiar el medio por CHANG Medium D con Gentamicina fresco y sacrificar el cultivo si observa un crecimiento suficiente .

5. Comprobar el crecimiento de los cultivos y cambiar completamente el medio cada da de aqu en adelante, hasta observar un nmero suficiente de colonias para sacrificar.

6. Se obtienen mejores resultados cuando se realiza un cambio de medio con CHANG Medium D con Gentamicina el da anterior al sacrificio.

Utilizacin de CHANG Medium D en el Cultivo de Clulas del Lquido Amnitico Derivadas de Cultivo Primario:

Para realizar pases de los amniocitos cultivados, tratar los cultivos con tripsina ( o pronasa, etc.) como se tratan normalmente las clulas en un medio convencional. Los amniocitos cultivados en CHANG Medium D tienden a ser ms sensibles al tratamiento con proteasas que los cultivados en medios convencionales. Aunque se puede utilizar el mismo tratamiento con tripsina, pronasa, etc..., es recomendable controlar el proceso para reajustar el protocolo en caso que sea necesario.

El pH usado de los medios debe estar entre 6.8 y 7.2 (el medio debe ser de color ligeramente asalmonado). El pH puede ajustarse fcilmente poniendo el medio en un incubador al 5% a 8% CO2, con el tapn ligeramente desenroscado durante unos 30 minutos.

Nota: Es posible la formacin de Cristales de Oxalato de Calcio CHANG Medium D con Gentamicina. No se ha demostrado que la presencia de esos cristales alteren el funcionamiento de este producto.

CHANG Medium D con Gentamicina contiene el antibitico Gentamicina. Es conveniente adoptar las medidas necesarias para garantizar que la paciente no es sensible a este antibitico.

CONTROL DE CALIDADESTERILIDADEl suero usado en la produccin de CHANG Medium D con Gentamicina se ha testado para contaminacin viral de acuerdo a la normativa CFR captulo 9, apartado 113.53. Asmismo, se ha comprobado la contaminacin por Micoplasma. CHANG Medium D con Gentamicina est esterilizado por fitracin en filtros de 0.1 micras. Las muestras de CHANG Medium D con Gentamicina se comprueban para posible contaminacin bacteriolgica siguiendo los protocolos de esterilidad descritos en el test de esterilidad USP actual.

CHANG Medium es una marca registrada de Irvine Scientific.

3. Incuber les cultures sans agitation 37C en atmosphre CO2 (5% - 8%).

4. Alimenter les cellules J2 en ajoutant 2 ml de milieu de CHANG Medium D.

5. Aprs 4 5 jours, la croissance des cultures doit tre surveille. Ds que des foyers ont t observs, les cultures doivent tre supplmentes en enlevant le surnageant et en le remplaant par 2 ml de milieu de CHANG Medium D avec Gentamicine frais. Il est ensuite recommand de changer le milieu tous les 2 jours.

6. Analyser la croissance des cellules au jour 5 et aprs et rcolter les cellules lorsque suffisamment de colonies sont observes (15 20).

7. Les meilleurs rsultats sont obtenus lorsque les cultures sont supplmentes la veille de la rcolte avec du milieu de CHANG Medium D avec Gentamicine frais.

Utilisation Du Milieu CHANG Medium D Avec Gentamicine Pour Cultures Primaires: Methode En Flacon

1. Centrifuger le liquide amniotique 1000 tours/min pendant 5 minutes pour concentrer les cellules.

2. Resuspendre le culot dans un petit volume du liquide amniotique de la patiente. Par exemple, aspirer le surnageant obtenu par la centrifugation de 10 ml de liquide, ajouter 1 ml de ce liquide au culot et resuspendre. Ajouter 4 ml de milieu de CHANG Medium D avec Gentamicine pour un volume total de 5 ml par flacon.

3. Incuber les cultures 37C en atmosphre CO2 (5%- 8%).

4. Analyser la croissance J5. Remplacer le milieu par du CHANG Medium D avec Gentamicine frais et rcolter si une croissance suffisante est observe.

5. Analyser les cultures et changer compltement le milieu tous les 2 jours jusqu ce que suffisamment de colonies soient observes et prtes tre rcoltes.

6. Les meilleurs rsultats sont obtenus lorsque les cellules sont supplments la veille de la rcolte.

Utilisation du milieu CHANG Medium D avec Gentamicine pour le Repiquage des Cellules du Liquide Amniotique:

Pour les subcultures, traiter les cultures avec la trypsine (ou pronase, etc.) comme vous le faites normalement lorsque les cellules poussent dans un milieu conventionnel. Cependant, le traitement avec des protases doit tre conduit prudemment. Les cellules amniotiques qui croissent dans le milieu de CHANG Medium D avec Gentamicine ont tendance tre plus sensibles aux protases que celles qui poussent dans un milieu traditionnel. Il est ncessaire den tenir compte dans votre protocole.

Le pH du milieu utilis pour supplmenter les cultures doit tre situ entre 6.8-7.2 (le milieu est lgrement rose clair). Le pH peut facilement tre ajust en plaant le flacon dans un incubateur CO2 (5% - 8%), le bouchon lgrement dviss, pendant 30 minutes.

Note: Des cristaux doxalate de calcium sont susceptibles de se formr dans le milieude CHANG Medium D avec Gentamicine. La prsence de ces cristaux naltrent en rien les performances du milieu.

Le milieu de CHANG Medium D avec Gentamicine contient lantibiotique Sulfate de Gentamicine. Les prcautions dusage doivent tre prises pour sassurer que les patients ne prsentent aucune sensibilit cet antibiotique.

ASSURANCE QUALITSTRILITLe srum util is pour la production du milieu de CHANG Medium D avec Gentamicine est test pour les contaminations virales et par mycoplasmes (CFR 9 title part 113.53). Le milieu de CHANG Medium D avec Gentamicine est strilis par filtration avec des filtres de 0,1 m. Des chantillons de milieu de CHANG Medium D avec Gentamicine sont tests pour une ventuelle contamination bactrienne en suivant le protocole de contrle de strilit dcrit dans les tests de strilit courants de la pharmacope amricaine (USP) .

Milieu CHANG Medium est une marque dpose de Irvine Scientific.

2511 Daimler Street, Santa Ana, California 92705-5588 USATelephone: 1 949 261 7800 1 800 437 5706

Fax: 1 949 261 6522 www.irvinesci.comPN 40791 Rev.4

For in vitro diagnostic use.

Zum Gebrauch in der in vitro Diagnostik.

Per uso diagnostico in vitro.

Para uso en diagnstico in vitro.

Pour lusage diagnostique in vitro.

Para a utilizao em diagnstico in vitro.

in vitro .

In vitro diagnostikum.

Til in vitro-diagnostik.

In vitro diagnostiseen kyttn.

Lietoanai in vitro diagnostik.

Voor in vitro diagnostisch gebruik.

Do stosowania w diagnostyce in vitro.

Pentru utilizarea fertilizrii in vitro

Fr in vitro-diagnostik.

In vitro diagnostiliseks kasutamiseks.

In vitro diagnosztikai clra.

Skirta in vitro diagnostikos tyrimams.

In vitro diyagnostik kullanm iin.

Symbols:

Storage Temperature

Expiration: Year - Month - Day

Caution: See instructions for use

European RepresentativeMPIESchutweg 13A5145 NP Waalwijk, The Netherlands

See instructionsfor use.

0050CE Mark

Catalog Number

Lot Number

MPIE Schutweg 13a5145 NP Waalwijk,

The Netherlands

Sterilized using aseptic processing techniques

(filtration)

Do Not Re-Sterilize

Do Not Use If Package Is Damaged

Do not re-use

Keep away from sunlight

PORTUGUS

UTILIZAO PREVISTAO CHANG Medium D com Gentamicina pode ser utilizado nas seguintes aplicaes:

1. Cultura primria de clulas de lquido amnitico.2. Cultura de clulas do lquido amnitico derivadas da

cultura primria.3. Cultura de clulas de medula ssea.4. Tecido amnitico slido obtido de amostras de

vilosidades corinicas.Este meio foi concebido para ser utilizado em incubadoras de CO2 (culturas equilibradas numa atmosfera com 5% - 8% CO2).

