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2018
“EVALUACIÓN DEL EFECTO LARVICIDA DEL EXTRACTO ETANÓLICO DE Ocimum
basilicum (ALBAHACA) SOBRE LARVAS DE CUARTO (4) ESTADIO DE Aedes aegypti EN
CONDICIONES DE LABORATORIO”
SANDRA PAOLA MEJIA SERRANO
INGRY PAOLA PÉREZ VARGAS
UNIVERSIDAD DISTRITAL FRANCISCO JOSÉ DE CALDAS
FACULTAD DE MEDIO AMBIENTE Y RECURSOS NATURALES
TECNOLOGÍA EN SANEAMIENTO AMBIENTAL
2018
“EVALUACIÓN DEL EFECTO LARVICIDA DEL EXTRACTO ETANÓLICO DE Ocimum
basilicum (ALBAHACA) SOBRE LARVAS DE CUARTO (4) ESTADIO DE Aedes aegypti EN
CONDICIONES DE LABORATORIO”
SANDRA PAOLA MEJIA SERRANO
COD. 20142085071
INGRY PAOLA PÉREZ VARGAS
COD. 20142085058
Trabajo de grado en modalidad de investigación-innovación presentado como requisito para
optar por el título de Tecnólogas en Saneamiento Ambiental
DIRECTOR
DIEGO TOMAS CORRADINE MORA
Médico Veterinario M Sc Salud Pública
UNIVERSIDAD DISTRITAL FRANCISCO JOSÉ DE CALDAS
FACULTAD DE MEDIO AMBIENTE Y RECURSOS NATURALES
TECNOLOGÍA EN SANEAMIENTO AMBIENTAL
NOTA DE ACEPTACIÓN
Diego Tomas Corradine Mora
Docente Director
Ángela María Wilches Flórez
Docente Evaluador
Bogotá, Octubre del 2018
Dedicatoria
Dedicamos este trabajo a nuestros parientes y amigos cercanos quienes con gran apoyo y
confianza nos acompañan en el desarrollo del trascender humano y que nos llenan de fortaleza
para enfrentar los obstáculos del camino y para construir un horizonte lleno de sueños, en donde,
algunos llegan a ser tangibles con este logro.
Esta dedicatoria también va dirigida a nuestros profesores pues reconocemos la labor docente
como eje fundamental para nuestra formación tanto académica como social.
Agradecimientos
Agradecemos a la vida por permitirnos haber hecho parte de la comunidad estudiantil de la
Universidad Distrital Francisco José de Caldas que para el contexto educativo de nuestro país es
para nosotras todo un privilegio habernos formado en una universidad de carácter estatal que
promueve el pensamiento crítico, libre y autónomo.
Nos sentimos felices con nuestro proceso de formación profesional, gracias al
acompañamiento del equipo de docentes del proyecto curricular Tecnología en Saneamiento
Ambiental quienes nos brindaron sus conocimientos, especialmente al profesor Diego Tomas
Corradine Mora quien fue una guía imprescindible para el desarrollo de este trabajo. Así mismo,
agradecemos a la profesora Ángela María Wilches por ser parte en el proceso de evaluación de
este trabajo de investigación que fue concebido con gran dedicación y esfuerzo a nuestros
compañeros por hacer parte de nuestra trayectoria, por crecer juntos y permitirnos dar lugar a la
creación del conocimiento colectivo.
Gracias.
Contenido
1) Resumen.......................................................................................................................................12
2) Abstract........................................................................................................................................14
3) Introducción.................................................................................................................................16
4) Objetivos......................................................................................................................................19
4.1) Objetivo general.......................................................................................................................19
4.2) Objetivos específicos...............................................................................................................19
5) Marco teórico..............................................................................................................................20
5.1) Marco referencial.....................................................................................................................20
5.1.1) Aedes aegypti........................................................................................................................20
5.1.2) Ciclo de vida.........................................................................................................................24
a) Fase 1: huevo...............................................................................................................................25
b) Fase 2: larva.................................................................................................................................26
c) Fase 3: pupa..................................................................................................................................27
d) Fase 4: adulto...............................................................................................................................28
5.1.3) Distribución de Aedes aegypti en el mundo..........................................................................30
5.1.4) Aedes aegypti en Colombia...................................................................................................31
5.1.5) Enfermedades de Salud Publica…………………………………………………………... 33
a) El dengue.....................................................................................................................................33
b) El zika..........................................................................................................................................35
c) Fiebre amarilla.............................................................................................................................36
d) Fiebre del Chikunguña............................................................................................................... 36
5.1.6) Prevención y control………….………………………………………………………….....40
5.1.7) Ocimum basilicum (Albahaca)..............................................................................................43
5.1.8) Propiedades............................................................................................................................45
5.1.9) Aceites esenciales..................................................................................................................45
5.2) Antecedentes............................................................................................................................47
6) Metodología.................................................................................................................................51
6.1) Obtención de larvas……………………………………..........................................................51
6.2) Obtención del extracto: ...........................................................................................................52
6.3) Preparación de las diluciones...................................................................................................54
6.4) Bioensayos...............................................................................................................................55
6.5) Lecturas de Mortalidad………………………………………………………………………56
6.6) Análisis………………………………………………………………………………………56
7) Resultados...................................................................................................................................56
7.1) Eficiencia del extracto natural de Ocimum basilicum (Albahaca) como larvicida a las
diferentes concentraciones experimentales……………………………………………………….58
7.2) Análisis de mortalidades en los distintos tratamientos experimentales en relación con el
tiempo de exposición……………………..……………………………………………………….60
7.3) Análisis de regresión logarítmica, para el cálculo de las concentraciones letales CL 50 y CL
90…………………..……………………..……………………………………………………….61
7.4) Análisis de tiempos letales TL 50 y TL 90………………………………………………….62
7.5) Análisis Estadístico Anova de un factor……………………………………………………...65
8) Discusión y análisis de resultados...............................................................................................67
