astrocyte-like cells derived from human oral mucosa stem
DESCRIPTION
koasTRANSCRIPT
![Page 1: Astrocyte-Like Cells Derived From Human Oral Mucosa Stem](https://reader034.vdocuments.us/reader034/viewer/2022052513/577c77f11a28abe0548e1593/html5/thumbnails/1.jpg)
Astrocyte-Like Cells Derived From Human Oral Mucosa Stem Cells Provide Neuroprotection In
Vitro And In Vivo
Javier Ganz, Ina Arie, Tali Ben-zur, Michal Dadon-nachum, Sammy Pour, Shareef Araidy, Sandu Pitaru, Daniel
Offen
![Page 2: Astrocyte-Like Cells Derived From Human Oral Mucosa Stem](https://reader034.vdocuments.us/reader034/viewer/2022052513/577c77f11a28abe0548e1593/html5/thumbnails/2.jpg)
ABSTRAK
![Page 3: Astrocyte-Like Cells Derived From Human Oral Mucosa Stem](https://reader034.vdocuments.us/reader034/viewer/2022052513/577c77f11a28abe0548e1593/html5/thumbnails/3.jpg)
Abstrak
• Human oral mucosa stem cell (hOMSC) akhir-akhir ini dijelaskan sebagai sel puncak dari populasi stem sel
• Potensi terapetik HOMSC bisa didapatkan dari biopsi kecil
• Kondisi medium dari induksi sel, menyelamatkan motor neuron dari hipoksia atau stres oksidatif in vitro, yang memacu menjadi efek neuroprotektif melalui faktor soluble.
![Page 4: Astrocyte-Like Cells Derived From Human Oral Mucosa Stem](https://reader034.vdocuments.us/reader034/viewer/2022052513/577c77f11a28abe0548e1593/html5/thumbnails/4.jpg)
Abstrak
• Subjek tikus dengan cedera saraf panggul dan di transplantasi dengan HOMSC menunjukkan kemajuan perbaikan pada fungsi motorik
• Pada tempat transplantasi, didapatkan peningkatan level NTF (neurotrophic factor) dan menjaga secara signifikan fungsi neuromuscular junction
![Page 5: Astrocyte-Like Cells Derived From Human Oral Mucosa Stem](https://reader034.vdocuments.us/reader034/viewer/2022052513/577c77f11a28abe0548e1593/html5/thumbnails/5.jpg)
Abstrak
• HOMSC –NS yang dihasilkan dari mukosa mulut menunjukkan efek neuroprotektif in vitro dan in vivo sebagai terapi masa depan pada gangguan neural
![Page 6: Astrocyte-Like Cells Derived From Human Oral Mucosa Stem](https://reader034.vdocuments.us/reader034/viewer/2022052513/577c77f11a28abe0548e1593/html5/thumbnails/6.jpg)
PENDAHULUAN
![Page 7: Astrocyte-Like Cells Derived From Human Oral Mucosa Stem](https://reader034.vdocuments.us/reader034/viewer/2022052513/577c77f11a28abe0548e1593/html5/thumbnails/7.jpg)
Pendahuluan
• Terapi berbasis stem sel menjanjikan sebagai pengobatan penyakit neurodegenerative
• Strategi yang digunakan dalam penelitian ada 2:– Penggantian sel untuk menambahkan sel yang hilang
dengan sel yang baru (Parkinson disease)– Menggunakan sel sebagai vector yang memproduksi dan
mensekresi neuroprotektif atau trophic stimuli untuk mempertahankan neuron.
![Page 8: Astrocyte-Like Cells Derived From Human Oral Mucosa Stem](https://reader034.vdocuments.us/reader034/viewer/2022052513/577c77f11a28abe0548e1593/html5/thumbnails/8.jpg)
Pendahuluan
• Neurotrophic factor (NTF) menghasilkan polypeptida alami yang mendukung perkembangan, kelangsungan hidup, dan membesarkan neuron.
• NTF seperti Brain Derived Neurotrophic Factor (BDNF) dan Vascular Endhotelial Growth Factor (VEGF) mempunyai peranan penting sebagai pertumbuhan, pemeliharaan dan regenerasi sistem saraf.
![Page 9: Astrocyte-Like Cells Derived From Human Oral Mucosa Stem](https://reader034.vdocuments.us/reader034/viewer/2022052513/577c77f11a28abe0548e1593/html5/thumbnails/9.jpg)
Pendahuluan
• Populasi HOMSC menunjukkan sebuah primitive neural crest (NC) stem cell dibuktikan dengan faktor transkripsi pluripotent Oct4, Nanog dan Sox2 dan sesuai ekspresi dari NC marker.