O pH final deve ser entre 6.8 - 7.2.

DESCRIO DO PRODUTO O CHANG Medium D com Gentamicina foi desenvolvido para a cultura primria de clulas humanas de lquido amnitico, para anlises de caritipo e outras provas genticas de diagnstico pr-natal. Esta Frmula Est Optimizada Para Metodologias Em Recipiente E In Situ.

ESTABILIDADE E CONSERVAOConservar o CHANG Medium D com Gentamicina congelado entre -10C. Uma vez descongelado, o CHANG Medium D com Gentamicina pode ser recongelado ou conservado refrigerado entre 2C e 8C.

Proteger este produto da luz fluorescente.

O CHANG Medium D com Gentamicina estvel at data de expirao indicada no rtulo do frasco. Uma vez descongelado, pode ser recongelado no mximo 2 vezes e conservado refrigerado entre 2C e 8C no mximo 14 dias sem alterar a sua funcionalidade. O armazenamento para alm de 14 dias no recomendado.

COMPONENTES mg/LSais .................................................................... 8515Dextrose ............................................................... 880Aminocidos ......................................................... 804L-Glutamina .......................................................... 257Polipptidos .......................................................... 189Vitaminas ............................................................... 61Desoxirribonuclesidos ........................................... 35Ribonuclesidos ..................................................... 35Piruvato de Sdio ................................................... 97Gentamicina ...........................................................50Outros Componentes ............................................... 9Hormonas Esterides ...................................... 0.0009Protenas de Soro Bovino .............................. 12% v/vVermelho de Fenol .................................................. 10

PRECAUES E AVISOSEste dispositivo deve ser utilizado por funcionrios treinados em procedimentos aos quais se destina.

No use nenhum frasco em que o embalamento esterilizado tenha sido comprometido.

No utilizar o CHANG Medium D com Gentamicina depois da data de expirao indicada no rtulo.

PREPARAO DO PRODUTO 1. Descongelar o CHANG Medium D com Gentamicina

rapidamente pondo o recipiente em banho Maria a 37 C e agitando com movimentos circulares.

2. O Meio CHANG Medium D com Gentamicina contm o antibitico Sulfato de Gentamicina (50 g/mL). Se desejar, pode adicionar antibiticos adicionales.

PARA ALIQUOTAR O CHANG MEDIUM D COM GENTAMICINA 1. Descongelar o CHANG Medium D com Gentamicina

de acordo com as instrues.2. Em condies de esterilidade, distribuir em alquotas

de tamanho conveniente, e recongelar.3. Descongelar as alquotas em banho Maria a 37C no

momento de utilizao.

INSTRUES DE UTILIZAOUtilizao de CHANG Medium D com Gentamicina em culturas primrias: Metodologia In Situ.

1. Centrifugar o lquido amnitico a baixa velocidade para concentrar as clulas.

2. Ressuspender o precipitado de clulas num volume pequeno do prprio lquido amnitico do doente. Por exemplo, aspirar o sobrenadante de 10 mL deixando 0.5 mL de lquido, e ressuspender. Adicionar suficiente CHANG Medium D com Gentamicina suspenso concentrada de clulas para alcanar um volume

CHANG Medium D : 1. 2. 3. 4.

CO2 ( 5%-8% CO2). pH 6.8-7.2. To CHANG Medium D , . in situ. CHANG Medium D -10C. CHANG Medium D , 2C 8C. . . . CHANG Medium D 2 2C 8C 14 , . 14 . mg/L 8515 880 804L- 257 189 61 35 35 97 50 9 0.0009 12% v/v 10 . . CHANG Medium D .

1. CHANG Medium D

, 37C.

2. CHANG Medium D (50 g/mL). .

CHANG MEDIUM D

1. CHANG Medium D .

2. .

3. 37C .

CHANG Medium D : in situ 1. ,

, . 2. -

. , 10 mL 0.5 mL -. CHANG Medium D

ESKY

,UREN POUIT CHANG Medium D s gentamycinem lze pout k nsledujcm innostem: 1. primrn kultivace bunk z plodov vody 2. mnoen pasovanch bunk z plodov vody 3. kultivace bunk kostn den 4. odbr vzork pevn amniotick tkn z choriovch klk.

Toto mdium je ureno k pouit v CO2 inkubtorech (kultivace v atmosfe s 5-8 % CO2).

Vsledn pH mus bt v rozmez 6,8-7,2.

POPIS VROBKU CHANG Medium D s gentamycinem bylo vyvinuto k primrn kultivaci lidskch bunk z plodov vody pro ely karyotypizace a jinch genetickch test. Sloen ppravku bylo optimalizovno pro kultivaci v lahvch i in situ.

UCHOVN A STABILITA CHANG Medium D s gentamycinem uchovvejte zmrazen pi teplot -10 C. Nespotebovan materil lze znovu zmrazit nebo uchovvat pi teplot 2-8 C.

Chrate ped fluorescennm svtlem.

Konkrtn datum pouit najdete na ttku lahviky. CHANG Medium D s gentamycinem lze maximln 2 x znovu zmrazit a rozmrazen skladovat pi teplot 2 a 8 C po 14 dn bez zhoren jeho funknosti. Skladovn dle ne 14 dn se nedoporuuje.

SLOKY mg/lSoli 8515Glukza . 880Aminokyseliny 804L-glutamin .. 257Polypeptidy 189Vitamny 61Deoxyribonukleosidy . 35Ribonukleosidy 35Pyruvt sodn .97Gentamicin sulft 50Jin sloky 9Steroidn hormony .. 0,0009Hovz srov proteiny .. 12 % obj.Fenolerve 10

BEZPENOSTN OPATEN A VAROVN Zazen bylo ureno pro pouit kolenm personlem pi zkrocch, kter zahrnuj indikovanou aplikaci, pro kterou je zazen ureno.

Nepouvejte dnou lahev s pokozenm sterilnm balenm.

Nepouvejte mdium po uplynut doby pouitelnosti uveden na ttku.

PPRAVA K POUIT 1. Rychle CHANG Medium D rozmrazte krouenm lahv

ve vodn lzni vyht na 37 C. 2. CHANG Medium D s gentamycinem obsahuje

antibiotikum gentamycin (50 g//mL). V ppad poteby lze pidat dal antibiotika.

DVKOVN MDIA 1. CHANG Medium D s gentamycinem rozmrazte podle

pokyn. 2. Asepticky rozdlte do alikvot o vhodn velikosti a

znovu zmrazte. 3. Ped pouitm alikvoty rozmrazte ve vodn lzni vyht

na 37 C.

POKYNY K POUIT Pouit mdia k primrn kultivaci: kultivace in situ

1. Odstete plodovou vodu pi nzkch otkch a koncentrujte tak buky.

2. Rozpuste bunnou peletu v malm objemu plodov vody stejn pacientky. Napklad odsajte supernatant z 10 ml plodov vody a ponechte jen 0,5 ml nad peletou. Pot znovu rozpuste. Ke koncentrovan bunn suspenzi pidejte dostaten mnostv CHANG Medium D s gentamycinem, abyste mli 0,5 ml suspenze na jedno kryc sklko (celkem 4 kryc sklka) nebo 2 ml na kultivan lahviku.

3. Inkubujte kultury v klidu pi teplot 37C a v atmosfe 5-8 % CO2.

4. Druh den kultury zalijte 2 ml ppravku CHANG Medium D s gentamycinem.

DANSK

ANVENDELSECHANG Medium D med gentamicin kan anvendes til flgende applikationer: 1. Primr dyrkning af amnionvskeceller 2. Dyrkning af passerede amnionvskeceller 3. Dyrkning af knoglemarvsceller 4. Solidt amnionvv fra chorionvilliprver

Dette medium er fremstillet til brug i CO2-inkubatorer (kulturer der er tilpasset en atmosfre p 5-8 % CO2).