9) Conclusiones...............................................................................................................................69
10) Recomendaciones......................................................................................................................71
11) Bibliografía...............................................................................................................................73
12) Anexos.......................................................................................................................................82
Índice de figuras
Figura 1. Aedes aegypti adulto. ......................................................................................................21
Figura 2. Ciclo de vida de Aedes aegypti. .......................................................................................24
Figura 3. Huevos de Aedes aegypti. ................................................................................................25
Figura 4. Larva de Aedes aegypti.....................................................................................................26
Figura 5. Pupa de Aedes aegypti. .....................................................................................................27
Figura 6. Adulto de Aedes aegypti………………………………………………………………...28
Figura 7. Distribución de Aedes aegypti en América Latina……………………………………...30
Figura 8. Distribución de Aedes aegypti en Colombia....................................................................31
Figura 9. Ocimum basilicum (Albahaca).........................................................................................44
Figura 10. Jaula de cría Aedes Aegypti............................................................................................51
Figura 11. Extractor Soxlhet............................................................................................................53
Figura 12. Rotoevaporador IKA RV10…………………………………………………………...53
Figura 13. Extracto de Albahaca ……………………………………………………….………...54
Figura 14. Montaje de Bioensayos..................................................................................................55
Figura 15. Curva de regresión logarítmica para porcentajes de mortalidad y concentraciones…..62
Figura 16. Porcentajes de mortalidad corregidos con Abbott en relación con el tiempo…………64
Índice de tablas
Tabla 1. Taxonomía Aedes aegypti.................................................................................................23
Tabla 2. Taxonomía Ocimum basilicum (Albahaca)……………………………………………...44
Tabla 3. Porcentaje de mortalidad corregido con la fórmula de Abbott………………………….57
Tabla 4. Análisis de varianza ANOVA de un factor. .....................................................................66
Índice de anexos
Anexo 1. Registro de mortalidades en los tratamientos. ................................................................82
Anexo 2. Cálculo de las aproximaciones de las concentraciones letales CL 50 y CL 90………...84
Anexo 3. Formato registro para porcentajes de mortalidades acumuladas durante los
bioensayos.......................................................................................................................................87
Anexo 4. Gráfica de análisis por factor ANOVA. .........................................................................89
12
1. Resumen
El mosquito Aedes aegypti es el principal vector responsable de la transmisión de una
variedad de enfermedades tales como el dengue, el zika, la fiebre amarilla y la fiebre del
chikunguña las cuales aquejan diferentes poblaciones del mundo principalmente en las zonas
tropicales.
En el área de investigación de salud pública se contempla el control biológico y prevención de
enfermedades transmitidas por vectores, esto mediante el planteamiento de soluciones
alternativas que controlen la reproducción del vector y que no tengan impactos negativos sobre
el medio ambiente.
El presente trabajo de investigación tiene como fin último demostrar la eficacia del efecto
larvicida del extracto etanólico de Ocimum basilicum (albahaca), sobre larvas de cuarto estadio
de Aedes aegypti en condiciones de laboratorio, para lo cual fueron realizados 5 bioensayos con
larvas vivas sometidas a concentraciones en un rango de 1100 ppm hasta 1500 ppm del
mencionado extracto, cada bioensayo contó con cuatro repeticiones y un testigo, utilizando un
total de 625 larvas de cuarto estadio y realizando lecturas de mortalidad para evaluar el efecto
tóxico del extracto a las 0, 2, 12, 24, 36 y 48 horas.
Los resultados obtenidos de los bioensayos evidencian la eficacia del efecto larvicida, pues al
finalizar los mismos se obtuvo una mortalidad acumulada de 95% a los 48 horas de exposición
de las larvas vivas de cuarto estadio de Aedes aegypti a una concentración de 1500 ppm, lo cual
13
se considera un resultado favorable teniendo en cuenta que la OMS establece que la
concentración de los larvicidas y repelentes no debe sobrepasar las 5000 ppm, además los
resultados obtenidos para todos los tratamientos realizados estuvieron por encima del 50% de
mortalidad.
Palabras clave: Aedes aegypti, mosquito, control biológico, larvicida, Ocimum basilicum,
albahaca, bioensayos.
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2. Abstract
Aedes aegypti mosquito is the first vector responsible for the transmission a lot of diseases
such as dengue, zika, yellow fever and chikunguña fever, these diseases afflict different
populations of the world, the tropics places is one of the most afflict.
The public health area has as mission the biologic control and prevention of vector-borne
diseases, the biologic control and prevention of vector-borne diseases is achieved with the
propose alternative solutions that control the reproduction of the vector and that do not have
negative impacts on the environment.
The purpose of this research work is demonstrate the efficacy of the larvicidal effect of the
ethanolic extract of Ocimum basilicum (basil), on the fourth stage larvae of Aedes aegypti under
laboratory conditions. We prepare 5 bioassays with live larvaes, the larvaes were subjected to
concentrations in a range of 1100 ppm to 1500 ppm of basil extract each bioassay had four
repetitions and a control, using a total of 625 fourth-stage larvae and performing mortality
readings to evaluate the toxic effect of the extract at 0, 2, 12, 24, 36 and 48 hours.
The results obtained from the bioassays show the effectiveness of the larvicidal effect, so, at
the end of the bioassays, it reached a mortality of 95% was obtained at 48 hours of exposure of
the live larvae of the fourth stage of Aedes aegypti at a concentration of 1500 ppm of basil
extract, this is considered a favorable result because the WHO establishes that the concentration
15
of larvicides and repellent must not exceed 5000 ppm, also the results obtained from all the
treatments we evaluated were greater than 50% mortality.
key words: Aedes aegypti, mosquito, biologic control, larvicide, Ocimum basilicum, basil,
bioassays.
16
3. Introducción
Las principales enfermedades transmitidas por vectores representan alrededor del 17% de la
carga mundial estimada de enfermedades transmisibles y causan más de 700.000 muertes al año,
siendo las tasas de morbilidad y mortalidad desproporcionadamente altas en las poblaciones que
carecen de infraestructuras adecuadas y en el mismo sentido de sistemas de acueducto,
alcantarillado y saneamiento básico, encontrándose además una mayor incidencia las zona
tropicales y subtropicales (Organización Mundial de la Salud (OMS), 2017).
La transmisión y el riesgo de las enfermedades transmitidas por vectores están cambiando de
forma rápida debido a la urbanización no planificada, al aumento de los movimientos de
personas y bienes, a cambios medioambientales, entre otros (OMS, 2017).
