cd40 ligation alters the cell cycle of differentiating keratinocytes

6
CD40 Ligation Alters the Cell Cycle of Differentiating Keratinocytes Je Âro Ãme Grousson, Martine Ffrench,* Miguel Concha,² Daniel Schmitt, and Josette Pe Âguet-Navarro INSERM U346, Ho Ãpital E. Herriot, Lyon, France; *Faculte  de Me Âdecine, Laboratoire de Cytologie Analytique, Lyon, France; ²Instituto de Histologia y patologia, Facultad de Medicine, Universidad Austral de Chile, Valdivia, Chile CD40 is expressed in normal human keratinocytes, especially in the basal cell layer. We have recently reported that CD40 ligation strongly inhibits kerati- nocyte proliferation and induces their differentiation. In this study, the CD40 pathway that prevents kerati- nocyte growth was investigated. We ®rst reported that interferon-g treatment potentiated the CD40- mediated inhibition of keratinocyte proliferation. CD40±CD40 ligand interactions, in the presence or absence of interferon-g, neither enhanced sponta- neous keratinocyte apoptosis, nor did it enhance apoptosis induced by various agents. More impor- tantly, we showed that CD40 signaling altered the keratinocyte cell cycle, as demonstrated by a decreasing number of cells in the G 1 and S phases and an accumulation in G 2 /M phase of the cell cycle. Furthermore, western blot analysis of cell cycle regulatory proteins, showed a decrease in cyclin A and E expression in CD40-activated kerati- nocytes. Collectively, these results indicate that CD40 ligation inhibits keratinocyte renewal by a mechanism independent of cell apoptosis and that modulation of the keratinocyte cell cycle is an addi- tional outcome of CD40 signaling. Key words: G 1 phase/G 2 /M phase/S phase. J Invest Dermatol 114:581± 586, 2000 C D40 is a member of the tumor necrosis factor (TNF)/nerve growth factor receptor superfamily that was ®rst described on B lymphocytes (Noelle et al, 1992; Van Kooten and Banchereau, 1996). Interactions of CD40 with its ligand on activated T cells are known to promote the development of cellular as well as humoral immune responses. CD40 ligation induces immunoglo- bulin secretion and isotype switching (Banchereau and Rousset, 1991; Spriggs et al, 1992). In humans, the X-linked hyper-IgM immunode®ciency syndrome is related to genetic alterations of the CD40 ligand gene locus and is characterized by the absence of germinal centres and the lack of IgG, IgA and IgE-bearing B cells (Hill and Chapel, 1993). CD40 is expressed on antigen-presenting cells and CD40±CD40 ligand interactions enable the full develop- ment of their costimulatory function (Van Essen et al, 1995), as well as the production of various cytokines including interleukin-12 that skews the T cell response towards the TH1 pathway (Grewal and Flavell, 1996). CD40 functional expression is not restricted to bone marrow- derived cells. It has been reported on thymic epithelial cells (Galy and Spits, 1982), ®broblasts (Fries et al, 1995; Yellin et al, 1995), endothelial cells (Hollenbaugh et al, 1995), and keratinocytes (Denfeld et al, 1996; Pe Âguet-Navarro et al, 1997). Within cutaneous tissue, CD40 may be a signaling receptor in T cell-mediated in¯ammatory reactions. CD40±CD40 ligand interactions in endothelial cells result in an increased expression of adhesion molecules such as ICAM-1, VCAM-1, and E-selectin that can serve to recruit circulating leukocytes to the site of antigenic challenge (Hollenbaugh et al, 1995). Moreover, CD40 ligation of epidermal cells induces the secretion of pro-in¯ammatory cytokines such as TNF-a and interleukin-8 (Caux et al, 1994; Denfeld et al, 1996; Pe Âguet-Navarro et al, 1997). An additional outcome of CD40 signaling is the regulation of cell growth or survival. Although it was initially identi®ed for its activation properties on B cell proliferation, CD40 transduces negative signals to many cell types including lymphoma B cells (Heath et al, 1993; Funakoshi et al, 1994) or transformed cells of mesenchymal or epithelial origin (Hess and Engelmann, 1996; Eliopoulos et al, 1996). In a recent study, we showed that CD40 is expressed in situ in normal human epidermis, especially on the basal cell layer (Pe Âguet-Navarro et al, 1997). As already reported (Denfeld et al, 1996; Gaspari et al, 1996), we found that CD40 expression was maintained in cultured keratinocytes and was upregulated by interferon (IFN)-g. More interestingly, we have provided evidence that CD40 ligation of cultured keratinocytes results in an inhibition of the cell growth and induces keratinocyte differentiation, as assessed by an increased pro®laggrin content (Pe Âguet-Navarro et al, 1997). The intracellular control of cell proliferation is mainly regulated by a group of serine-threonine kinases which, when active, are associated with cyclins and are called cyclin-dependent kinases (CDK). CDK4 (or CDK6), associated with cyclin D, is involved in G 1 progression and CDK1, activated by cyclin B, drives cells to mitosis. CDK2 is the main CDK of S-phase when associated ®rst with cyclin E and later with cyclin A (Sherr, 1995). Cyclin-CDK complex activity is negatively regulated by CDK inhibitors, such as p21 waf1 which combines with CDK2 (Xiong et al, 1993). This study was aimed at analyzing the mechanisms involved in the CD40-mediated inhibition of keratinocyte proliferation. To this end, keratinocytes were grown on CD40 ligand-transfected Manuscript received December 23, 1998; revised November 25, 1999; accepted for publication December 1, 1999. Reprint requests to: Dr. Josette Pe Âguet-Navarro, INSERM U346, Ho Ãpital E. Herriot, Pavillon R, 69437 Lyon 03, France. Email: peguet @lyon151.inserm.fr Abbreviations: CDK, cyclin-dependent kinase; CD32c, CD32-trans- fected L cells; CD40Lc, CD40 ligand-transfected L cells. 0022-202X/00/$15.00 ´ Copyright # 2000 by The Society for Investigative Dermatology, Inc. 581

Upload: josette

Post on 06-Jul-2016

213 views

Category:

Documents


0 download

TRANSCRIPT

���� ������ � ��� �� �� ��� � � �����������������������

�������� ������ ������ ��������� ���� �������� ������ �������� ��� ������ ����������������� ! "#$%� &��'���� ( &������� )*��� ������+ �������� �� ��������� )�,�������� �� �*������� -���*��.�� )*��� ������+ �������� �� &��������* '��������� ������� �� �������� "��������� -���� �� ������ /�������� �����

���� �� ��������� �� ���� ����� ������������������ � �� �� ���� �� ����� �� �� � ����� ������� �� ���� ����� ���� � ������� �����!���� �� ������� ��� ������� ���� �������������"� ��� ����� �� ���� ���#�� �� ��� ��� �����!���� ��#� #�� �� �������� �� $�� �������� ��������!� ������ ������� �� ����!������� �������� � ��������� �� ������������%���� ����� ���������� �� �� �������� �������� � ��������!�� ������ �������� ����!���� ��������� ������� �� ��� � ������������� ������� �� ����� ������ &�� ����!�� �� #� ��#�� �� ���� ����� ��� � ���� ��

��������� �� ��� �� �� ��������� �� ����������� ������ � �� � �� �� '( ��� ) ��������� �� ������ ��� �� '*+& ����� � �� �� ��� �� ,��������� #����� � ��� ���� � �� ��� � ���� ��� ������� ��#�� � �������� ����� �� � ��� - ��������� �� ����!��� ��� �����!������ � ��� � �� ���� ���� � ������� ������ ����� ������� ��������� ����#� �� ���������� ���������� � �� ������ ��� ����� ��� � �� ��������� �� ��� � �� �� ����!��� ���� � ���� ����� ���� ��� ����� �

� ������� � ����� � ���� � ������ �������� ��������� ! �"""

��$0 � � ���,�� �� ��� ���� ������ ������12��34����� ���5�� ������ ����'��� '�������*���� 5� 6�� �����,�� �� 7 �*�'���*�� 1�������� ��� 899:+ /�� ;����� ��� 7��������� 899%3(����������� �� ��$0 5��� �� ������ �� ��������� 2

���� ��� <��5� �� '������ ��� ������'���� �� ������� � 5��� ������� ����� ��'���( ��$0 �������� ����� ���������,��� �������� ��� ���*'� 5������� 17�������� ��� !����8998+ �'���� �� ��� 899:3( �� ����� ��� =����<�� �*'����� �������6�����* *������ � ������� �� ������� ���������� �� �����$0 ������ ���� ��� ��� � ����������>�� ,* ��� �,���� ���������� ������ ��� ��� ���< �� ���� ��- ��� �� �,������ 7 ����1&��� ��� ���'��� 899#3( ��$0 � �?'���� �� ��������'������������ ��� ��$0@��$0 ������ ����������� ���,�� ��� ��� ������'����� �� ����� ����������* ������� 1/�� �� �� ��� 899A3� � 5���� ��� '�������� �� ����� �*��<��� �������� �������<���8: ����<�5 ��� 2 ���� ��'��� ��5��� ��� 2&8 '���5�* 1���5�� ����������� 899%3(��$0 ��������� �?'����� � ��� ��������� �� ,��� �����5�

������� ����( �� �� ,��� ��'����� �� ��*��� �'�������� ���� 1���*��� �'��� 89B:3� 6,��,��� 1���� �� ��� 899A+ C����� �� ��� 899A3������������ ���� 1&�����,��� �� ��� 899A3� ��� <��������*��1������� �� ��� 899%+ �������������� �� ��� 899D3( E����� ���������� ��$0 ��* ,� � �������� ����'��� �� 2 ���������������F�������* ��������( ��$0@��$0 ������ ����������� ������������� ���� ���� �� �� �������� �?'����� �� �������

������� �� � ��- �8� /�- �8� ��� �������� ���� ������� �� ������ ���������� ��<��*�� �� ��� ��� �� ������������������ 1&�����,��� �� ��� 899A3( �������� ��$0 �������� ���'������� ���� ����� ��� �������� �� '�����F�������* �*��<����� � 2���� ��� �������<���B 1��? �� ��� 899$+ ������� �� ���899%+ �������������� �� ��� 899D3(-� ���������� ������ �� ��$0 �������� � ��� ��������� ��

���� ���5�� �� ������( -������ �� 5� ��������* ������6�� ��� ������������ '��'����� �� 7 ���� '������������� ��$0 ��������������� ����� �� ���* ���� �*'� �������� �*�'���� 7 ����1&���� �� ��� 899#+ ���<��� �� ��� 899$3 �� ���������� ���� ��������*��� �� �'�������� ������ 1&� ��� ��������� 899%+ ���'��� �� ��� 899%3( �� � ������ ��*� 5� ��5�� ���� ��$0 ��?'���� �� ���� �� ������ ���� �'������� �'������* �� ��� ,������� ��*�� 1�������������� �� ��� 899D3( - ������* ��'�����1������� �� ��� 899%+ ��'��� �� ��� 899%3� 5� ���� ���� ��$0�?'����� 5� ���������� �� ������ <��������*�� ��� 5�'�������� ,* ���������� 1���3��( ��� �����������*� 5� ����'������� �������� ���� ��$0 �������� �� ������ <��������*������ �� �� ����,����� �� ��� ���� ���5�� ��� ����� <��������*������������������ � ���� ,* �� �������� '��6������� �������1�������������� �� ��� 899D3( 2�� ������������ ������� �� ����'������������ � �����* �������� ,* � ���' �� ���������������<���� 5����� 5��� ������� ��� �������� 5��� �*���� ��� ��������� �*�������'������ <���� 1��;3( ��;$ 1�� ��;%3��������� 5��� �*���� �� � �������� �� �8 '�������� �����;8� ��������� ,* �*���� 7� ����� ���� �� �����( ��;: � ������� ��; �� ��'��� 5��� �������� 6�� 5��� �*���� ��� �����5��� �*���� - 1������ 899A3( �*�������; ���'��? �������* ����������* �������� ,* ��; ����,����� �� � ':8�� 5�������,��� 5��� ��;: 1=���� �� ��� 899#3(2�� ��* 5� ����� �� ����*>��� ��� �������� �������� ��

��� ��$0��������� ����,����� �� <��������*�� '������������( 2���� ���� <��������*�� 5��� ���5� �� ��$0 �����������������

�����'� �������� �����,�� :#� 899B+ ������ �����,�� :A� 8999+����'��� ��� ',�������� �����,�� 8� 8999(!�'���� ��.�� ��G ��( ������ ��������������� ��� ! "#$%�

&��'���� ( &������� �������� !� %9$#D )*�� 0#� ������( ����G '����H�*��8A8(�����(��-,,���������G ��;� �*�������'������ <����+ ��#:�� ��#:������

������ ) ����+ ��$0)�� ��$0 ����������������� ) ����(

00::�:0:=4004I8A(00 J ��'*����� � :000 ,* 2�� ������* ��� ������������ ����������*� ���(

./(

���� 1��$0)�3 �� �� ��#:����������� ���� 1��#:�3 � �������(E� ��5�� ���� ��$0 �������� �� <��������*��� �� ��� '������ ���,���� �� ������ ��� ��� ���� �� �� �'�'����� ����� �� ��� ����( ��� ��'�������*� 5� ����������� ���� ��$0 �������� ���������� <��������*�� ���� �*���� � ��5� ,* � ��������� '��'������ ������ ��������� ��� �8 ��� � '��� ��� �� ���������� �� ������ ��� �:4 '���( 2��� ���������� 5��� �������� 5��� �������� �� �*���� - ��� �?'�����(