Den endelige pH-vrdi skal ligge p 6,8-7,2.

PRODUKTBESKRIVELSE CHANG Medium D med gentamicin blev udviklet til primr dyrkning af humane amnionvskeceller til karyotypebestemmelse og anden antenatal genetisk testning. Denne formulering er blevet optimeret til metodologier til svel kolbe som in situ.

OPBEVARING OG STABILITET CHANG Medium D med gentamicin skal opbevares frossent ved -10 C. Ubrugt CHANG Medium D med gentamicin kan nedfryses igen eller opbevares ved 2-8 C.

Beskyttes mod fluorescerende lys.

Se udlbsdatoen p flaskens etiket. CHANG Medium D med gentamicin kan nedfryses hjest 2 gange efter optning og opbevares optet ved 2-8 C i 14 dage uden, at det pvirker dets virkning. Det anbefales ikke at opbevare det lngere end 14 dage.

KOMPONENTER Salte .. 8515Dekstrose ... 880Aminosyrer . 804L-glutamin .. 257Polypeptider ... 189Vitaminer .. 61Deoxyribonukleosider . 35Ribonukleosider .. 35Natriumpyruvat 97Gentamicinsulfat . 50Andre komponenter 9Steroidhormoner . 0,0009Bovine serumproteiner .. 12 % vol/volFenolrdt . 10

FORHOLDSREGLER OG ADVARSLER Dette udstyr er beregnet til brug af personale, der er uddannet i procedurer, der inkluderer den indicerede anvendelse, som dette udstyr er beregnet til.

Anvend ikke nogen flasker, hvor den sterile emballage er blevet kompromitteret.

CHANG Medium D med gentamicin m ikke anvendes efter udlbsdatoen p etiketten.

FORBEREDELSE 1. Opt hurtigt CHANG Medium D med gentamincin ved

at hvirvle flasken i et 37C vandbad. 2. CHANG Medium D med gentamicin indeholder

antibiotikummet gentamincin (50 g/mL). Flere antibiotika kan eventuelt tilsttes.

AFMLING AF CHANG MEDIUM D I MINDRE MNGDER 1. Opt CHANG Medium D med gentamicin iflge

vejledningen. 2. Fordel mediet aseptisk i mngder af passende strrelse

og nedfrys dem. 3. Opt de opdelte mngder i et 37C vandbad, nr de

skal bruges.

BRUGSANVISNING Anvendelse af CHANG Medium D med gentamicin til primre kulturer: Metodologi in situ

1. Centrifuger amnionvsken ved lav hastighed for at koncentrere cellerne.

2. Resuspender cellepelleten i en lille volumen af pa t ien tens egen amnionvske. Asp i re r fx supernatanten fra 10 ml centrifugeret amnionvske til 0,5 ml over cellepelleten, og resuspender. Tilst nok CHANG Medium D med gentamicin til den koncentrerede cellesuspension for at f en endelig volumen p 0,5 ml pr. dkglas (i alt 4 dkglas) eller 2 ml pr. ampul.

3. Inkubr kulturerne uforstyrret ved 37C i en atmosfre med 5-8 % CO2.

4. Skyl kulturerne p dag 2 ved at tilstte 2 ml CHANG Medium D med gentamicin.

SUOMI

KYTTTARKOITUSCHANG Medium D + gentamisiini -elatusainetta voidaan kytt seuraaviin sovellutuksiin: 1. amnionnesteen solujen primriviljely 2. viljelmss jakautuneiden amnionnesteen solujen

kasvatus 3. luuydinsolujen viljely 4. kiinte amnionkudos korionvillusnytteist.

Tm elatusaine on tarkoitettu kytettvksi CO2-soluviljelykaapeissa (viljelmt tasapainotettu 5 % 8 % CO2-ilmakehss).

Lopullisen pH:n on oltava 6,87,2.

TUOTTEEN KUVAUS CHANG Medium D + gentamisiini kehitettiin ihmisen amnionnesteen solujen primrist viljely varten karyotyypityst ja muuta antenataalista geneettist testausta varten. Tm koostumus on optimoitu sek pullossa suoritettavia ett in situ menetelmi varten.

SILYTYS JA STABIILIUS Silyt CHANG Medium D + gentamisiini pakastettuna -10 C lmptilassa. Kyttmtn CHANG Medium D + gentamisiini voidaan pakastaa uudelleen tai silytt 2 C 8 C:n lmptilassa.

Suojaa fluoresoivalta valolta.

Katso viimeinen kyttpiv pullon etiketist. CHANG Medium D + gentamisiini voidaan pakastaa uudelleen korkeintaan 2 kertaa ja sit voidaan silytt sulatettuna lmptilassa 2 C 8 C 14 piv ilman ett sen toiminta muuttuisi. Yli 14 pivn silytyst ei suositella.

AINEOSAT mg/lSuolat .. 8515Dekstroosi .. 880Aminohapot .. 804L-glutamiini .. 257Polypeptidit .. 189Vitamiinit .. 61Deoksiribonukleosidit .. 35Ribonukleosidit .. 35Natriumpyruvaatti .. 97Gentamisiinisulfaatti .. 50Muut aineosat .. 9Steroidihormonit .. 0,0009Naudan seerumiproteiinit .. 12 % v/vFenolipuna .. 10

VAROTOIMET JA VAROITUKSET Tm laite on tarkoitettu sellaisten henkiliden kytettvksi, jotka on koulutettu suorittamaan toimenpiteit, joihin kuuluu laitteen kytttarkoituksen mukainen asianmukainen kytt.

Pulloa ei saa kytt, jos sen steriili pakkaus on vahingoittunut.

l kyt CHANG Medium D + gentamisiini -elatusainetta etiketiss annetun viimeisen kyttpivn jlkeen.

VALMISTELU KYTT VARTEN 1. Sulata CHANG Medium D + gentamisiini nopeasti

pyrittmll pulloa 37 C:n vesihauteessa. 2. CHANG Medium D + gentamisiini sislt antibioottia,

gentamisiinia (50 g/mL). Muita antibiootteja voidaan list haluttaessa.

CHANG MEDIUM D:n JAKAMINEN ERIIN 1. Sulata CHANG Medium D + gentamisiini ohjeiden

mukaan. 2. Jaa aseptisesti sopivan kokoisiin alikvootteihin (eriin)

ja pakasta uudelleen. 3. Sulata alikvootit 37 C:n vesihauteessa kun olet valmis

kyttmn niit.

KYTTOHJEET CHANG Medium D + gentamisiini -elatusaineen kytt primriviljelmiin: in situ menetelmt

1. Sentrifugoi amnionneste pienell nopeudella solujen konsentroimiseksi.

2. Suspendoi solusakka uudelleen pieneen tilavuuteen potilaan omaa amnionnestett. Esimerkiksi ime sentrifugoidun amnionnesteen (10 ml) supernatantti 0,5 ml:n tilavuuteen solusakan ylpuolella ja suspendoi uudelleen. Lis riittvsti CHANG Medium D + gentamisiini -elatusainetta konsentroituun solusakkaan, jotta lopullinen maljaustilavuus on 0,5 ml per peitinlasi (kaikkiaan 4 peitinlasia) tai 2 ml per pieni pullo.

de cultura final de 0.5 mL por lamela (num total de 4 lamelas), ou 2 mL por recipiente.

3. Sem perturbar, incubar as culturas a 37C numa atmosfera de 5% - 8% CO2.

4. No dia 2 de cultura, adicionar 2 mL de CHANG Medium D com Gentamicina.

5. Aps 4 ou 5 dias, comprovar o crescimento das culturas. Uma vez que se observe crescimento, aspirar todo o meio de cultura e adicionar 2 mL de CHANG Medium D com Gentamicina fresco. A partir deste momento, recomendvel mudar o meio de cultura de 2 em 2 dias.

6. Verificar o crescimento das culturas durante ou depois do quinto dia, e colher quando se observem nmeros suficientes de colnias.