El mosquito Aedes aegypti es considerado como el vector primario de los virus del dengue, la
fiebre del chikungunya, del zika y de la fiebre amarilla urbana, los seres humanos se infectan por
picaduras de hembras infectadas, que a su vez se infectan principalmente al succionar la sangre
de personas infectadas (Olano, 2016).
El virus infecta el intestino medio del mosquito y luego se extiende hasta las glándulas
salivales en un período de entre 8 y 12 días. Tras este período de incubación, el mosquito puede
transmitir el virus a las personas al picarlas (OMS, 2018).
El dengue es actualmente la enfermedad arboviral más común en seres humanos, con 390
millones de casos anuales en el mundo. En Colombia, es un problema de salud pública de
17
carácter prioritario en el contexto regional y nacional, siendo el mosquito Aedes aegypti
encontrado en todos los departamentos hasta los 2.302 msnm (Cabezas et al., 2017)
El dengue es una enfermedad infecciosa producida por el virus del dengue (DENV).
Pertenece al género Flavivirus, de la familia Flaviviridae que, a la vez, pertenece al grupo de los
Arbovirus (virus transmitidos por artrópodos), existen 4 serotipos llamados DENV-1, DENV-2,
DENV-3 y DENV-4, el dengue representa uno de los mayores retos de la salud pública en la
región tropical y subtropical, con 50 a 100 millones de casos anuales de fiebre por dengue y 250
000 a 500 000 casos de fiebre hemorrágica por dengue y síndrome de shock por dengue (Ochoa
et al., 2015).
Por otro lado, la fiebre del chikunguña, tiene como agente causal un arbovirus re-emergente
de amplia expansión en la última década, este que pertenece al género Alfavirus, familia
Togaviridae, encontrándose así que en el mes de diciembre del año 2013, la Organización
Mundial de la Salud (OMS) y la Organización Panamericana de la Salud (OPS), emitieron la
primera alerta epidemiológica sobre la entrada del virus que provoca la fiebre del chikungunya
en la región del Caribe, al detectarse por primera vez su transmisión autóctona en la región de las
Américas (Placeres et al., 2014).
Hasta el 10 de noviembre de 2014 se notificaron un total de 23.657 casos de Chikungunya en
Colombia, siendo la región del caribe la de mayor casos presentados, en total se presentaron 6
muertes. Para el mismo año a nivel mundial las tasas de ataque en las comunidades afectadas por
las epidemias recientes oscilaron entre 38%−63%, hallándose 3% y el 28% tienen infecciones
18
asintomáticas que contribuyen a la diseminación de la enfermedad si son picados por los
mosquitos vectores (Ministerio de Salud, 2014).
Es de vital importancia dar un enfoque al control de vectores para hacer frente al impacto de
las enfermedades transmitidas por los mismos, tal enfoque debe ir dirigido a la implementación
de alternativas innovadoras que permitan controlar la propagación del mosquito sin generar
impactos negativos en el medio ambiente.
Por tal razón el presente trabajo de investigación-innovación expone el diseño y aplicación a
nivel de laboratorio de un larvicida orgánico a base de Albahaca (Ocimum basilicum) con el fin
de controlar el desarrollo en la etapa larvaria del mosquito Aedes aegypti, destacando la acción
de repelencia natural en sus componentes activos para lo cual serán seguidos los lineamientos y
directrices del documento “Guidelines for laboratory and field testing of mosquito larvicides” de
la Organización Mundial de la Salud (2005).
"Las ideas emitidas por los autores son de su exclusiva responsabilidad y no expresan
necesariamente opiniones de la Universidad" (Artículo 117, Acuerdo 029 de 1998)".
19
4. Objetivos
4.1. Objetivo general
Evaluar el efecto larvicida del extracto etanólico de Ocimum basilicum sobre larvas de
Aedes aegypti para su control biológico en condiciones de laboratorio.
4.2. Objetivos específicos
● Evaluar el efecto larvicida del extracto etanólico de Ocimum basilicum
(Albahaca) a concentraciones de 1100, 1200, 1300, 1400 y 1500 ppm.
● Estimar las concentraciones letales LC 50 y LC 90 del extracto etanólico de
Ocimum basilicum, sobre larvas de cuarto estadio de Aedes aegypti.
● Determinar los tiempos letales TL 50 y TL 90 del extracto etanólico de Ocimum
basilicum, para larvas de Aedes aegypti de cuarto estadio.
20
5. Marco teórico
5.1. Marco referencial
5.1.1. Aedes aegypti
Este mosquito, de origen africano, fue introducido en América a principios de siglo. Es una
especie diseminada por el hombre por medio del transporte de sus adultos, huevos, larvas o
ninfas en barcos, aviones o transportes terrestres. En América es un mosquito doméstico que se
caracteriza por reproducirse en recipientes artificiales del domicilio o sus alrededores. Prefieren
agua limpia, con bajo tenor orgánico y de sales disueltas. La puesta de huevos la realizan en la
superficie del recipiente en la interfase agua-aire. El ciclo completo de A. aegypti, de huevo a
adulto, se completa en óptimas condiciones de temperatura y alimentación en 10 días (Nelson M,
1986).
Es un eficaz vector de arbovirosis como la fiebre amarilla y el dengue, motivando con esta
última enfermedad una de las grandes problemáticas de salud pública mundial, con alta
morbilidad capaz de bloquear las actividades de ciudades y países en picos epidémicos de esta
enfermedad viral. Además es un ejemplo de adaptación de una especie de mosquito al ámbito
humano, con criaderos, hábitat, fuente de alimentación, desplazamientos activos y pasivos
ligados al ámbito domiciliario (OPS/OMS en Uruguay, 2014).
Se caracteriza por ser una especie muy antropofílica que se desarrolla principalmente en
recipientes con agua limpia y, según los reportes más recientes, se encuentra en todos los
departamentos hasta los 2.302 msnm. El aumento del número de potenciales criaderos del
mosquito se ve directamente influenciado por la falta de un servicio continuo de abastecimiento
21
de agua, lo que lleva a su almacenamiento, muchas veces inadecuado (tanques bajos y albercas),
dentro de los domicilios, así como por la falta de saneamiento básico que resulta en la
disposición de residuos sólidos a campo abierto, especialmente de residuos que pueden contener
agua lluvia, problemas que se presentan con mayor frecuencia en las áreas rurales (Cabezas et
al., 2017)
Figura 1. Aedes aegypti adulto.