• Embrio NC memberi peningkatan untuk diferensiasi populasi glial di sistem saraf perifer.
![Page 10: Astrocyte-Like Cells Derived From Human Oral Mucosa Stem](https://reader034.vdocuments.us/reader034/viewer/2022052513/577c77f11a28abe0548e1593/html5/thumbnails/10.jpg)
Pendahuluan
• Penulis berhipotesis bahwa sel ini secara tepat memberi sinyal ke faktor solubel yang dapat memberi manfaat stem sel sebagai sumber terapi sel autolog pd ggn neurologi
![Page 11: Astrocyte-Like Cells Derived From Human Oral Mucosa Stem](https://reader034.vdocuments.us/reader034/viewer/2022052513/577c77f11a28abe0548e1593/html5/thumbnails/11.jpg)
BAHAN DAN METODE
![Page 12: Astrocyte-Like Cells Derived From Human Oral Mucosa Stem](https://reader034.vdocuments.us/reader034/viewer/2022052513/577c77f11a28abe0548e1593/html5/thumbnails/12.jpg)
Kultur HOMSC
• HOMSC didapatkan dari biopsi mucosa mulut pada pembedahan mulut
• HOMSC didapatkan dan dibiakkan di media yg terdiri dari low glucose Dulbecco dimodifikasi Eagle dan dilengkapi – 100mg/ml streptomycin, 100U/ml penicilin, 1250 U/ml
Nystatin (SPN), 2mM glutamine dan 10 % fetal calf serum
![Page 13: Astrocyte-Like Cells Derived From Human Oral Mucosa Stem](https://reader034.vdocuments.us/reader034/viewer/2022052513/577c77f11a28abe0548e1593/html5/thumbnails/13.jpg)
Kultur HOMSC
• Hasil biopsi disimpan dalam suhu 40 C dalam semalam
• Kemudian lapisan epitelial dipisah dari lamina propia dan diinsisi menjadi lembaran 0,5mm3
• sel dipindah ke piringan cultur yang dipanen dengan 0,25% trypsin dan ditanam pada ketebalan 4x104 cell/cm2
![Page 14: Astrocyte-Like Cells Derived From Human Oral Mucosa Stem](https://reader034.vdocuments.us/reader034/viewer/2022052513/577c77f11a28abe0548e1593/html5/thumbnails/14.jpg)
Diferensiasi HOMSC
• Ada 2 tahapan pada diferensiasi:1. Sel yang disimpan pada serum murni dengan ditambah
suplement-seplement dengan konsentrasi akhir 20ng/ml2. 72 jam kemudian dilakukan tahapan diferensiasi kedua
diaktifkan. Sel disimpan pada media serum bebas ditambah • 1mM dibutyryl cyclic AMP, 0,5 Mm 3-isobutyl-1methylxantlon,
50ng neurogulin, 1ng.ml PDGF selama 72 jam
![Page 15: Astrocyte-Like Cells Derived From Human Oral Mucosa Stem](https://reader034.vdocuments.us/reader034/viewer/2022052513/577c77f11a28abe0548e1593/html5/thumbnails/15.jpg)
Immunodetection
• Untuk analisis imunofloresin, sel difiksasi pd posphate buffer saline (PBS) 4% selama 60 menit di dalam blok
• Antibodi primer dilemahkan pd blok dan disimpan semalaman pd suhu 40 C
• Antibodi primer dideteksi dgn antibodi sekunder Alexa 488 dan 568 yang dilabeli dgn flouresin selama 1 jam pd suhu ruangan.
![Page 16: Astrocyte-Like Cells Derived From Human Oral Mucosa Stem](https://reader034.vdocuments.us/reader034/viewer/2022052513/577c77f11a28abe0548e1593/html5/thumbnails/16.jpg)
Immunodetection
• Foto diambil dgn floresin Olympus IX70-S8F2 dengan sumber cahaya flouresin.
![Page 17: Astrocyte-Like Cells Derived From Human Oral Mucosa Stem](https://reader034.vdocuments.us/reader034/viewer/2022052513/577c77f11a28abe0548e1593/html5/thumbnails/17.jpg)
Western Blot Analysis
• Untuk Western Blot Analysis , sel yang dilarutkan dlm buffer yg mengandung PBS 1% SDS dan complete protease inhibitor ditambahkan 12 % SDS-Polyacrylamide gel elektrophoresis.