7. Obtm-se melhores resultados quando se muda o meio com CHANG Medium D com Gentamicina no dia anterior colheita.

Utilizao de CHANG Medium D com Gentamicina em culturas primrias: Metodologia em recipiente.

1. Centrifugar o lquido amnitico a baixa velocidade para concentrar as clulas.

2. Ressuspender o precipitado de clulas num volume pequeno do prprio lquido amnitico do doente. Por exemplo, aspirar o sobrenadante de 10 mL deixando 1 mL de lquido e ressuspender. Adicionar 4 mL de CHANG Medium D com Gentamicina para obter um volume total de 5 mL por recipiente.

3. Sem perturbar, incubar as culturas a 37C numa atmosfera de 5% - 8% CO2.

4. Verificar o crescimento ao dia 5. Mudar o meio por CHANG Medium D com Gentamicina fresco e colher a cultura se observar um crescimento suficiente .

5. Verificar o crescimento das culturas e mudar completamente o meio todos os dias daqui para a frente at observar um nmero suficiente de colnias para colheita.

6. Obtm-se melhores resultados quando se muda o meio com CHANG Medium D com Gentamicina no dia anterior colheita.

Utilizao de CHANG Medium D na Cultura de Clulas do Lquido Amnitico Derivadas de Culturas Primrias:

Para passar as clulas cultivadas, tratar as culturas com tripsina (ou pronase, etc.) tal como se tratam normalmente as clulas num meio convencional. Contudo, o tratamento com pronase deve ser monitorizado cuidadosamente. Os amnicitos cultivados em Meio CHANG Medium D com Gentamicina tendem a ser mais sensveis ao tratamento com proteases que os cultivados em meios convencionais. Tendo este aspecto em conta, pode ser por vezes necessrio reajustar o protocolo.

O pH do meio utilizado deve estar entre 6.8 e 7.2 (o meio deve apresentar uma colorao ligeiramente cor de salmo). O pH pode ajustar-se facilmente colocando o meio numa incubadora a 5% - 8% CO2, com a tampa ligeiramente desenroscada durante 30 minutos.

Nota: possvel a formao de Cristais de Oxalato de Clcio no CHANG Medium D com Gentamicina. No est demonstrado que a presena destes cristais altere o funcionamento deste produto.

O Meio CHANG Medium D com Gentamicina contm o antibitico Sulfato de Gentamicina. conveniente adoptar as medidas necessrias para garantir que o doente no sensvel a este antibitico.

CONTROLO DE QUALIDADEESTERILIDADEO soro utilizado na produo de CHANG Medium D com Gentamicina foi testado para a contaminao viral de acordo com a norma CFR captulo 9, parte 113.53. Foi tambm testado para a contaminao por Micoplasma. O CHANG Medium D com Gentamicina esterilizado por filtrao com filtros de 0.1 micras. As amostras de CHANG Medium D com Gentamicina foram testadas para a possvel contaminao bacteriolgica seguindo os protocolos de esterilidade descritos no teste de esterilidade actual da USP .

CHANG Medium uma marca registada da Irvine Scientific.

0.5 mL ( 4 ) 2 mL .

3. 37C 5%-8% CO2 .

4. 2 , 2 mL CHANG Medium D .

5. 4 5 , . . 2 mL CHANG Medium D . 2 .

6. / 5 .

7. CHANG Medium D .

CHANG Medium D : 1.

. 2. -

. , 10 mL 1 mL -. 4 mL CHANG Medium D 5 mL .

3. 37C 5%-8% CO2 .

4. 5 . CHANG Medium D .

5. , .

6. CHANG Medium D .

CHANG Medium D : , ( , .) . , . CHANG Medium D . . pH 6.87.2 ( ). pH , 5%-8% CO2 30 . : C H A N G M e d i u m D . . CHANG Medium D . . CHANG Medium D CFR Title 9 Part 113.53. . CHANG Medium D 0.1 . CHANG Medium D , . CHANG Medium Irvine Scientific.

5. Po 4 5 dnech zkontrolujte rst kultur. Jakmile zanou rst, je teba dodat iviny. Odstrate proto veker supernatant a nahrate 2 ml erstvho CHANG Medium D s gentamycinem. Pot doporuujeme doplovat iviny kad 2 dny.

6. Dle rst kultury kontrolujte prbn a odeberte materil, jakmile se vytvo dostatek koloni.

7. Optimlnch vsledk doshnete odebrnm materilu den po pidn erstvho mdia.

Pouit k primrn kultivaci: kultivace v lahvch

1. Odstete plodovou vodu pi nzkch otkch a koncentrujte tak buky.

2. Rozpuste bunnou peletu v malm objemu plodov vody stejn pacientky. Napklad odsajte supernatant z 10 ml plodov vody a ponechte jen 1 ml nad peletou. Pot znovu rozpuste. Pidejte 4 ml ppravku CHANG Medium D s gentamycinem do celkovho objemu 5 ml na lhev.

3. Inkubujte kultury v klidu pi teplot 37 C a atmosfe 5-8 % CO2.

4. Zkontrolujte rst 5. den. Vymte mdium za erstv CHANG Medium D s gentamycinem, a pokud je kultura dostaten narostl, odeberte materil.

5. Pot denn kontrolujte rst kultury a zcela vymujte mdium, dokud se nevytvo dostatek koloni a nejsou pipraveny k pouit.

6. Optimlnch vsledk doshnete odebrnm materilu den po pidn erstvho mdia.

Pouit k mnoen pasovanch bunk z plodov vody:

Chcete-li buky pasovat, oetete kulturu trypsinem (nebo pronzou atd.), jak to normln provdte u bunk pstovanch v konvennm mdiu. Prbh oeten protezou vak peliv monitorujte. Buky z plodov vody kultivovan v ppravku CHANG Medium D s gentamycinem bvaj citlivj na oeten protezou ne buky z konvennho mdia. Mon bude nutn v tomto smyslu upravit protokol.

pH mdia pouvanho k doplnn ivin mus bt v rozmez 6,87,2 (mdium tedy mus mt mrn naloutlou lososovou barvu). pH lze snadno upravit vloenm mdia s mrn povolenou epikou asi na 30 minut do inkubtoru s atmosfrou 5-8 % CO2.

Poznmka: V mdiu se bn tvo krystalky oxaltu vpenatho. Ptomnost krystalk nen podle veho na zvadu funkci ppravku.

CHANG Medium D s gentamycinem obsahuje antibiotikum gentamycin. Dbejte na vasn odhalen pacientek alergickch na toto antibiotikum.

KONTROLA KVALITY STERILITA Srum pouit k produkci mdia bylo testovno na monou virovou kontaminaci dle americkho pedpisu CFR Title 9 Part 113.53. Byl proveden tak screening mon kontaminace mykoplazmaty. Mdium je sterilizovno filtrac pes 0,1m filtry. Vzorky mdia jsou kontrolovny s ohledem na monou kontaminaci, a to podle protokolu pro test sterility popsanho v aktulnm znn testu USP Sterility .

CHANG Medium je registrovan ochrann znmka spolenosti Irvine Scientific.

5. Efter 4-5 dage skal kulturernes vkst kontrolleres. Kulturerne skal forsynes med nyt medium, nr vkst observeres. Dette gres ved at fjerne hele kultursupernatanten og tilstte 2 ml friskt CHANG Medium D med gentamicin. Det anbefales, at kulturerne forsynes med friskt medium hver 2. dag derefter.

6. Kontroller kulturernes vkst p/eller efter dag 5 og hst, nr der kan observeres nok kolonier.

7. De bedste resultater opns, hvis kulturerne forsynes med CHANG Medium D med gentamicin dagen inden, at de hstes.

Anvendelse af CHANG Medium D med gentamicin til primre kulturer. Metodologi med kolbe

1. Centrifuger amnionvsken ved lav hastighed for at koncentrere cellerne.

2. Resuspender cellepelleten i en lille volumen af pa t ien tens egen amnionvske. Asp i re r fx supernatanten fra 10 ml centrifugeret amnionvske til 1 ml over cellepelleten, og resuspender. Tilst 4 ml CHANG Medium D med gentamicin, s den totale volumen er 5 ml pr. kolbe.