Fuente: (Organización Mundial de la Salud, 2017).
Los sitios de cría del Aedes son fundamentalmente artificiales: urbanos (en baldíos,
cementerios, desarmaderos, basurales) o domésticos (neumáticos, floreros, botellas, bebederos de
animales, latas abiertas o contenedores de cualquier tipo, depósito de agua de bebida, cisternas,
vasijas, tinajas, todo tipo de recipientes en desuso, aún pequeños). (MinSalud Argentina,s.f).
En determinadas condiciones de presión sobre la población de mosquitos, se los ha
encontrado colocando sus huevos en sitios naturales: axilas de plantas como las bromeliáceas y
bananeros, huecos de árboles, de cañas (bambú, por ejemplo). Cuando las condiciones son
22
propicias el mosquito no suele desplazarse a grandes distancias de los sitios de oviposición, pero,
eventualmente puede reconocerse un rango de dispersión activa de hasta 1-2 kilómetros. Por otro
lado la dispersión a través de medios de transporte (automóviles, trenes, camiones, ómnibus,
barcos, aviones, otros) es uno de los factores más importantes de diseminación de estos
mosquitos (MinSalud Argentina,s.f).
Este mosquito en su taxonomía se encuentra dentro de la clase Insecta, esta es la que más
cantidad tiene de especies de todos los seres vivos, con más de 1.000.000 especies descritas y a
su vez se encuentra dentro el orden Diptera (que significa dos alas), con más de 150.000
especies conocidas se sitúan entre los 4 órdenes con mayor número de especies de todos los seres
vivos. Una de sus principales características es la posesión de sólo dos alas, ya que el segundo
par de alas está transformado en unos muñones llamados halterios que le sirven para estabilizar
el vuelo, siendo los dípteros los organismos mejor adaptados al vuelo. Los dípteros necesitan
alimentarse de comida líquida ya que no poseen un aparato masticador, sino lamedor-chupador
(Galán, 2016).
A continuación, en la tabla 1, se muestra la clasificación taxonómica completa de Aedes
aegypti.
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Tabla 1. Taxonomía Aedes aegypti
Taxonomía Aedes aegypti
Reino Animalia
Phylum Artrópoda
Subphylum Mandibulata
Clase Insecta
Orden Diptera
Suborden Nematócera
Familia Culicidae
Subfamilia Aedinae
Tribu Aedini
Género Aedes
Especie Aedes aegypti
Fuente: (Knight & Stone, 1977).
24
5.1.2. Ciclo de vida
Su ciclo de vida manifiesta una metamorfosis completa que comprende estados inmaduros de
vida acuática y adultos de vida aérea, este ciclo se divide en 4 fases que son huevo, larva, pupa y
adulto los cuales se pueden apreciar a continuación en la figura 2.
Figura 2. Ciclo de vida de Aedes aegypti Fuente: (Araguaia, 2015)
25
a) Fase 1: huevo
Tiene alrededor de un milímetro de largo, son inicialmente de color blanco, para tornarse
negros Figura. 3, con el desarrollo del embrión, que evoluciona en óptimas condiciones de
temperatura y humedad en un lapso de dos a tres días. Con posterioridad a ese período, los
huevos son capaces de resistir desecación y temperaturas extremas de hasta siete meses a un año.
La mayor parte de cada postura es de eclosión rápida, mientras un porcentaje reducido constituye
los llamados huevos resistentes, inactivos o residuales (Marquetti, 2008).
Figura 3. Huevos de Aedes aegypti.
Fuente: (Eiman, 2010).
Los mosquitos hembra adultos depositan sus huevos sobre las paredes internas de recipientes
con agua, las cuales están húmedas, del nivel de agua hacia arriba. Los huevos se adhieren a las
paredes de los recipientes como si tuvieran pegamento. Pueden sobrevivir sin estar dentro del
agua por un período de hasta 8 meses (CDC, 2016).
26
b) Fase 2: larva
Las larvas que emergen inician un ciclo de cuatro estados larvarios, creciendo a lo largo de
tres mudas desde un largo de 1 mm a los 6,7 mm finales. Estas larvas, que poseen como
caracteres morfológicos típicos (fuertes espículas torácicas laterales quitinizadas, peine de
escamas unilineal en 8º segmento y sifón con forma de oliva corta, que destaca por su color
negro, se alimentan con el zoo y fitoplancton de los recipientes que habitan (Marquetti, 2008).
Figura 4. Larva de Aedes aegypti.
Fuente: (Benítez, 2016).
Las larvas viven en el agua. Salen de los huevos de mosquito. Este proceso tiene lugar cuando
los huevos quedan cubiertos por agua (de la lluvia o de un rociador). Las larvas pueden verse en
el agua. Son sumamente activas, por lo que a veces se las llama “saltarinas”
(CDC, 2016).
Su desarrollo se completa en condiciones favorables de nutrición y con temperaturas de 25 a
29°C, en 5 a 7 días, estando dotadas de movimientos característicos verticales, entre fondo y
superficie, disponiéndose en forma de ese (S) durante los mismos. Son incapaces de resistir
temperaturas inferiores a l0°C, superiores a 44° o 46°C impidiéndole a menos de 13° C su pasaje
a estadio pupal (Salvatella, 1996).
27
c) Fase 3: Pupa
Las larvas mudan al estado de pupa, las cuales no se alimentan y tienden a moverse poco,
presentan un estado de reposo donde se producen importantes modificaciones y cambios
anátomo-fisiológicos que conducirán a la última fase del desarrollo. Reaccionan inmediatamente
a estímulos externos y se mantienen en la superficie del agua debido a su flotabilidad, propiedad
que favorece la emergencia del insecto adulto (Eiman, 2010).
Figura 5. Pupa de Aedes aegypti.
Fuente: (CEIP, 2016).
Las pupas de A. aegypti se distinguen de otros géneros por tener trompetas cortas en
forma cilíndrica, no acampanada distalmente y por tener en el ápice de cada paleta natatoria una
sola seda; se diferencia de otras especies del mismo género por tener sedas robustas y bien
desarrolladas en los vértices subapicales que se localizan en los segmentos abdominales del
segundo al sexto (Nelson M, 1986).