-2 !�-)� -�� 2&K��

��������� �������� #�� ���� �����!��������� ��� � 1��3 &��� �'������� ���� '����� 5��� �,������ ���������� ����� ��������� ,���� �� �,������� '����� ����*(;��������*�� ����� 5��� ���,����� �� �������* ���������� #2#6,��,���� �� ��,����L ������� ����L ����� 1� 3''�������� 5��� 80M ����� ,����� ���� � �����,�� '������*1�������������� �� ��� 899D3( 2��� ����� ��������� ����5��<��������*�� ���������������( ���� 5��� �� ����� �5� �� ����� '������ ����*>� ��� ������ �� ��$0@��$0 ������ �����������()� ���������� 5��� ��� ������ ��� ���� ��$0 1��$0)�3 5��� �� ���

��$0 ���������� �� ������ <��������*�� ��� ��#:����������� )�1��#:�3 �� ������������� )� ����� � �������( 2��� ���� ���� 1����,����� ��� 899%3 5��� <����* '������� ,* �������� ����� )�,�������� ��������������� !������ 1�������*� ������3( )� 5��� ���5� �� !� ��8%$0 ����� 1)��� 2����������� ����� ������ �C3 ''�������� 5���80M ����� ,����� ��� ��� ���������� �� D0�* ,����� �(��� ���� �� ��������� ��� ������ �� ����� �� ��$0���������

����,����� �� <��������*�� '������������� ���� 5��� ���5� ��� A � �� F���,������� ���������� '���� ��� A0" ����� '���� 1-������� �� "����������3 5� ����� �� ��� ,�������� �� �����( ;��������*�� '������������5� ���� ,* ��� �������� �� 8��� �� N#&O ����*���*������ 1:�� '������3 ��� ��� 6��� 8B � �� �����( !��� 5��� �?'���� � ��� �����'� �� ���'������ �����(

������ ������ ������ ;��������*�� 1:� 80$ ����3 5��� ���5���� 8@$ � �� ������5��� )�,�2�< ����,�� 1���� ��'�������� �)3 ��� 5��� �� �.�� ��,�� �� ��$0)�� �� ��#:� � �������( ����* ��A00" ����� '���� 5��� ������ �� ���� �� ��� ���� �� ����� ��* �������( �� ��� ��*� <��������*�� �'�'��� 5� ������ ,* ������ :0 ��A0�� �*�����?����� 1�&=3 '���� 1������ �� )��� K3 �� ,���F���,��� ���� ����� ��� ��� 8: �� :$ � �� �����( -�����������*� <��������*��5��� ���������� �� :000 � '�� �: 5��� � �����5 ���������� 7 ����1�'�����)��<�� =) 8000� �'��������� E��,�*� �C3 �������� �� #8: ����� �'�'����� <��������*�� 5��� ����*>�� 8:@:$ � �����(��� ���'������� ����*�� ���� 5��� 6?�� 5��� ��������4������ ����

1#G83( &����� ###$: 1:0�� ,�,��>����� '����+ �����3 5� ����� �� �������� ����,�� ��� ���� 5��� ����*>�� ,* F�������� �������'*(-,�� 800 ���� 5��� �������� �� 8: �������* ������� 6��� ��� ���'��������� �� �������� �� ���������� <��������*�� ����� 5� �����������(��� �������� �������'* ����*�� ��� ���� 5��� 6?�� �� :M

����������*�� ,���� �� 0(8 ���� �����*����� ���� '��6?�� �� 8M���� �����?��� ��� ��,����� �� '��( ���*����>�� ���� ���� 5����������� ���� ���� ����,�� ��� �� '��'���������* �� ��� '���� '����("�������� ������ 5��� ��������� �� 800 ��� ���� '������* ������5��� ������� ��� ���,�� 6��� � �����,�� ���5���� 17�<<�� ���&��<���� 89DB3� ���� ������ 5��� ���*� ������� ��� !������L ����(������� 5��� �?������ 5��� �� &������ &�D00 �������� �������'� ��DA </(

�� ��� � ��� ���� ��� .!���!*�!����������� 01��2��3 �������;��������*�� 18� 80% ����3 5��� ���5� ��� $ � �� ��$0)�� �� �� ��#:��� #2# 6,��,��� � ������� 1%� 80A ����3 �� DA ��: F�< ��� � (���� 5��� ���� ���,���� 5��� #0� 7��"�� 1�����3� ��� 8 � �� #D��(-���� 5����� �� &��<L ,������� ��� ������� ��� ���� 5��� 6?�� �� D0M�������( ��- ����������� 5� '�������� ��������� �� ��� ���� �� ��189BA3 ������.�3( ��� 7��"�� ��� ��- �������� ���� 5��� 5���� ��&��<L ,������� ��� ������40(AM 25��� :0 ��� ��� '����� 5���'����� ��� 8 � �� �����7��"�� ���������� ����,��* 17:0�� ��<�������'� ������<3 ������ 8GA0( -���� 5������ ���� 5��� ������ 5���F������� �������*��������,����� �1�,�3: �������� �� ���� ���������������,��� 1P*��� )�,� ��� ��������� �-3 ������ 8G#0( ����5��� ���� ������� 5��� 8�� !�-� '���� 1!�-� �*'� � -�� �����3(��- 5� ������ 5��� 80 �� '��'���� ������ '���� ��� ����*>�� �� ��-����� 17����� ���<����� ������ /��5� �-3 5��� )C�C� �����5��� 17����� ���<����3( ��� ��� �������� �� <��������*�� �'�'����

��� ��* 5��� ������� �� �� ��� '������ �� ������ ����� 1A0" '����3����� $ � �� �&= 1:0�� '����� �����3 ����� ��� ��� ��* �� �����( ������� ��'��� 80$ ���� 5��� ����*>��( 2�� ���� ���������� �� :� ��-1������ ��'���� ������� ��-3 ������� �� ��� ���� �*��� '��6�� ����*�5��� ��������� �� ,� �������� �� �'�'����� 1���>*�<��5��> �� ��� 899:3(