3. Inkubr kulturerne uforstyrret ved 37 C i en atmosfre med 5-8 % CO2.

4. Kontroller vksten p dag 5. Udskift mediet med friskt CHANG Medium D med gentamicin og hst, hvis tilstrkkelig cellevkst kan observeres.

5. Kontroller kulturernes vkst og udskift mediet fuldstndigt hver dag derefter, indtil nok kolonier kan observeres, som er klar til at blive hstet.

6. De bedste resultater opns, hvis kulturerne forsynes med CHANG Medium D med gentamicin dagen inden, at de hstes.

Anvendelse af CHANG Medium D med gentamicin til dyrkning af passerede amnionvskeceller:

Passage af cellerne opns ved at behandle kulturerne med trypsin (eller pronase m.m.) som ved celler, der dyrkes i konventionelt medium. Proteasebehandling skal imidlertid overvges nje. Amnionvskeceller, der dyrkes i CHANG Medium D med gentamicin, har en tendens til at vre mere sensitive over for proteasebehandling end amnionvskeceller, der dyrkes i konventionelt medium. Det kan vre ndvendigt at ndre protokollen for at tage hensyn hertil.

pH-vrdien af det medium, der anvendes til kulturerne, skal vre 6,8-7,2 (dvs. at mediet skal have en let gullig laksefave). pH-vrdien kan let justeres ved at anbringe mediet i en inkubator med 5-8 % CO2 med lget lsnet let i ca. 30 minutter.

B e m r k : D e r d a n n e s o f t e kalciumoxalatkrystaller i CHANG Medium D. Tilstedevrelsen af disse krystaller lader ikke til at forrsage nogen skadelig effekt p produktets performance.

CHANG Medium D med gentamicin indeholder antibiotikummet gentamincin. Forholdsregler skal tages for at sikre, at patienten ikke er sensibiliseret over for dette antibiotikum.

KVALITETSSIKRINGSTERILITET Det serum, der er anvendt til fremstilling af CHANG Medium D med gentamicin, er blevet testet for viruskontamination iflge CFR Title 9 Part 113.53. Det er ogs blevet screenet for mykoplasmakontamination. CHANG Medium D med gentamicin er steriliseret vha. filtrering gennem et filter p 0,1 mikron. Prver af CHANG Medium D med gentamicin er blevet testet for bakteriologisk kontamination iflge den aktuelle protokol for sterilitetstesting som beskrevet i den aktuelle USP sterilitetstest .

CHANG Medium er et registreret varemrke tilhrende Irvine Scientific.

3. Inkuboi viljelmi niit liikuttamatta 37 C:n lmptilassa 5 % 8 % CO2-ilmakehss.

4. Tyt viljelmt pivn 2 lismll 2 ml CHANG Medium D + gentamisiini -elatusainetta.

5. Viljelmien kasvu tulee tarkistaa 45 pivn kuluttua. Viljelmi on ruokittava kun kasvua on havaittu. Ruoki viljelmi poistamalla kaikki viljelmn supernatantti ja korvaamalla se 2 ml:lla tuoretta CHANG Medium D + gentamisiini -elatusainetta. On suositeltavaa, ett viljelmi ruokitaan tmn jlkeen joka toinen piv.

6. Tarkista viljelmien kasvu pivn 5 tai sen jlkeen ja ker solut, kun havaitset riittvn mrn peskkeit.

7. Parhaat tulokset saadaan, kun viljelmi ruokitaan CHANG Medium D + gentamisiini -elatusaineella kermist edeltvn pivn.

CHANG Medium D + gentamisiini -elatusaineen kytt primriviljelmiin: Pullossa suoritettavat menetelmt

1. Sentrifugoi amnionneste pienell nopeudella solujen konsentroimiseksi.

2. Suspendoi solusakka uudelleen pieneen tilavuuteen potilaan omaa amnionnestett. Esimerkiksi ime sentrifugoidun amnionnesteen (10 ml) supernatantti 1 ml:n tilavuuteen solusakan ylpuolella ja suspendoi uudelleen. Lis 4 ml CHANG Medium D + gentamisiini -elatusainetta niin, ett kokonaistilavuus on 5 ml per pullo.

3. Inkuboi viljelmi niit liikuttamatta 37 C:n lmptilassa 5 % 8 % CO2-ilmakehss.

4. Tarkista kasvu pivn 5. Vaihda elatusaine tuoreeseen CHANG Medium D + gentamisiini -elatusaineeseen ja ker, jos havaitset riittv solujen kasvua.

5. Tarkista viljelmien kasvu ja vaihda elatusaine kokonaan joka piv tmn jlkeen, kunnes riittvsti peskkeit havaitaan ja ne ovat valmiita kerttviksi.

6. Parhaat tulokset saadaan, kun viljelmi ruokitaan CHANG Medium D + gentamisiini -elatusaineella kermist edeltvn pivn.

CHANG Medium D + gentamisiini -elatusaineen kytt viljelmss jakautuneiden amnionnesteen solujen kasvattamiseksi:

Kun haluat antaa solujen jakautua viljelmss, ksittele viljelmi trypsiinill (tai pronaasilla jne.), kuten normaalisti tekisit silloin kun soluja kasvatetaan tavanomaisessa elatusaineessa. Proteaasiksittely on kuitenkin seurattava huolellisesti. Amnionnesteen soluilla, jotka kasvatetaan CHANG Medium D + gentamisiini -elatusaineessa, on taipumus olla herkempi proteaasiksittelylle kuin amnionnesteen soluilla, jotka kasvatetaan tavanomaisessa elatusaineessa. Protokollan muuttaminen tmn ottamiseksi huomioon saattaa olla tarpeen.

Vi l j e l m i e n r u o k k i m i s e e n k y t e t y n elatusaineen pH:n on oltava vlill 6,87,2 (eli elatusaineen on oltava vriltn hieman kellertvn lohenpunainen). pH:ta voidaan st helposti sijoittamalla elatusaine 5 % 8 % CO2-soluviljelykaappiin noin 30 minuutiksi niin ett korkki on hieman lysll.

Huomaa: CHANG Medium D:hen muodostuu usein kalsiumoksalaattikiteit. Niden kiteiden lsnolon ei ole osoitettu aiheuttavan mitn haitallista vaikutusta tuotteen suorituskykyyn.

CHANG Medium D + gentamisiini sislt antibioottia, gentamisiinia. Asianmukaisiin v a r o t o i m i i n o n r y h d y t t v s e n varmistamiseksi, ett potilas ei herkisty tlle antibiootille.

LAADUNVARMISTUSSTERIILIYS CHANG Medium D + gentamisiini -elatusaineen tuotantoon kytettvst seerumista on testattu viruskontaminaatio CFR Title 9 Part 113.53:n mukaisesti. Sille on mys tehty mykoplasmakontaminaatiota koskeva seulontatutkimus. CHANG Medium D + gentamis i in i s ter i lo idaan suodattamalla 0,1 mikronin suodattimen lpi. CHANG Medium D + gentamisiini -elatusaineen nytteist testataan mahdollinen bakteerikontaminaatio noudattamalla steriiliystestausprotokollan mukaisesti, joka on kuvattu nykyisess USP-steriiliystestiss .

CHANG Medium on Irvine Scientificin rekisterity tavaramerkki.

CHANG Medium D with GentamicinFor Human Amniotic Fluid Cells

Catalog No. 99404

ENGLISH

INTENDED USECHANG Medium D with Gentamicin may be used for the following applications: 1. the primary culture of amniotic fluid cells 2. growing passaged amniotic fluid cells 3. the culture of bone marrow cells 4. solid amnion tissue from chorionic villi sampling.

This medium has been designed for use in CO2 incubators (cultures equilibrated with 5%-8% CO2 atmosphere).