28
d) Fase 4: Adulto
El último estado es el adulto alado. Inmediatamente luego de emerger de la pupa permanecen
en reposo para lograr el endurecimiento del exoesqueleto y de las alas. Dentro de las 24 horas
siguientes, machos y hembras se aparean, generalmente por única vez en el caso de las hembras
y se inicia la etapa reproductora. El apareamiento se realiza por lo general durante el vuelo, una
sola inseminación del macho es suficiente para fecundar todos los huevos que una hembra
produce durante toda su vida (Eiman, 2010).
Figura 6. Adulto de Aedes aegypti.
Fuente: (CEIP, 2016).
Tiende a medir unos 5 milímetros de largo, con detalles morfológicos visibles con lupa de
mano - Cuerpo de color oscuro con manchas blancas en su dorso. Alas oscuras, antenas
filiformes, plumosas en los machos. Patas oscuras con fémures y tibias revestidas de escamas
29
claras. Abdomen agudo con franjas basales y manchas laterales. Machos fitófagos, hembras
hematófagas previas a la oviposición (desove). Vive alrededor de un mes. Se aparean
generalmente en el vuelo. Lugar de reposo son sitios oscuros, preferentemente en el interior de
viviendas (paredes, techos, cortinas y debajo de muebles) (CEIP, 2016).
Las hembras también se alimentan de jugos de plantas. Generalmente, después de cada
alimentación sanguínea se desarrolla un lote de huevos, pero si el mosquito es perturbado antes
de estar completamente lleno de sangre puede alimentarse con sangre más de una vez entre cada
postura. Si una hembra completa su alimentación (2 o 3 mg de sangre) desarrollará y pondrá
aproximadamente 200 huevos, dispersos en distintos lugares. La hembra tiende a depositar sus
huevos en varios lugares y no en un solo lugar. Hay un umbral de distensión del estómago que
estimula el desarrollo de los ovarios, por eso el período entre alimentación sanguínea y postura
es de 3 días en condiciones óptimas de temperatura; la hembra puede alimentarse de sangre
nuevamente el mismo día que pone el huevo (Montero, 2009)
La oviposición generalmente, se produce hacia el final de la tarde, la hembra grávida es
atraída hacia recipientes oscuros o sombreados con paredes duras, sobre las que deposita sus
huevos y prefiere aguas relativamente limpias con poco contenido de materia orgánica. Los
huevos son pegados a las paredes del recipiente en la zona húmeda a pocos mm de la superficie
del agua. La distribución de los huevos en varios recipientes asegura la viabilidad de la especie.
La posición de los huevos a pocos mm de la superficie del agua permite que éstos maduren, y en
la próxima lluvia, al subir el nivel de agua del recipiente, los huevos eclosionan en el momento
de contacto con el líquido (Montero, 2009).
30
5.1.3. Distribución de Aedes aegypti en el mundo
Se distribuye en forma permanente entre los 35° de latitud norte y 35° de latitud sur pero
puede extenderse hasta los 45° norte y hasta los 40° sur, la altitud promedio en donde se
encuentra es por debajo de los 1.200 metros, aunque se ha registrado en alturas de alrededor de
los 2.400 metros sobre el nivel del mar (Eiman, 2010).
Las condiciones climáticas idóneas para el desarrollo y establecimiento de los Aedes son: más
de 500 mm de precipitaciones anuales, más de 60 días de lluvia al año, temperatura media del
mes frío superior a 0ºC, temperatura media del mes cálido superior a 20ºC, temperatura media
anual superior a 11ºC y humedad del 60 - 70%. Por eso son originarios y se establecen en las
zonas tropicales y subtropicales (CEIP, 2016)
Figura 7. Distribución de Aedes aegypti a nivel mundial.
Fuente: (ELife, 2015).
31
5.1.4. Aedes aegypti en Colombia
La distribución de Aedes aegypti en Colombia hasta el año 2015 evidenció su presencia en
municipios por debajo de los 2200 - 2300 metros sobre el nivel del mar, donde viven cerca de 26
millones de personas que se encuentran expuestas a diversas enfermedades, como se puede
apreciar en la figura 8 (Laiton-Donato 2016).
Figura 8. Distribución de Aedes aegypti en Colombia.
Fuente: (Laiton-Donato 2016).
32
La distribución biogeográfica de Aedes aegypti se ha expandido debido al calentamiento
global y a factores socioeconómicos y culturales, los patrones de distribución del mosquito han
cambiado con nuevos registros altitudinales y una extensa distribución en todos los continentes,
específicamente se pensaba que en Colombia la especie no habitaba por encima de los 1.585
msnm, sin embargo, se registró su presencia en 22 municipios por encima de los 1600 msnm y a
2.200 msnm en Málaga (Santander), siendo este último el registro altitudinal más alto para
Suramérica hasta ahora (López et al., 2016).
La presencia de A. aegypti en nuevas altitudes y áreas rurales puede estar relacionada con los
asentamientos humanos en las laderas de la montaña y a los lados de las nuevas vías de acceso
intermunicipales y departamentales, así como el calentamiento global y su impacto en todos los
ecosistemas, incluido el incremento en el rango de distribución (Khormi, 2014).
33
5.1.5. Enfermedades de salud pública causadas por Aedes aegypti
Aedes aegypti es el principal vector de los arbovirus del dengue, la fiebre del zika, la fiebre
amarilla y la fiebre del chikunguña, estas enfermedades son de importancia para la salud pública
porque representan una alta carga de morbilidad y mortalidad para las personas, sus familias y
las comunidades, así como altos costos y sobrecargas de los sistemas de salud de los países
(OPS. OMS, 2018).
A continuación se describen cada una de estas enfermedades:
a. El dengue
El dengue es una enfermedad viral aguda, endemo-epidémica, enfermedad constante en una
población determinada, causada por un arbovirus de la familia Flaviviridae y transmitida por la
picadura de hembras de mosquitos del género Aedes, principalmente el aegypti. El virus posee
cuatro serotipos (DENV1, DENV2, DENV3, DENV4), los serotipos no desencadenan inmunidad
cruzada, lo cual significa que una persona puede infectarse y enfermar hasta cuatro veces.
(Ministerios de Salud, 2012).