��� ���� � �� ��� � ���� ��� ������ �� #����� � ���������� �4�: '��� ��������* '������ 5��� ����*>��G ��; 1��;8���;:3� �*���� 1-� 3� ��� ��; ����,���� 1':8��3( ;��������*�� 5������5� ��� $ � �� ��$0)� �� ��#:� ��� ���>��( ���� ��'�� 5��� �������5�� �� ��� ��� �*>�� � �����,�� '������* 17���������� �� ��� 899B3(������� 5��� �'������ �������'����������* �� � 8:M ���� �����*������@'��*���*������ ��� ��� ���������� �� ������������ ���,����1���������� ��� ������� ;����� �&3 �� � �����* *���( ��,����5��� ,���<�� 5��� � AM ������ �� ������ ���< �� '��'�����,����������� ���������� 0(AM 25��� :0 ��� '��,�� ��� 8 � 5��� ��� �����5�������,����G ��� ���������� �����'#$���: 18GA003� ������*���� 18G:A03��� ��,,�� '��*������ �������<: 18GA003 1����� ��>� ����� ��>� �-3+��� ���������� ������*���� - 18G80003 1���� ������ ��� ������ �-3�� �����':8�� 18G:A03 1K������� !������� ���,������ -3( ��,���� 5��� ���� ���,���� 5��� ,�����*����� ��,,�� ����������������,��� 1��<�3� ,�����*����� ���� �������,,�� ��������,���1������� 7��������� �-3� �� ,�����*����� ��� �������� �� 1���,���������� ������ �-3( 2�� 6��� ��' 5� ���,����� 5��� ���'�������@,�����*����� ��������� '���?���� ���'��? 1-������3 ���������'���� 5��� �� �������� ��������������� ��������� *���(������ � ������� 5� '�������� �� ����< ���� �� �.�� ����� �� '������5� '����� �� ��� ����(

)������ ��� ���� ��� ���� �*��� �?'�������� ��������� ����*� 5�'�������� ��� ��� ���'��������� E����?��L ��� ��� '����� ����( K��*'Q 0(08 5��� ��������� �� ,� ����6����(

! �")2�

",3!� ������ ������� �� ����!������� ��������� ��������� �� ������� �� � ������ ��*� 5� ��5������ ��$0 �������� ����,�� <��������*�� '������������ 1�������������� �� ��� 899D3( - ����� ������� ��$0 �?'����� ��<��������*�� 1������� �� ��� 899%+ ��'��� �� ��� 899%+ �������������� �� ��� 899D3 ��� � �� ����,�� <��������*�� '������������1���<����� �� ��� 89B$3� 5� ����� ��� ������ �� ��� �*��<��� ����$0��������� ����,����� �� '������������( 2�� �'������� ,������� 5��� ���5� �� � � 5��� �� 5����� A0" ����� '������� ������������� )�� ��#:� �� ��$0)� � ������( ��#:� �� )�''����� ��� ���5�� �� �'������� ,��� ���� �.���* 5��� 1���� �����5�3(- ��5� �� ,�� (� ��� '������ �� ����,����� �� <��������*��

'������������ 5� ������� 5������ ��� ���� ��� ,��� ������ ����#:� �� ��� '������ �� ������ �� �� ��$0)� �� ��� �,���� ����� �*��<���( - �?'������ �������� �� ����� ����6�����*'���������� ��� ��$0��������� ����,����� �� <��������*�� '�������������( �� �������� �� ��� N#&O���*������ �����'�������� ��$0�������� '�������� ��� ������� �� ���� ��,��( ������� ����� � $ ������������ �� ��� �,���� �� ������ ��� ��,�� �� ���������<��������*�� 5� �������� ,* $A($� 8#(BM 1���� �� ���������'������ �?'������� ��� �'������� ,��� ���� ���� ����������3(

���� ����� ��� � ������ ��������� ������ �������� �,����* �� ��$0 �������� �� ����,�� <��������*�� '�������������5� ��?� ����*>�� 5������ �� ���� �� �� �'�'����� ����� �� �������( ;��������*�� 5��� ���5� �� � ''�������� 5��������� �� ���� ��� ������ ��$0)� �� ��#:� � ������( 2����,�� �� <��������*�� ��������� �'�'����� ���� ����� 5����� �� ����� ��* �� ����� ��� ��� ���� 5��� ������( ���� ��� ���� '������� ,���5 5��� ���� � $ � ������������ �� � ����5��� ��� ������ �� ��$0 �������� �� <��������*�� '������������ 5���?����("��� ��� &����� ������.�� 5� 6�� ����*>�� ��� ������ ��

��$0 �������� �� '������� <��������*�� �'�'���( E������5� �� ��#:�� ���* ��5 <��������*�� 1�,�� 8M �� ����,���� �� ����� ��� �,�� AM �� ��� '������ �� �����3 ��'��*����� �*'���� ���'������� ������ �� �'�'���� �(�(� ������

./* �!K"��K� � �� 2& �K"!�-) K� ��/ �2��-2�/ � ! -2K)K�C

�������������� ������������ ��� ���� ����<��� 1,�� *3( ��$0�������� �� <��������*�� ��� ��� ����� ���� ����( ��������*� 5���<��������*�� �'�'��� 5� ������ ,* ������ �������� �� A0���&= '���� ����� ��� ��� ��* �� ������ �� ���������� 7������������ ��� ��,�� �� �'�'����� <��������*�� 5� ��� ���5������ ��� ���� ��� ,��� ���5� �� ��$0)� �� ��#:� 1,�� 43(-�� ���� 6����� ���� ���� ��$0 ���������� ������� ��������

'������� <��������*�� �'�'���� ��� ��� �� '��������� �'�'��������� ,* ����� �����(2�� 5� ���6���� ��� �������� �������'* ����*�( -

�?'������ ��$0 ���������� ��� ��� ����� �*'���� ��� �� �'�'����� <��������*��� �(�(� ����� ������ ������������ �������*��'��� ������>����� ��� ����6������� ���,���� ,��,,������� ���� ������� ��'� 1���� ��� ��5�3( ������� ���� 5����,����� ����� : �� # � �� �������(

���� ����� � ���� �� ��������� �� ��� � E� ��������*>�� 5������ ��$0 ����������� 5���� ����,�� ����'������������� ��� ����� ��� <��������*�� ���� �*���( - ��������� ,*��- ������� 1,�� �3� ��� ���� �*��� '��6�� �� <��������*���''����� �� ,� ������ 5������ <��������*�� ��� ,��� ���5� ����$0)�� �� ��#:� �� �� #2# 6,��,���( "'�� ��$0 �����������5����� ��� �������� ��,�� �� ���� �� ��� �0R�8 '��� 5�������( �� � 5���� ������ ���� ���� �*��� ����*� ���� ������ '���������� ��� �'�'����� ������ �� ��$0 �������� �� <��������*��(������� ��� ��,�� �� <��������*�� �� ��� ,��8 '��� 5� �������������* ��������� �� ��* ����� ��������� 1,�� �3( 2��� ������������ �������� ���� ����� �&=������� <��������*���'�'��� 1���� ��� ��5�3(2� ����������>� ���� ��������* ��� ������ �� ��$0 �������� ��

��� <��������*�� �*���� ��� 7��"�� �����'������� ������ 5� ����� ,�� .1#3 �������� � ��'���������� �?'�������( E��� ���5��� ��$0)�� � ���'���� 5��� ��#:�� ��� '��������� �� 7��"���'������ <��������*�� 5� �������� 1!$R!A ������3 � 5� ���'��������� �� <��������*�� �� ��� �8 '��� 1!8 ������3(����������*� ��$0 �������� ��� �� �� �������� '��������� ��<��������*�� �� ��� �:4 '��� 1!# ������3( �����������*� 5���5��� ���� ,��� ���������� ��� '������ �� .������ ����5���� ��� ��� �����'����� ��� 7��"�� �� ��� � '��� 1!: ������3(-������ ��� ��$0��������� ����6������ �� ��� ���� �*��� 5����������� ���* ���� ,� ��'������* ���� �� ����� �?'������� ���<��������*�� ���� ����� ����� 15�� � "3( - ���� ,* ������'��������� E����?��L ��� ��� '����� ����� ��� �������� ����� '��������� �� <��������*�� �� ��� �8 ��� � '��� 1������������S $(#M �� ,��� '���3� � 5��� � ��� ������� �� ��� �:4 '��� 1���� ������� S %(:M3� 5��� �����* ����6����1' Q 0(00%3(- ��5� �� ,�� .1$3� ����� '���������� ��� ������ �� ��$0

�������� �� ��� '��� �� ��� <��������*�� ���� �*���( ������� ����� '������ �� ������ ��� '��������� �� 7��"���'������<��������*�� 1!$R!A ������3 ���''�� ���� 8#(AM �� $(:M5��� <��������*�� 5��� ���5� �� ��$0)� � ���'���� 5�����#:�( ����������*� ��� '��������� �� <��������*�� �� ��� �:4 '��� 1!# ������3 �������� ���� 8D(%M �� :$(#M( �� ��������

,����� (� ",3!� ������� �� ����!������� �������� ���������� �� �������� ;��������*�� 1;3 5��� ���5� ��� A � ������������ '���� 5��� �� �.�� ��,�� �� ���������� ��$0)� �� ��#:�(����� 1A0" '����3 ������ 5�� �� 5� ���� ����� �� <��������*�� �� ���,�������� �� �����( ���� '������������ 5� ���� ,* N#&O����*���*������� �����'������� ����� ��� ��� 8B � �� �����( !��� ��� ��� �����'�� �� �� ���'������ ����( - ���� ,* ��������� ����*� ��� ���������L � ���G ' Q 0(008 ��� ;4��$0)� ��� ;4��#:� R ��� ������ ;4��#:�� ��� 'Q 0(008 ��� ;4��$0)�R ��� ������ ;4��#:�R ��� �� �����*� �?��'� ��* A� �� �����( !��� ��� ��'���������� �� ���������'������ �?'������� ��� <��������*�� ���� ����� �����(

,����� *� ���� ����� �� �� �������� �������� � ",3!� ��� � ����� ������������ ��� ���� ��� ;��������*�� 1;3 5������5� ��� $ � �� ��#:� �� �� ��$0)�� ���������� 1����� �����3 �� ��� 1��� �����3 5��� �����1:00" '����3 ����� ��� ��� : � �� �����( ������� ������� 5� ���� '�������� ��� :0�� ,��,��>����� '���� 1&����� ###$:3 ��� �,��������� F�������� �������'*( /��* ��5 <���������*�� �?��,���� �'�'����� �������������� �(�(��������� �� ���������� ����� 1����3( 2����,�� �� �'�'����� <��������*�� 5� ��� ����6������* ��������� ���� ��� ��� �?'��������� ����������(

/K)( 88$� �K( # -!�& :000 ��$0 )��-2�K� -�� ; !-2��K�C2 �!K)�� !-2�K� ./4

�� ��� '������ �� ������ ��$0 �������� ��� ��� ������ ���'��������� �� <��������*�� �� ��� �8 '���( 2�� ��,�� ��.������ ���� �� ��� � '��� 1!: ������3 5� �������� ,* ���������'�������* �� ��$0 ��������( 2��� ���� 5��� ��'������������ 6�� �'����� �?'������� ��� <��������*�� ���� ����������(

���� ����� ������� ��� �� � ��� ��� �� - ��������� ������� �� ������* ��� ����� �� ���� �*��� ����������� ���� �*�����������* '������ 5��� ����*>�� ,* 5����� ,�������( �������5��� �?������� ���� <��������*�� ���5� �� ������ ��$0)� ����#:�( ���'�� 5��� �'������ ,* �������'����� ��� ��;8���;:� �*���� -� �*���� � ��� ':8�8 �?'����� 5� �����( -��5� �� ,�� 6� ��$0 �������� ��� �� ������ �� ��;8 �� ��;:�?'�����( �� �������� �� ������ ��� �?'����� �� �*���� - ����*���� 5���� ������� ��� �@�: ��� ��� �8@� '��� ������������'�������*( �����������*� ':8�8 �?'����� 5� ������� 5������<��������*�� ��� ,��� ���5� �� ��$0)� �� ��#:�(

����"���K�

�� ��� ��*� 5� ���� ��5� ���� ��$0��������� ����,����� ������ <��������*�� '������������� �� ��� '������ �� �,���� ��

������ ��� ��� ������� �������� �� ���� �'�'���( ��$0�������������,����� �� <��������*�� '������������ ������ ��F��� � ������� ����� ��,�� �� �*����� ����( 2�� ������ ���� ,� ������� �� ������� ��,�� �� ���� ��������� ��� �8 ��� � '��� ��� ����������� ��,�� �� ���� �� ��� �:4 ����( E� ���� ���������������� ,��5��� ���� �� ���� � '��� 5���� ��� ��� �����'�����7��"�� ��� ���� ������� �� �:4 ( 2��� ���������� �� ��� �����*��� 5��� �����,������ ,* � �������� �?'����� �� �*���� - ���

,����� 4� ���� ����� �� �� �������� � ������� � ",3!� ���� ������� �78 � � �� � � 1!������� ��������� �������;��������*�� 1:� 80$ ����3 5��� ������ ��� $ � 5��� �� �.�� ��,�� ����#:� 1;4��#:�3 �� ��$0)� 1;4��$0)�3 �� � ''��������5��� ����� 1800" '����3� �� ���( ;��������*�� �'�'��� 5� ������ ,*������ �������� �� �&= 1A0�� '����3 ����� ��� ��� ��* �� ������ ������������ 7 ����������� 1:000 � '�� �:3 :$ � ,����� ��������� ��� ����(-'�'����� ���� 5��� ��������� ��� ��� &����� ������.�( !��� ������ ����� �� ��,�� �� �'�'����� ���� ���� ���� �?'������������������(

,����� �� �3� ����� ;��������*�� 1;3 5��� ���5� ��� $ � �� ������#2#� ��#:� �� ��$0)�( ���������� ����*� �� ��� ��- �������1'��'���� ������ �������+ �):�-3 5� ������� ��� ��5��� ��� ��������� �*��� '��� 1�8� �� �:4 3( 80$ <��������*�� 5��� ����*>�� �������� �?'��������� ���������( 2��� ���� ��� ��'���������� �� 88�?'�������� ��� <��������*�� ���� ����� �����(