The final pH must be 6.8-7.2.

PRODUCT DESCRIPTION CHANG Medium D with Gentamicin was developed for the primary culture of human amniotic fluid cells for use in karyotyping and other antenatal genetic testing. This formula has been optimized for both flask and in situ methodologies.

STORAGE AND STABILITY Store CHANG Medium D with Gentamicin frozen at -10C. Unused CHANG Medium D with Gentamicin can be refrozen or stored at 2C to 8C.

Protect from fluorescent light.

See bottle label for specific expiration date. CHANG Medium D with Gentamicin may be refrozen a maximum of 2 times and stored thawed at 2C to 8C for 14 days without affecting its function. Storage for longer than 14 days is not recommended.

COMPONENTS mg/LSalts .. 8515Dextrose 880Amino Acids 804L-Glutamine .... 257Polypeptides 189Vitamins 61Deoxyribonucleosides .. 35Ribonucleosides . 35Sodium Pyruvate 97Gentamicin Sulfate 50Other Components . 9Steroid Hormones 0.0009Bovine Serum Proteins 12% v/vPhenol Red ......... 10

PRECAUTIONS AND WARNINGS This device is intended to be used by staff trained in procedures that include the indicated application for which the device is intended.

Do not use any bottle in which the sterile packaging has been compromised.

Do not use CHANG Medium D with Gentamicin beyond the expiration date indicated on the label.

PREPARATION FOR USE 1. Thaw CHANG Medium D with Gentamicin rapidly by

swirling bottle in a 37C water bath. 2. CHANG Medium D with Gentamicin contains

the antibiotic Gentamicin (50 g/mL). Additional antibiotics may be added if desired.

ALIQUOTING CHANG MEDIUM D 1. Thaw CHANG Medium D with Gentamicin according

to instructions. 2. Distribute aseptically into convenient sized aliquots

and refreeze. 3. Thaw aliquots in 37C water bath when ready to use.

DIRECTIONS FOR USE Use of CHANG Medium D with Gentamicin for Primary Cultures: in situ Methodologies

1. Centrifuge amniotic fluid at low speed to concentrate the cells.

2. Resuspend the cell pellet in a small volume of the patients own amniotic fluid. For example, aspirate the supernate of 10 mL of spun amniotic fluid to 0.5 mL above the cell pellet and resuspend. Add sufficient CHANG Medium D with Gentamicin to the concentrated cell suspension to allow for final plating volume of 0.5 mL per cover slip (total of 4 coverslips) or 2 mL per flaskette.

DEUTSCH

BESTIMMUNGSZWECKCHANG Medium D mit Gentamicin kann fr folgende Methoden eingesetzt werden:1. Primr Kultur von Amnionzellen2. Kultur passagierter Amnionzellen3. Kultur von Knochenmarkszellen4. Amniongewebe aus Chorion Villi

Probenentnahme.

Dieses Medium wurde hergestellt fr die verwendung in CO2 inkubatoren (Kulturen equilibriert mit 5%-8% CO2 atmosphre).

Der pH Wert muss 6.8-7.2 betragen.

PRODUKTBESCHREIBUNGCHANG Medium D mit Gentamicin wird verwendet zur Primrkultur von humanen Amnionzellen, Karyotyping und anderen prnatalen genetischen Testmethoden. Die Zusammensetzung wurde sowohl fr Flaschen- als auch fr In Situ-Methoden optimiert.

LAGERBEDINGUNGEN UND STABILITTCHANG Medium D mit Gentamicin gefroren bei -10C. Ungebrauchtes CHANG Medium D mit Gentamicin kann wieder eingefroren oder bei 2 C to 8 C im Khlschrank aufbewahrt werden.

Vor fluoreszierendem Licht schtzen.

Das Verfallsdatum steht chargenspezifisch auf dem Flaschenetikett. CHANG Medium D mit Gentamicin kann maximal 2 mal wieder eingefroren werden oder bei 2 C bis 8 C fr 14 Tage ohne Qualittsverlust aufbewahrt werden. Eine lngere Khlschranklagerung kann nicht empfohlen werden.

BESTANDTEILE mg/LSalze ..................................................................8515Dextrose .......................................................................880Aminosuren ................................................................804L-Glutamin ...................................................................257Polypeptides .................................................................189Vitamine .........................................................................61Deoxyribonukleoside .....................................................35Ribonukleoside ..............................................................35Natrium Pyruvat .............................................................97Gentamicin ... 50andere Komponenten ... 9Steroid Hormone . 0.0009Bovine Serum Proteine 12% v/vPhenol Rot .....................................................................10

VORSICHTSMASSNAHMEN UND WARNUNGENDiese Vorrichtung ist fr die Anwendung durch Personal vorgesehen, das in Verfahren ausgebildet wurde, welche die fr diese Vorrichtung angegebene zugelassene Anwendung beinhalten.

Keine Flaschen verwenden, deren sterile Verpackung beschdigt wurde.

CHANG Medium D mit Gentamicin sollte nicht ber das verfallsdatum (siehe Etikett) hinaus verwendet werden.

GEBRAUCHSVORBEREITUNG1. CHANG Medium D mit Gentamicin durch Schwenken

im 37 C Wasserbad schnell auftauen.2. CHANG Medium D mit Gentamicin enthaelt das

antibiotische Gentamicin (50 g/mL). Mehr antibiotika knnen, falls gewnscht, zugefgt werden.

ALIQUOTIEREN VON CHANG MEDIUM D1. CHANG Medium D mit Gentamicin entsprechend

den instruktionen auftauen.2. Aseptisch in gewnschte aliquots aufteilen und

einfrieren.3. Aliquots vor gebrauch im 37 C wasserbad auftauen.

GEBRAUCHSHINWEISECHANG Medium D mit Gentamicin fr Primrkulturen: In Situ Methoden

1. Amnionf lssigkei t bei niedr igen Drehzahlen zentrifugieren, um die Zellen zu konzentrieren.

2. Das Zellpellet in einer kleinen Menge patienteneigener Amnionflssigkeit resuspendieren. zB: den berstand von 10 ml der zentrifugierten Amnionflssigkeit bis auf o,5 ml ber dem Zellpellet aspirieren und resuspendieren. Ausreichend CHANG Medium D with Gentamicin zu der konzentrierten Zellsuspension

ITALIANO

USO RACCOMANDATOCHANG Medium D con gentamicina pu essere utilizzato nelle applicazioni:1. colture primarie di cellule di liquido amniotico2. colture secondarie di cellule di liquido amniotico3. colture di cellule di midollo osseo4. tessuto amniotico da villi coriali

Questo terreno e stato sviluppato per luso in incubatore con CO2 (colture equilibrate in atmosfera con il 5 - 8% di CO2).

Il pH finale deve essere fra 6.8 7.2.

DESCRIZIONE DEL PRODOTTOCHANG Medium D con gentamicina stato sviluppato per colture primarie di cellule di fluido amniotico umano per la determinazione del cariotipo ed altri test genetici prenatali. Questa formula stata ottimizzata per sistemi in fiasca e metodologie in situ.

ISTRUZIONI PER LA CONSERVAZIONEConservare il CHANG Medium D con gentamicina congelato a una temperatura tra -10C. Il terreno non utilizzato pu essere ricongelato o conservato a 2 - 8C.

Proteggere dalla luce fluorescente.

Far riferimento alle etichette dei singoli componenti per le date di scadenza specifiche. Il CHANG Medium D con gentamicina non pu essere ricongelato per pi di 2 volte; una volta scongelato pu essere conservato a 2 - 2-8C per 14 giorni prima delluso senza che le prestazioni risultino alterate. Si raccomanda di non conservarlo a 2-8C per pi di 14 giorni.