• 3 kultur independent digunakan sebagai replikasi biologi
• Membran dianalisis dan dikumpulkan, diukur dengan Odyssey IR imaging system.
![Page 18: Astrocyte-Like Cells Derived From Human Oral Mucosa Stem](https://reader034.vdocuments.us/reader034/viewer/2022052513/577c77f11a28abe0548e1593/html5/thumbnails/18.jpg)
Real Time Polymerase Chain Reaction
• Total RNA diisolasi oleh TRI reagent• Jumlah dan kualitas RNA ditentukan dengan
ND-1000 spectrophometer• Real time semiquantitative polymerase chain
reaction (PCR) dari gen berperan pada ABI Prism 7700 rangkaian sistem deteksi.
![Page 19: Astrocyte-Like Cells Derived From Human Oral Mucosa Stem](https://reader034.vdocuments.us/reader034/viewer/2022052513/577c77f11a28abe0548e1593/html5/thumbnails/19.jpg)
Enzyme-Linked Immunosorbent Assay Berdasar Pengukuran Sekresi NTF
• Konsentrasi human VEGF dan BDNF dalam kultur sel supernatant diukur menggunakan prosedur ELISA
• Sampel yang diinkubasi semalaman pada piring berlapis, diikuti paparan antibodi sekunder dan streptavidin-horseradish H2O2
• Hasilnya dikalkulasi sebagai sekresi protein oleh 1 juta sel/mm dri media
![Page 20: Astrocyte-Like Cells Derived From Human Oral Mucosa Stem](https://reader034.vdocuments.us/reader034/viewer/2022052513/577c77f11a28abe0548e1593/html5/thumbnails/20.jpg)
Pengujian Kemampuan Hidup Sel
• Peneliti telah menguji kemampuan undiferensisasi dan diferensiasi HOMSC pd media preparat untuk melindungi motor neuron-like hybird cell line (NSC-34) dari hipoksia dan stres oksidatif
![Page 21: Astrocyte-Like Cells Derived From Human Oral Mucosa Stem](https://reader034.vdocuments.us/reader034/viewer/2022052513/577c77f11a28abe0548e1593/html5/thumbnails/21.jpg)
Cedera Saraf Panggul dan Transplantasi Sel
• Percobaan dgn kerusakan saraf panggul digunakan pada tikus Sprague-Dawley laki-laki usia 8 minggu dgn berat 230-250gr
• HOMSC didapatkan dari donor yang berbeda dan digunakan pd eksperimen yg independent
• Hasil dari 2 eksperimen disatukan dan dipresentasikan sbg rata-rata + SEM/binatang
![Page 22: Astrocyte-Like Cells Derived From Human Oral Mucosa Stem](https://reader034.vdocuments.us/reader034/viewer/2022052513/577c77f11a28abe0548e1593/html5/thumbnails/22.jpg)
Cedera Saraf Panggul dan Transplantasi Sel
• Tikus dibius dgn chloral hydrate pada cedera saraf panggul dan sel transplantasi, maintenance dgn cyclosporine
• Saraf panggul kanan dikeluarkan dan di klem 10mm diatas cabang pertama saraf selama 30 detik
![Page 23: Astrocyte-Like Cells Derived From Human Oral Mucosa Stem](https://reader034.vdocuments.us/reader034/viewer/2022052513/577c77f11a28abe0548e1593/html5/thumbnails/23.jpg)
Cedera Saraf Panggul dan Transplantasi Sel
• 20 jam setelah cedera, diferensiasi HOMSC dan naif sel dipanen, dilabeli dgn seperparamagnetic iron oxide, disentrifugal dan diresuspensi pd konsentrasi 1x106 sel/100µL dimaintenence dgn es sampai transplantasi dilakukan
• HOMSC diinjeksi melalui m. gastrocnemius menuju saraf dan diatas cabang pertama saraf panggul
![Page 24: Astrocyte-Like Cells Derived From Human Oral Mucosa Stem](https://reader034.vdocuments.us/reader034/viewer/2022052513/577c77f11a28abe0548e1593/html5/thumbnails/24.jpg)
Cedera Saraf Panggul dan Transplantasi Sel
• Semua hewan coba dikorbankan 10 hari setelah transplantasi untuk dilakukan pengamatan histologi.