Para transmitir la enfermedad es necesario que el mosquito haya picado a una persona
infectada con el virus del dengue durante el período de viremia, que ocurre después de un
período de incubación de aproximadamente 7 días. Para que en un lugar haya transmisión de la
enfermedad tienen que estar presentes de forma simultánea: el virus, el vector y el huésped
34
susceptible. La susceptibilidad es en toda persona que no haya enfermado previamente por el
virus y se traslade a áreas endémicas. (Ministerio de Salud, 2012).
A finales del 2008 fue desarrollada una clasificación del dengue de acuerdo a su severidad:
-Dengue sin signos de alarma: vivir en zonas endémicas del dengue y presentar dos de las
siguientes manifestaciones clínicas: náuseas y vómitos, erupción, dolores articulares, ningún
signo de alarma, serología confirmatoria, y ocurrencia en el mismo lugar y tiempo de otros casos
confirmados.
-Dengue con signos de alarma: presenta las mismas condiciones de la forma anterior y dolor a
la palpación abdominal, sangramiento de mucosas, extravasación sanguínea, sangramiento de
mucosas, letargia y decaimiento.
-Dengue severo: cualquiera de las siguientes manifestaciones: shock o dificultad respiratoria,
sangramiento severo y daño severo de órganos (Ortega et al., 2015).
En el mundo las poblaciones pobres sufren una dimensión desproporcionadamente alta de la
carga económica producida por el dengue. La infección por dengue es alta entre los pobres
debido a que viven en comunidades donde prolifera el vector. Más del 70 % de los países con
enfermedades tropicales desatendidas se incluyen entre los de más bajo ingreso, entre los
factores de riesgo a los que están expuestos las comunidades pobres para adquirir el dengue se
encuentran los desastres naturales, las condiciones de vivienda y saneamiento insalubre, la poca
cantidad y calidad de alimentos y la exclusión social, entre otros (Ortega et al., 2015).
35
b. El zika
El Zika es una enfermedad viral emergente ocasionada por el virus Zika, arbovirus del género
flavivirus (familia Flaviviridae), muy cercano filogenéticamente a virus como el dengue. Solo 1
de cada 4 personas presenta sintomatología, usualmente leve. Sin embargo, desde finales del
2015 en Latinoamérica se empezó a sospechar la posible asociación de este virus con
microcefalia en fetos de mujeres gestantes infectadas por el virus y en algunos pacientes
manifestaciones de síndromes neurológicos (Ministerio de Salud, 2016).
Una de cada cinco personas infectadas con virus Zika desarrolla la enfermedad con
manifestaciones clínicas moderadas. Los síntomas duran de dos a siete días e incluyen fiebre,
conjuntivitis no purulenta, cefalea, mialgias, artralgias, entre otros. Las manifestaciones clínicas
graves son poco frecuentes, hasta el momento no se ha informado sobre ninguna muerte
atribuida a la infección por el virus del Zika (Ministerio de Salud, 2016).
El virus Zika se transmite por la picadura de mosquitos del género Aedes, tanto en un ámbito
urbano (A. aegypti), una vez que el virus ingresa al cuerpo se elimina por el sudor, saliva,
semen, el periodo de incubación es de 3 a 7 días, el virus se trasmite por la picadura del Aedes
aegypti infectado con el virus Zika, se ha descrito trasmisión por la trasfusión de sangre y nuevos
estudios revelan la posible trasmisión sexual (Cabrera et al., 2016).
Para Colombia entre el 2014 y el 2015, en total se reportaron 61.393 casos de Zika, de los
cuales 2.603 fueron confirmados por laboratorio y 58.790 sospechosos por clínicas, se han
36
confirmado 1.186 mujeres embarazadas infectadas con Zika, a las que se suman 10.053 casos
sospechosos, se presentaron 24 casos de microcefalia por diferentes causas y 8 de estos se
relacionan con el virus del Zika. Además, en el país se notificaron 401 casos de síndromes
neurológicos con antecedentes compatibles con infección por Zika (Cabrera et al., 2016).
c. Fiebre amarilla
La fiebre amarilla es una enfermedad hemorrágica vírica transmitida por los mosquitos que es
endémica en las zonas tropicales de África y América del Sur. El vector del virus de la fiebre
amarilla en el ciclo de transmisión urbana de una persona a otra es Aedes aegypti, mientras que
en el ciclo selvático de transmisión de un mono a otro y accidentalmente de un mono a una
persona intervienen distintas especies de mosquitos. No todos los mosquitos contagian la fiebre
amarilla, sólo aquellos que previamente han picado a un individuo enfermo. Se llama fiebre
amarilla, porque a muchos de los que se enferman se les pone la piel de ese color. Alrededor del
90% de los casos anuales de fiebre amarilla, estimados en 200 000, se producen en África, donde
los brotes son frecuentes y la transmisión es tanto de ciclo urbano como selvático. En América
del Sur predomina la fiebre amarilla selvática, como el que está sucediendo en Brasil en este
momento (OPS/OMS en Uruguay, s.f).
El periodo de incubación es de 3 a 6 días. Muchos casos son asintomáticos, pero cuando hay
síntomas, los más frecuentes son fiebre, dolores musculares, sobre todo de espalda, cefaleas,
pérdida de apetito y náuseas o vómitos. En la mayoría de los casos los síntomas desaparecen en 3
o 4 días. Sin embargo, un pequeño porcentaje de pacientes entran a las 24 horas de la remisión
37
inicial en una segunda fase, más tóxica. Vuelve la fiebre elevada y se ven afectados varios
órganos, generalmente el hígado y los riñones. En esta fase son frecuentes la ictericia (color
amarillento de la piel y los ojos, hecho que ha dado nombre a la enfermedad), el color oscuro de
la orina y el dolor abdominal con vómitos. Puede haber hemorragias orales, nasales, oculares o
gástricas. La mitad de los pacientes que entran en la fase tóxica mueren en un plazo de 7 a 10. El
diagnóstico de la fiebre amarilla es difícil, sobre todo en las fases tempranas. En los casos más
graves puede confundirse con el paludismo grave, la leptospirosis, las hepatitis víricas
(especialmente las formas fulminantes), otras fiebres hemorrágicas, otras infecciones por
flavivirus (por ejemplo, el dengue hemorrágico) y las intoxicaciones. En las fases iniciales de la
enfermedad a veces se puede detectar el virus en la sangre mediante la reacción en cadena de la
polimerasa con retrotranscriptasa. En fases más avanzadas hay que recurrir a la detección de
anticuerpos mediante pruebas de ELISA o de neutralización por reducción de placa (OMS,
2018).