COMPONENTImg/L

Sale ............................................................................... 8515Destrosio ........................................................................ 880Aminoacidi ...................................................................... 804Glutamina-L .................................................................... 257Polipeptidi ........................................................................ 189Vitamine ............................................................................ 61Desossiribonucleosidi ......................................................35Ribonucleosidi ..................................................................35Piruvato di Sodio ............................................................. 97Gentamicina Solfato..........................................................50Altri Componenti ................................................................. 9Ormoni Steroidei ........................................................ 0.0009Proteine Da Siero Bovino ........................................... 12% v/vRosso Fenolo .................................................................... 10

PRECAUZIONI E AVVERTIMENTIQuesto dispositivo previsto per luso da parte di personale addestrato nelle procedure che comprendono le applicazioni indicate per le quali il dispositivo previsto.

Non usare flaconi in cui la confezione sterile sia stata compromessa.

Non usare il CHANG Medium D con gentamicina dopo la data di scadenza indicata sulletichetta.

PREPARAZIONE PER LUSO1. Scongelare velocemente il CHANG Medium D con

gentamicina agitando la bottiglia in un bagno di acqua a 37C.

2. CHANG Medium D con Gentamicina contiene lantibiotico Gentamicina (50g/mL). Supplementare antibiotici possono essere aggiunti se e desiderato.

ALIQUOTARE IL CHANG MEDIUM D1. Scongelare CHANG Medium D con gentamicina

secondo le istruzioni.2. Suddividere, in ambiente sterile, il terreno in aliquote

ericongelare.3. Scongelare le aliquote in un bagno di acqua a 37C

quando si devono usare.

ISTRUZIONI PER LUSO DEL PRODOTTOUso del CHANG Medium D con gentamicina per colture primarie: Metodologie In Situ.

1. Centrifugare il fluido amniotico a velocita bassa per concentrare le cellule.

2. Risospendere il pellet cellulare in una piccola quantit di liquido amniotico della paziente. Ad esempio, aspirare il surnatante di 10 mL di liquido amniotico centrifugato fino a 0.5 mL al di sopra del pellet e e risospendere. Aggiungere alla sospensione concentrata di cellule una quantit di CHANG Medium D con gentamicina atta a ottenere un volume finale di 0.5 mL per coverslip (per un totale di 4 coverslip) o di 2 mL per fiasca.

ESPAOL

APLICACINCHANG Medium D con Gentamicina se puede utilizar en las siguientes aplicaciones:1. Cultivo primario de clulas de lquido amnitico.2. Cultivo de clulas del lquido amnitico derivadas del

cultivo primario.3. Cultivo de clulas de mdula sea.4. Tejido amnitico slido obtenido de vellosidades

corinicas.

Este medio ha sido diseado para ser utilizado en incubadores de CO2 (cultivos equilibrados en una atmosfera con 5% - 8% CO2).

El pH final debe ser de 6.8 a 7.2.

DESCRIPCIN DEL PRODUCTOCHANG Medium D con Gentamicina es un medio desarrollado para el cultivo primario de clulas humanas de lquido amnitico, para anlisis de cariotipo y otras pruebas genticas de diagnstico prenatal. Esta Formula Se Ha Optimizada Para Metodologias En Frasco E In Situ.

CONSERVACIN Y ESTABILIDADConservar CHANG Medium D con Gentamicina congelado entre -10C. Una vez descongelado, se puede recongelar o se puede conservar refrigerado entre 2C y 8C.

Proteger este producto de la luz fluorescente.

CHANG Medium D con Gentamicina es estable hasta la fecha de caducidad indicada en el envase. Una vez descongelado, se puede conservar refrigerado entre 2C y 8C un mximo de 14 das sin que ello altere su funcionalidad. Es posible hacer alcuotas y recongelar CHANG Medium D con Gentamicina un mximo de 2 veces.

COMPONENTES mg/LSales .................................................................. 8515Dextrosa ............................................................... 880Aminocidos ......................................................... 804L-Glutamina .......................................................... 257Polipptidos .......................................................... 189Vitaminas ............................................................... 61Desoxirribonuclesidos ........................................... 35Ribonuclesidos ..................................................... 35Piruvato de Sodio ................................................... 97Gentamicina ............................................................50Otros Componentes ................................................. 9Hormonas Esteroides ...................................... 0.0009Protenas de Suero Bovino ............................ 12% v/vRojo Fenol .............................................................. 10

PRECAUCIONES Y ADVERTENCIASEste disposit ivo debe ser uti l izado por personal capacitado en procedimientos que incluyan la aplicacin prevista para el mismo.

No usar frascos en los que el envase estril est daado.

No usar CHANG Medium D con Gentamicina despus de la fecha de caducidad indicada en la etiqueta.

PREPARACIN DEL PRODUCTO 1. Descongelar CHANG Medium D con Gentamicina

rpidamente poniendo la botella al bao Mara a 37C y movindola en crculos.

2. CHANG Medium D con Gentamicina contiene el antibitico Gentamicina (50 g/mL). Si se desea, se puede aadir antibiticos adicionales.

PARA ALICUOTAR CHANG MEDIUM D1. Descongelar CHANG Medium D con Gentamicina de

acuerdo a las instrucciones.2. En condiciones de esterilidad, distribuir en alcuotas de

tamao conveniente, y recongelar.3. Descongelar las alcuotas al bao Mara a 37C en el

momento de utilizarla.

INSTRUCCIONES DE USOUtilizacin de CHANG Medium D con Gentamicina en cultivos primarios: Metodologa In Situ

1. Centrifugar el lquido amnitico a baja velocidad para concentrar las clulas.

2. Resuspender el precipitado de clulas en un volumen pequeo del propio lquido amnitico de la paciente. Por ejemplo, aspirar el sobrenadante de 10 mL dejando 0.5 mL de lquido, y resuspender. Aadir suficiente CHANG Medium D con Gentamicina a la suspensin concentrada de clulas para alcanzar un volumen de cultivo final de 0.5 mL por cubre-objetos (un total de 4 cubre-objetos por muestra), o 2 mL por frasco.

FRANAIS

UTILISATION CONSEILLE Le milieu CHANG Medum D avec Gentamicine peut tre utilis pour les applications suivantes :1. La culture primaire des cellules du liquide amniotique.2. Le repiquage des cellules du liquide amniotique.3. La culture des cellules de la moelle osseuse.4. La culture des tissus des prlvements de villosits

choriales.

Ce milieu est destin une utilisation en incubateur (Cultures equilibrees en atmosphere CO2 (5%-8%)).

Le pH final doit tre entre 6.8-7.2.

DESCRIPTION DU PRODUITLe milieu de CHANG Medium D avec Gentamicine est dvelopp pour la culture primaire de cellules amniotiques humaines utilises pour les caryotypes et autres tests de diagnostic antenatal.

CONSERVATION ET STABILITConserver le milieu de CHANG Medium D avec Gentamicine congel entre -10C. Le milieu de CHANG Medium D avec Gentamicine non utilis peut tre recongel ou conserv entre 2C et 8C.

Protger de la lumire fluorescente.

La date dexpiration figure sur ltiquette. Le milieu de CHANG Medium D avec Gentamicine peut tre recongel 2 fois au maximum et conserv entre 2C et 8C pendant 14 jours sans altration de ses capacits. Il nest pas recommand de le conserver au del.

COMPOSANTS mg/LSels .................................................................... 8515Dextrose ................................................................880Acides amins ..............................................................804L-Glutamine ..................................................................257Polypeptides .................................................................189Vitamines ........................................................................61Dsoxyribonuclotides ...................................................35Ribonuclotides ..............................................................35Pyruvate de sodium ........................................................97Sulfate de Gentamicine ..................................................50Autres composants ...........................................................9Hormones strodes ................................................0.0009Protines de Srum Bovin 12% v/vRouge de Phnol ...........................................................10

PRCAUTION ET MISE EN GARDECe dispositif est destin une utilisation par un personnel form aux procdures comprenant lapplication indique pour laquelle le dispositif est destin.

Ne pas utiliser de flacon dont la strilit de lemballage a t compromise.

Ne pas utiliser le milieu de CHANG Medium D avec Gentamicine au del de la date dexpiration figurant sur ltiquette.