,����� .� -��� ����� � �� ��������� �� ��� � �� � ���� ���� ���� ������ ;���������*�� 1;3 5��� �������� ��� $ � �� ��$0)� ����#:� �� � ''�������� 1�3 �� ��� 1�35��� ����� 1A0" '����3( ���� 5��� ���� ����,���� 5��� 7��"��� 6?��� ���� ����� ��- ������������� � �������� F�������� ����*� ����- ������� 1'��'���� ������ �������+ �):3��� �� 7��"�� �����'������� 1F������� ��������*���������T����� �����7��"�� ���������� �����,��*+ �)83 5� '��������( 80$ <��������*�� 5�������*>�� ���� ���� �?'��������� ��������� 2������� ��� ��'���������� �� ����� �?'���������� <��������*�� ���� ����� �����(

./� �!K"��K� � �� 2& �K"!�-) K� ��/ �2��-2�/ � ! -2K)K�C

�*���� ����� ��$0 ��������( �� ���� ,� '������ �� �����?'������� ���� ,��� '�������� ��� <��������*�� ���5� ��� 5��� ����� ,����� ���� � ����� 5���� '������<��������*�� ��������������� ��� ���� ��5 ������ ����� ���������5��� ��� �����( 2�� ���� �������� �� ���������� �������� ,*5���� ��$0 �������� ��� ������� ������ ���� ���5��(�� � ����5����* ���� ':8�8 �?'����� 5� �������� ��

<��������*�� ���5� �� ��$0) ��� ��#:����������� )�� ����'���� 5��� ������������� #2# 6,��,��� 1,�� 63( - 'A# �<��5� �� ����� ':8�8 �?'����� 1 ������* �� ��� 899#3� ��������'���*����� ,� �?'������,* ��� ������������ 'A#5������,��� �,����� ����.��� �� ��- ����������� 1������ �� ��� 899A3�� � ��5 5��� ���,����� ���� ���* ���� �*'� �?'�� ���������

��$0 ������� ��� ���� � '�������� ������ �� ��$0@��$0 ����������������� � ��� ��������� �� ���� ���5�� �� ������( 2�������� �� ��$0 ��������� ��5����� ������* ������ ��������� ����� ���� �*'� ��� �� ����� ���� �� ���������� �� ���������������(��$0 �������� �������� ��� ������ �� ��������� ���� ��������*�� ,* ����,����� ����� '������� �'�'��� 1;����� �� ���899A+ )��5�� �� ��� 899A3( ����������� ��$0 �������� �� �� �������������� ��������� ���� �������� ��� ���� ������� �� ������������'�'���� � '���� ���� ��� ,��� ���������� �� '��������� �� 7���

: '������ 17T�U��< �� ��� 899D3( K� ������ 7 �*�'���*�� ��$0�������� �������� '������������ 17�������� ��� !���� 89983��� '�������� �������� ������ 7 ���� �'�'��� ������ ,* �����������'��� �������<��� 1)� �� ��� 89B9+ /�������� ��� )���������899:3+ ��5����� �� ��� ������ �� �?'����� �� ������ ����� 7���� ��� ����������� ����������� �'�'��� 1������� �� ��� 899A+��������� �� ��� 899A3( ����������� ��$0 �������� ''���� ����� ����� '������������ �� ��������� 7 ���� ,* ������� ���5�� �����5����� �'�'��� 1������������*��< �� ��� 899%+ 7���' �� ���899B3(E� ��� ����� 1 ���'��� �� ��� 899%+ �������������� �� ���

899D3 ���� ��'����� ���� ��$0 �������� �� ������ �'�������� ���������� �� ���5�� ����,�����( -�������� �� ���'��� �� �� ��$0���������� �� ������ ������������ �'�������� ���� ����6�����*''���� ���� ���5�� 5����� ������� '������� ���� �'�'����� ,� '���������� �'�'��� ������ ,* ��������'����� ��� ��� �������� �� 2����( 2��� ���� ������ ���� ��� ��� ���������� <��������*��� � 5� ����������� ���� ���� ��$0 ��������������� ������� '������� �'�'����� ���� ������ ��� ��� �� ��������'�'��� ������ ,* ����� �����( ����������� �� ���������5��� 7���� �� �� 1899D3� 5� ������ �� ����� <��������*�� �'�'���5��� ������ 2���� �� ��� <��������*�� ����� 1���� ��� ��5�3(�����'����� ,��5��� ���� ���� ��� ������� ,� ���* ����� ,��?'������ ,* � ��������� �'�������� ���� ������(�� ��� ��*� 5� ��'����� ���� ��$0@��$0 ������ �����������

��5�� ��5� ��� <��������*�� ���� �*��� ��� ������� ��� ����17��"�����������3 �� ��� �:4 '���( �������� ����� ���������'���������� ��� ������ �� ��$0 �������� �� ��� � ��� �:4 '����5����� �� ��� ��� ����� ��� '��������� �� ���� �� ��� �8 '���( ���� ,��� ��'����� ���� �������� �� ����� �� ������ ����6,��,��� ������ ��� ���� ���� ��� �8 '��� 1���� �� ��� 899A3( ������� ,� '��,�� ��������� ����� �� ��� ��*� � ������ '����������� ��� ������� ��� �������� ������ �� ��$0 �������� �� ���'���( �� ��� � '���� 5� ���� ������� ��� '������ �� .����������� ��� ��,�� �� 5���� 5� �������� ����� ����� ���������(2��� .������ ���� 17��"�����������3 ���� '������* ,���������6�� ,* ���>*�<��5��> �� �� 189B03 �� ����� ���� �*'���������� ���� �'������� ���� �� �����( 2��* ��� ����*��������� ����������>�� ,* ���* ��5 !�- ������� ��� �����������������(E�� �� �� 1899#3 ��'����� ���� ���� �����,����� 2���� ��� �

����6���� �*������� ������ �� �:4 ���� ���� ��� ���� ����<�� ������� �� ��� �������� �� ���� �� ��� ��'���( E� ������5� '������* ���� ��$0 �������� �� <��������*�� ���� �� ���������� '�������� �� 2���� 1�������������� �� ��� 899D3( �� ����<��* ���� 2���� � ��'���,�� ��� ��� �,����� ������� � ����*��<��� ������������� ���� �� ��� ���� '�������� 5� ��� ,���5��� ������������� ��.���� �� ����,�� ���� '������������( �� ���� ,�

,����� 6� ���� ����� ������� ��� �� � ��� ��� �� - ����������;��������*�� 1;3 5��� ���5� ��� $ � �� ������ #2#� ��#:�� �� ��$0)���� ��������� ���� �����( 2���� ������� '������ 5��� ������� �������*>�� ,* 5����� ,��� 1D0�� '�� ����3 ��� ��;8� ��;:� �*���� -��*���� � ��� ':8�8 �?'�����(

5�� � "� 2�� ���� ������ �� ��������� � ���������� �� ��������� �� �� '( ��� ) ������ ��� ��������� �� '*+&�

�8 � �:4

;4��#:� ;4��$0)� ;4��#:� ;4��$0)� ;4��#:� ;4��$0)�

?' 8 DA(% D:($ 88 D(B B(8 8:(# ?' : A$(# A$(: 8#(# 80(D 8%(D 8B(D ?' # AD(: A0(9 8B(# 8%(8 8$(B 8D ?' $ %%(# %#(9 8#(D 88(: 8:($ 8$(: ?' A %0 A9(B 80(D %(# 8$(A 8D ?' % AB AA(% :: 89(B 8:(# 8A ?' D AB(8 A$(B 89(% 88(: 8D(D :B(: ?' B %8(A $A(8 8D(D B(A 8$ #D(D

��� %8($ AD(8� 8A(B 88(A� 8#(B :0��� %(D B(# $(: $(A # B(%

�;��������*�� 1;3 5��� ��������� ��� $ � �� ��$0)� �� ��#:� �� � �����( - �������� F�������� ����*� �� ��- ������� ��� �� 7��"�������'������� 5� '�������� � ��'����� �� ,�� 6( !��� ��� �?'���� � ��� '��������� �� <��������*��� ���� ����� �?'������� ��� ����� �����( �!�������6�����* ��������� ���� �������� ��������� �� ��� E����?��L ���(

/K)( 88$� �K( # -!�& :000 ��$0 )��-2�K� -�� ; !-2��K�C2 �!K)�� !-2�K� ./.

����� ����� ����� �?'��� �� ������?�� ������ ������ ����<��������*�� ������� '�����������* �� �:� 5���� ��* ��'����� ����� �*'��'���6� ����<'���� 1����� �� ��� 899B3(&������� �� ����5��� ���� �� � �'������� � ������*

�������� ,* ���� ����� � 5��� � ���� '������������ ��� ����������������( 2�� ��������� �?'����� �� ��$0 �� ��� '������������ ,������'������� �� �'������ ���� � '��,�� ���� �� ��� '���5�*�� ��������� <��������*�� ���5�� ��� ���������������( ������� ����- *����� � <��5� �� ���� ����� <��������*�� ����������������( ����������� -�,�� ��� 2������� 189B$3 ����������� ����5������5�� ���� ��� ���� �*��� ��� ,� � '���6� ����� �� ���<��������*�� ��������������� '������( 2�� ����� ,� �������� �� ���'����� 6����� 5���� ��5�� ���� ��$0 �������� ����6�����*������ ��� ��,�� �� <��������*�� �� ���� '��� �� ��� ���� �*���(E������ ��$0 �������� '��* � '��� �� ������ <��������*������5�� �� ���� ������ �� ,� �����������( - ��$0 ������ ������* �?'���� ,* ��������� 2 ����� ,��'���� ��� �����*��� ��� ���'���� �� '������ ���� ����������� ������ �?��� 5���� ������'����� �� ��� ������ <�� �����������(2�� '��� '��*�� ,* ��� ��$0 '���5�* �� ��� '���������

��������� ���� 5���� <��������*�� ���5�� ��� ��������������� �����'����� ������ �� ,� ��6���( �� ��� �����?�� ��� ������,���� ���������� ��$0 �?'����� �� '����� � ������ 1������� �� ���899%3( /��� �� �� 1899D3 �������* ��'����� ��5���������� �� ������� �� �� ��$0 �?'����� ,* ���� ���� �� ,���� ��.�������� ���������( 2�� ����� ,� �� ���������� ���� ,*5���� ���� ���� ���'� ���� ��������� 2 ���� ,������ ��� ��$0������(

�� ��� ������� �� ���������� ������ �� ��� ��������� ���� �� �� ����������

��������� �� ��� ��!� ���� �� ����! ���"�� �� �������� �� ��� ������ � ���� ��

������ #�������� ��� ��! �� �������� #� ��� $%&'�() ����� *+*,,,-�

! � ! �� �

-�,�� ; � 2������� )7G ;������ �� 5������5�� ���� ��� ���� �*��� �� ���������� �'������� <��������*��( . /����� '������� B:G8%8@8%$� 89B$

7���������� �� ������� !� ���* -� ������� �� ���>�� �� 7�*�� �-� ������� G������������� ����� �8 � 5��� � ��'��� ����������� �� ������ ������������ �*�'���*��G ������������ ������ �� ���� �*��� ��������* '������(�"� (��� 0�� :$0G:%#@:D#� 899B

7�<<�� -&� &��<��� 7-( 2�����.� ��� �����>����� �� ������� ��������( ��G&�*�� - 1��(3 ���������� �� �����1��� � �������� 2���������� /��( 9( ��5C��<G /�� ������� !������� ��(� 89DB� ''( B$@BB

7�������� �� !��� �G ���5��� ���� 7 �*�'���*�� �� ��� ��$0 *���(&����� #A#G%DB@%D9� 8998

7���� )� K����� �� ������� �� ������ -� �������� �� ��������� -� �������� �G8�:A����*���?*������� ��#� ����������� ���5�� ������ ,��� 8� ������� ������������� 7 ��������� ����� �'�'��� �� ������ ���� <��������*��( ./����� '������� 809G:D%@:B:� 899D

7���' �C� ��������� �� �������� � G ��$0 �������� ��'��� �*�'��,������ 7 ����'������������ ��� ��'��� ����*( ���! 0�� ::G#89@#:D� 899B

7T�U��< �� 7�������� �� ������!��� )G ��$0 �������� ��������� ����������'�'��� �� ���� ��������� ����( /�� /������ 9G#%A@#D:� 899D

��? �� ������� �� /��,������� 7� /�� �,�� 7� ;����� �� ����� ��7�������� �G -��������� �� ���� ��������� ���� ������ ��$0 �������<���(. �"� 2� 8B0G8:%#@8:D:� 899$

���>*�<��5��> P� 2������ �� ������ !G ��5 ���� �*��� ���'�������������6�� ,* ����'�������� F�5 �*������*( (�������� 8G9B@80B� 89B0

���>*�<��5��> P� 7��� �� ��� 7��� �� ����>*�� E� &��> -� )���� 2�2������ �G ������ �� �'�'����� ���� ������ ,* F�5 �*������*( (��������8#GD9A@B0B� 899:

������� !E� &�����,��� �� ������,��� -� �� ��G ��$0 � ����������* �?'������ ���� <��������*��� ��� . /������ :%G:#:9@:##$� 899%

������* E�� 2�<��� 2� /������ / � �� ��G E��8 � '�������� �������� �� 'A#���� '�����( (��� DAGB8D@B:A� 899#

���'��� -�� ��5�� �E� ����� �� �� ��G ��$0������� ���5�� ����,����� ���'�������� ���� � �����<�� ,* '�����7��� ����������� ) �8G ������������� 2!-�# � � ������ ��������( %������� 8#G::$#@::A$� 899%