El virus de la fiebre amarilla es un arbovirus del género Flavivirus transmitido por mosquitos
de los géneros Aedes y Haemogogus. Las diferentes especies de mosquitos viven en distintos
hábitats. Algunos se crían cerca de las viviendas (domésticos), otros en el bosque (salvajes), y
algunos en ambos hábitats (semidomésticos) (OMS, 2018).
Hay tres tipos de ciclos de transmisión:
● Fiebre amarilla selvática: En las selvas tropicales lluviosas, los monos, que son el
principal reservorio del virus, son picados por mosquitos salvajes que transmiten el virus
38
a otros monos. Las personas que se encuentren en la selva pueden recibir picaduras de
mosquitos infectados y contraer la enfermedad.
● Fiebre amarilla intermedia: En este tipo de transmisión, los mosquitos semidomésticos
(que se crían en la selva y cerca de las casas) infectan tanto a los monos como al hombre.
El aumento de los contactos entre las personas y los mosquitos infectados aumenta la
transmisión, y puede haber brotes simultáneamente en muchos pueblos distintos de una
zona. Este es el tipo de brote más frecuente en África.
● Fiebre amarilla urbana: Las grandes epidemias se producen cuando las personas
infectadas introducen el virus en zonas muy pobladas, con gran densidad de mosquitos y
donde la mayoría de la población tiene escasa o nula inmunidad por falta de vacunación.
En estas condiciones, los mosquitos infectados transmiten el virus de una persona a otra.
Son departamentos de alto riesgo para fiebre amarilla: Amazonas, Arauca, Caquetá, Casanare,
Cesar, Guainía, Guaviare, La Guajira, Meta, Putumayo y Vichada. El departamento del Vaupés
por presentar las mismas condiciones ecológicas de los departamentos vecinos, se incluye en este
grupo, aunque en los antecedentes históricos no se reportan casos de fiebre amarilla, ni evidencia
de circulación viral (MinSalud, 2018).
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d. Fiebre del Chikunguña
La fiebre del chikunguña, tiene como agente causal un virus de ARN del género Alphavirus
de la familia Tagaviridae, es una enfermedad endémica en países del sudeste de Asia, África y
Oceanía, emergente para la región de las Américas, reportándose transmisión en al menos 16
países de esta zona geográfica (Martínez et al., 2015).
El cuadro clínico general se denomina fiebre Chikungunya, pueden llegar a ser asintomáticos
del 3 al 25 %, de las personas infectadas y la enfermedad se desarrolla de forma aguda o
subaguda y crónica sin tener ninguna preferencia por sexo ni por edad. Los recién nacidos, las
personas mayores de 65 años y las que presentan algunas enfermedades crónicas como
comorbilidades son las más susceptibles a desarrollar la infección grave. La presentación clínica
se caracteriza por la presencia de 2 fases: aguda y crónica. La fase aguda dura generalmente 10
días con síntomas como fiebre, artralgia y alteraciones en la piel, la fase aguda se define por la
persistencia de estos síntomas durante más de 3 meses y genera un importante deterioro en la
calidad de vida del paciente (Martínez et al., 2015).
La hembra del mosquito A. aegypti es transmisora después de un período promedio de
incubación extrínseca de 10 días. En los humanos picados por un mosquito infectado, los
síntomas de enfermedad aparecen generalmente después de un período de incubación intrínseca
de tres a siete días (rango: 1−12 días). Aedes es un vector eficiente dada la alta susceptibilidad al
virus, alimentación preferencial con sangre humana, alimentación diurna, picadura casi
imperceptible y capacidad de picar varias personas en un periodo corto (Ministerios de Salud,
2014).
40
5.1.6. Prevención y control
La prevención y el control se basan en gran medida en la reducción del número de depósitos
de agua, naturales y artificiales que puedan servir de criadero de los mosquitos, la vigilancia
epidemiológica y entomológica, refuerzo de las campañas para la educación de la comunidad en
el que se da una influencia social que proporciona conocimientos, forja actitudes y promueve
prácticas dirigidas a mejorar la salud de la población, mejoras en los sistemas de saneamiento
(Ochoa et al., 2015).
Las estrategias de eliminación del mosquito Aedes aegypti van encaminadas tanto al control
del mosquito adulto como de sus formas larvales, por lo que generalmente se da lugar a
fumigaciones y usos de larvicidas, se resalta entonces que el control del vector es la principal
medida para evitar la transmisión del dengue, el zika, la fiebre amarillas y la fiebre del
chikunguña entre otras enfermedades de interés en salud pública (Bisset et al., 2011). Sabiendo
esto, los mecanismos de control se dividen en los siguientes:
Control Químico: El control químico consiste en la utilización de plaguicidas de uso en salud
pública contra las larvas y mosquitos para la reducción de la densidad del vector de interés en
sus estadios larvarios o inmaduros y de imagos o adultos, utilizando sustancias tóxicas, es
importante resaltar que se debe hacer un uso juicioso y racional de esta medida (Min Protección
Social/INS/OPS, s.f).
41
Los principales métodos de aplicación de insecticidas de uso en salud pública para el control
del Aedes aegypti son el focal, tratamiento perifocal y la aplicación espacial, que se explican
detalladamente a continuación:
- Control focal: Este realizan en las formas inmaduras de Aedes aegypti, es decir, las larvas
y es aplicado en depósitos de agua o sumideros de aguas lluvia que no puedan ser
eliminados controlados con otro método (Min Protección Social/INS/OPS, s.f).
- Control perifocal: Consiste en el tratamiento de todos los recipiente infectados por Aedes
aegypti, ya sea que contengan agua o no, rociando sus paredes por dentro y por fuera, la
fumigación se extiende para cubrir cualquier pared dentro de un radio de 60 cm. del
recipiente (Min Protección Social/INS/OPS, s.f).