PRPARATION1. Dcongeler le milieu de CHANG Medium D avec

Gentamicine rapidement en agitant le flacon dans un bain marie 37C.

2. Le milieu de CHANG Medium D avec Gentamicine contient lantibiotique Sulfate de Gentamicine (50 g/mL). Ajouter les antibiotiques additionnel.

PRPARATION DALIQUOTS DE MILIEU DE CHANG D1. Dcongeler le milieu de CHANG Medium D avec

Gentamicine en suivant les instructions.2. Distribuer strilement en volumes utiles et recongeler.3. Dcongeler les aliquots au bain marie 37C avant

lemploi.

INSTRUCTIONS DUTILISATIONUtilisation Du Milieu CHANG Medium D Avec Gentamicine Pour Cultures Primaires : Methode In Situ

1. Centrifuger le liquide amniotique 1000 tours/min pendant 5 minutes pour concentrer les cellules.

2. Resuspendre le culot dans un petit volume du liquide amniotique de la patiente. Par exemple, aspirer le surnageant obtenu en centrifugeant 10 ml de liquide amniotique et resuspendre le culot dans 0,5 ml de ce liquide. Ajouter suffisamment de milieu de CHANG Medium D avec Gentamicine au culot de cellules concentres resuspendues pour obtenir un volume final ncessaire pour 4 lamelles (0,5 ml par lamelle) ou 2 ml par flaskette.

3. Incubate cultures undisturbed at 37 C 5%-8% CO2 atmosphere.

4. Flood cultures on day 2 by adding 2 mL of CHANG Medium D with Gentamicin.

5. After 4 to 5 days, the cultures should be checked for growth. Cultures should be fed once growth has been observed. Feed cultures by removing all of the culture supernatant and replacing with 2 mL fresh CHANG Medium D with Gentamicin. It is recommended that cultures be fed every 2 days thereafter.

6. Check cultures for growth on/or after day 5, and harvest when sufficient colonies are observed.

7. Best results are obtained when the cultures are fed with CHANG Medium D with Gentamicin the day before the harvest.

Use of CHANG Medium D with Gentamicin for Primary Cultures: Flask Methodologies

1. Centrifuge amniotic fluid at low speed to concentrate the cells.

2. Resuspend the cell pellet in a small volume of the patients own amniotic fluid. For example, aspirate the supernate of 10 mL of spun amniotic fluid to 1 mL above the cell pellet and resuspend. Add 4 mL of CHANG Medium D with Gentamicin for a total volume of 5 mL per flask.

3. Incubate cultures undisturbed at 37 C 5%-8% CO2 atmosphere.

4. Check for growth on day 5. Change medium with fresh CHANG Medium D with Gentamicin and harvest if sufficient cell growth is observed.

5. Check cultures for growth and completely CHANGe medium every day thereafter until sufficient colonies are observed and are ready to harvest.

6. Best results are obtained when the cultures are fed with CHANG Medium D with Gentamicin the day before the harvest.

Use of CHANG Medium D with Gentamicin for Growing Passaged Amniotic Fluid Cells:

To passage the cells, treat the cultures with trypsin (or pronase, etc.) as you would normally do when cells are grown in conventional medium. However, protease treatment should be carefully monitored. Amniotic fluid cells grown in CHANG Medium D with Gentamicin tend to be more sensitive to protease treatment than amniotic fluid cells grown in conventional medium. It may be necessary to modify your protocol to take this into account.

The pH of the medium used to feed the cultures must be between 6.87.2 (i.e. the medium must be slightly yellowish salmon color). pH can easily be adjusted by placing the medium in a 5%-8% CO2 incubator with the cap slightly loosened for about 30 minutes.

Note: Calcium Oxalate crystals commonly form in CHANG Medium D. The presence of these crystals has not been shown to cause any detrimental effect on product performance.

CHANG Medium D with Gentamicin contains the antibiotic Gentamicin. Appropriate precautions should be taken to ensure that the patient is not sensitized to this antibiotic.

QUALITY ASSURANCESTERILITY Serum used in the production of CHANG Medium D with Gentamicin has been tested for viral contamination per CFR Title 9 Part 113.53. It has also been screened for mycoplasma. CHANG Medium D with Gentamicin is sterilized by filtration through a 0.1 micron filter. Samples of CHANG Medium D with Gentamicin are tested for possible bacteriological contamination following the sterility testing protocol described in the current USP Sterility test .

CHANG Medium is a registered trademark of Irvine Scientific.

zugeben: 0.5 ml pro Deckglas (maximal 4 Deckglser) oder 2 ml pro Kulturflasche

3. Kulturen ungestrt bei 37 C in 5%-8% CO2 atmosphre inkubieren.

4. Am 2. Tag die Kulturen mit 2 ml CHANG Medium D mit Gentamicin In fluten.

5. Nach 4 bis 5 Tagen sollte das Wachstum der Kulturen berprft werden. Die Kulturen sollten gefttert werden, sobald sie wachsen. Dazu wird der Zellkulturberstand entfernt und durch 2 ml neues CHANG Medium D mit Gentamicin ersetzt. Danach sollten die Kulturen alle 2 Tage neu gefttert werden.

6. Kulturwachstum am oder nach dem 5.Tag berprfen, und wenn ausreichend Kulturen vorhanden sind, ernten.

7. Die besten Ergebnisse werden erzielt, wenn am Tag vor der Ernte nochmals mit CHANG Medium D mit Gentamicin gefttert wird.

Anwendung von CHANG Medium D with Gentamicin fr Primre Kulturen: Flaschenmethode

1. Amnionf lssigkei t bei niedr igen Drehzahlen zentrifugieren, um die Zellen zu konzentrieren.

2. Das Zellpellet in einer kleinen Menge patienteneigener Amnionflssigkeit resuspendieren. zB: den berstand von 10 ml der zentrifugierten Amnionflssigkeit bis auf 1 ml ber dem Zellpellet aspirieren und resuspendieren. 4 mL of CHANG Medium D mit Gentamicin zugeben zu einem Gesamtvolumen 5 mL pro Kulturflasche.

3. Kulturen ungestrt bei 37 C in 5%-8% CO2 Atmosphre inkubieren.

4. Kulturwachstum am 5.Tag berprfen. Medium mit frischem CHANG Medium D mit Gentamicin austauschen und bei ausreichendem Zellwachstum ernten.

5. Kulturwachstum 5.Tag berprfen und jeden Tag das Medium vollstndig tauschen bis ausreichend Kolonien vorhanden sind. Danach ernten.

6. Die besten Ergebnisse werden erzielt, wenn am Tag vor der Ernte nochmals mit CHANG Medium D mit Gentamicin gefttert wird.

Anwendung von CHANG Medium D mit Gentamicin zur Kultur passagierter amnionzellen

Zum Passagieren der zellen werden die kulturen mit Trypsin (oder Pronase, etc.) behandelt. Genau so, als wren die zellen in einem konventionellen Medium gewachsen. Allerdings sollte die Protease Behandlung sorgfltig beobachtet werden, da amnionzellen, die in CHANG Medium D mit Gentamicin kultiviert wurden, sensitiver reagieren als Zellen nach Behandlung in konventionellen Medien. Unter Umstnden muss das protokoll entsprechend modifiziert werden.

Der pH des medium mit dem die Kulturen gefttert werden, muss im Bereich 6.87.2 liegen. (d.h. das Medium sollte eine leichte gelb-rosa Frbung haben). Der pH kann einfach eingestellt werden, indem das Medium mit leicht geffnetem Verschluss fr ca. 30 Minuten in einen 5%-8% CO2 Inkubator gestellt wird.

Achtung: in CHANG Medium D mit Gentamicin bilden sich gewhnlich Kalzium Oxalat Kristalle. Das Vorhandensein dieser Kristalle hat bislang keinen mindernden Einfluss auf das Zellwachstum gezeigt.

CHANG Medium D mit Gentamicin enthaelt das antibiotische Gentamicin.