����� � � ����� �K� ���5 -� ������'�� �-G ������������ ���� �*��� ����<'���� ��'����� ������ ���� <��������*�� ��� 6,��,���( (��� ����� '��� 9GA#A@A$#�899B

���� ; � ���'�5<� ��� ��'��� --� 7������ 2� )����* !�� ���'' !�G ��$0�?'����� ,* ���� 6,��,���( (��� /������ /����������� DDG$:@A8� 899A

���<��� �� )���� �)� 7��<5��� � �� ��G ����,����� �� ���� 7����� �*�'�������5�� ,* ��$0 ��������( ���� B#G:DBD@:D9$� 899$

����,��� )� 7���� �� �� ������/� 7� /�� ������� �� ;����� �� 7�������� ��!��� �G ��$0 ��� 7 ���� ������� ����'��� ��� ���������� �� ������ 7�*�'���*�� ��� �� � '������ �������� ������ '�����*'�( . �"� 2� 8B#GDD@BA� 899%

���* -& � �'�� &G ��$0 � ����������* �?'���� �� ��*��� �'�������� ����( ./������ 8$9GDDA@DB:� 89B:

������� �� ��������� � ������ � /�� ����,��� )� ;����� �� 7�������� �G ���������� ����� �'�'��� �� ��$0���������� ���� 7 �*�'���*��( . �"� 2� 8B:G8:%A@8:D#� 899A

��'��� --� ���'�5<� ��� ��� �� ��� �� ���'' !�G &��� �'�������<��������*�� ��� ������ �� ������ �������<���% ��� ���������� 2�*�'���*�� '������������ ,* � ��$0���'������ ��������( ��� . /������:%G8#D8@8#DD� 899%

���5�� ��� ������� !-G - ������� ���� �� ��$0 ������ �� ��� ��������� �� ��$1R3 2����� ��'���( /������ � �� 8DG$80@$8$� 899%

&���� -E� ����� !� &����� �� �� ��G -���,���� �� ����� ��$0 �������������� 7 �*�'���*�� ,� ����,�� '������������ �� 7 �*�'���� ����( (���/������ 8A:G$%B@$B0� 899#

&� �� �������� &G - ����� ������� �� ��$0G �������� �� ���� ����� ������������ ����( . �"� 2� 8B#G8A9@8%D� 899%

&��� -� ���'�� �G =����<�� �������6�����*���� ���� �� ���'�������( &�����#%8G$9$� 899#

&�����,��� �� ����������* �� �5��� ��� ����� ��� ������� !E� ;������-� -���� -G ?'����� �� ��������� ��$0 ,* ������ ����������� ����( .�"� 2� 8B:G##@$0� 899A

;����� �-� ��������� �� !��<�� 7 � E��� -�� -���� -� &�����,��� �G���������� �� ��$0 5��� '��6�� ��,�� �'#9 ����� '����F�������*��'��� �� ���� �����*��( . /������ 8AAG$98D@$9:A� 899A

)� C�� ���� � � E������ �2� ����� �-� ������ �� ��)����� �� G ������� �� �������������� �������� �� �������� ������( &����� #$:G9:9@9#8� 89B9

)��5�� 7� ���� �� ������,��� &!� 7��<�� C� ;���>�< !-� ���� �G �'��������'�'��� �� ��������� ���� � ��6������* ����,���� ,* 2!-� 1��$0�������3 ���2���� ,� ������* �������� ,* �������<���80( ��� . /������ :AG89$#@89A0�899A

���� !� ���>*�<��5��> P� �������������� )� ������ !G ��������� �� A�,�������?*������ 17��"��3 �����'������� ,* ���������� ����,����( .3�������� (������� ##GB:8@B:D� 89BA

���<����� 7�� 7���� 2C� ������ 2�� ������ /7G -���'������������ ������ �������,����� ��'��� ��� ���������������� �� ������ ���� <��������*�����# /����� A8G%9D@D08� 89B$

������ !�� )��,����� �-� -���� -G ��$0 ��� �� ������� �� ������� �����������'���'��� ��� ��*� ��'������ 7 ���� ����������( /������ � �� 8#G$#8@$##� 899:

�������������� �� ���,��>�������� �� ���� �� �� ��G ��$0 �������� �� ����<��������*�� ����,�� ����� '������������ ��� ����� ����� ���������������( ./������ 8ABG8$$@8A:� 899D

������������*��< �� -���� � !�,������ �� E�T���� �� 7������� !G ��88����8B��� ��80: ����������� ������� ���� �*����� ���� ���5�� ����� ������,* ��$0 ���������( (����� 0�� A%G8909@898%� 899%

��������� �� �<�� ;7� C�� �&� 2���� �� ;������ �&� ���5 ;� ��������� G ��$0 �������� ����� -'��84�� �?'����� �� ���� 7 �*�'���*����� ���������� �'�'��� ������ ��� -'��84�� '���5�*( . �"� 2� 8B:G8AAD@8A%A� 899A

����� ��G �������� �8 �*����( (��� D#G80A9@80%A� 899A������ �� ������� � �� �� 7������� �� &� !�G ������� 'A# �������* ���

���������� �� ��'��� �� ��- ������ '�� ��- �����������( %�������88G8#%#@8#D0� 899A

�'���� ;� -������� !�� �����<,��� )� �� ��G !����,����� ���� ��$0 ������������� 7 ���� '������������ ��� ��������,��� ��������( . �"� 2� 8D%G8A$#@8AA0� 899:

/�������� -� )�������� ;-G !��� ���� ������� ������� '��������� ���� �����,* ��� 7 ���� ����� '������ ��:0 ��� ��$0( ��� . /������ ::G#8$8@#8$B�899:

/�� �� �� ;�<���� &� ���* �G ��$0 ��������������� ������������ �� 2 ������ ��� ������'���� �� ���'�� �������( &����� #DBG%:0@%:#� 899A

/�� ;����� �� 7�������� �G ��$0@��$0 ������� � ������������� ����'����������'���( � � /������ %G8@DD� 899%

/��� �� ������� �� ����* -G ��$0 �?'����� �� �'������� ����( ���������� 0��8DGA%9@AD:� 899D

E�� �� ���� �� 7������ 7� ����� �G �������� �� �������� ������ �� ���� ������������ �� ���� �� '������ ����,���� ��� ���� �*��� <������( �� . �������:%AG�#%A@�#D$� 899#

=���� C� &����� ��� P���� &� ��� �� ;�,�*��� !� 7���� �G ':8 � � �����������,���� �� �*���� <����( &����� #%%GD08@D0$� 899#

C����� �� E���<��� �� ������ � � 7�� �� ���5 ;� )������� �� ��� )G)������� �� ��$0 �� 6,��,��� ����� ��A$ 1��- �83 ��� ��80%1/�- �83 '���������� ��� �)�% '�������� ��� '������������( . ���!�� ����ABG:09@:8%� 899A

./6 �!K"��K� � �� 2& �K"!�-) K� ��/ �2��-2�/ � ! -2K)K�C