- Control Espacial: Es un tratamiento que se realiza en el aire con el fin de reducir
rápidamente la población de Aedes aegypti, provocando la muerte inmediata de los
insectos que están volando irrumpiendo con una nube de gotas de insecticida (Min
Protección Social/INS/OPS, s.f).
Control Físico: El control de recipientes artificiales como envases desechables, llantas y barriles
donde se cría el mosquito que tienen que ver principalmente con 2 áreas específicas: agua y
residuos sólidos, cuando el suministro de agua potable no existe, es irregular o de baja calidad,
es común el almacenamiento de agua en tanques, barriles y otros recipientes, y estos pueden
producir grandes cantidades de mosquitos. Cuando la recolección de basura es irregular o de baja
calidad, la acumulación de materiales inservibles en los patios como latas, botellas y llantas es
más frecuente y con iguales consecuencias, mayor producción de mosquitos, lo que desemboca
en la toma de medidas en las acciones de saneamiento ambiental (Rodríguez, 2002).
42
Control Biológico: El control biológico se basa en la introducción de organismos vivos que se
alimentan, compiten, eliminan y parasitan larvas del Aedes aegypti en los depósitos de agua
limpia. Solo se puede utilizar contra las formas inmaduras del vector, y su principal ventaja es
que evita la contaminación química del ambiente (Min Protección Social/INS/OPS, s.f).
El control biológico es definido como el control de la población objetivo por el uso de
enemigos naturales como depredadores, parásitos, patógenos, competidores o toxinas de
microorganismos o plantas (Woodring and Davidson, 1996).
Las distintas propiedades de las plantas y sus diferentes formas de utilización, nos ofrecen un
amplio espectro de posibilidades para el control de numerosos organismos, los extractos
vegetales están constituidos por un conjunto de principios activos, con características insecticidas
o repelentes, químicamente distintos entre sí, cuyas proporciones son variables. Esto hace que la
presión de selección sobre los organismos a controlar no sea siempre la misma, disminuyendo
así, las probabilidades de desarrollar resistencia, lo que representa una gran ventaja en su
aplicación (Millán, 2008).
Tal como lo afirma Montesino et al (2009) las plantas son consideradas las fuentes más
importantes de compuestos químicos y durante millones de años de evolución han desarrollado
mecanismos defensivos para contrarrestar el ataque de los insectos , el interés de investigar el
potencial de los productos botánicos para controlar plagas es razonable, pues en el mercado
existen productos como los piretroides sintéticos (Decís), que originalmente fueron elaborados a
partir de plantas como Chrysanthemum cinerariaefolium (piretro), el Margosan, Azatin y otros a
base de Azadirachta indica (Neem), (Barthel, 1973).
43
5.1.7. Albahaca: Ocimum basilicum
La albahaca (Ocimum basilicum L.) es una planta aromática y medicinal, herbácea, anual, de
tallos erectos y ramificados, frondosa, que alcanza de 30 a 50 cm de altura, perteneciente a la
familia Lamiaceae (ver la taxonomía completa en la tabla 2). Las hojas de 2 a 5 cm, suaves,
oblongas, opuestas, pecioladas, aovadas, lanceoladas y ligeramente dentadas. Las flores son
blancas, dispuestas en espigas alargadas, asilares, en la parte superior del tallo o en los extremos
de las ramas (Vega et al., s.f).
Es una hierba anual, de 20 a 90 cm de altura con o sin pelos y cuyo tallo es cuadrado,
generalmente de color verde o purpúreo. Las hojas son más largas que anchas o en ocasiones la
punta más ancha que la base, también de color verde y a menudo purpúreas; tiene las flores
reunidas en una espiga en la punta de las ramas, de color blanco tendiendo a púrpura. Sus frutos
son como pequeñas nueces. Es originaria de África, Asia e Islas del Pacífico. Se localiza en áreas
con climas cálido, semicálido, semiseco, seco, muy seco y templado, entre el nivel del mar y los
2300 m. Es cultivada en huertos familiares y está asociada a bosques tropicales caducifolio,
subperennifolio y perennifolio, matorral xerófilo, pastizal y bosques de encino y de pino
(BDMTM, 2009).
Requiere suelos medianamente ricos, con buen drenaje y ligeramente secos, ya que es poco
exigente al agua. Se desarrolla bien a pleno sol, aunque tolera la sombra parcial. Se puede
cultivar en huertos o parcelas familiares y también sobre macetas de barro u otros recipientes en
patios, balcones y azoteas. No deben regarse las plantas y después exponerlas al sol porque
puede producirse lo que se llama manchas de agua en sus hojas (ACTAF, 2008)
44
Tabla 2. Taxonomía Ocimum basilicum
Taxonomía Ocimum basilicum
Reino Plantae
Phylum Magnoliophyta
Clase Magnoliopsida
Subclase Asteridae
Orden Lamiales
Familia Lamiaceae
Subfamilia Nepetoideae
Tribu Ocimeae
Género Ocimum
Especie Ocimum basilicum L.
Fuente: (Universidad Nacional, 2014).
Figura 9. Ocimum basilicum L.
Fuente: (Uniandes, 2015).
45
5.1.8. Propiedades
● Reduce la inflamación.
● Acelera la recuperación de los resfriados.
● Evita la debilidad muscular.
● Repele los mosquitos.
● Esta planta medicinal y aromática tiene propiedades antiespasmódicas, antibacterianas,
antiinflamatorias, estimulantes y sedantes (Ecoagricultor,2013)
● Posee propiedades medicinales como estimulante, estomacal y antiespasmódica, se utiliza
en terapias aromáticas y en la preparación de cosméticos.
● También es una magnífica planta acompañante en el control biológico de los insectos de
los huertos, por ejemplo, intercalada con tomates, ajíes y otras hortalizas (ACTAF, 2008).
5.1.9. Aceites esenciales
Los aceites esenciales son sustancias de origen vegetal cuyas mezclas de metabolitos
secundarios volátiles, insolubles en agua, les confieren características particulares según sus
diferentes proporciones. Estos aceites se originan en los tejidos secretores de las plantas y, por lo
general, son líquidos a temperatura ambiente, más ligeros que el agua, de olor fuerte y penetrante
que recuerda su planta de origen, e incoloros o de color amarillo traslúcido
(Andrade et al., 2017).
Su función es variada en las plantas: son agentes de polinización y sirven de reserva y de
protección, ya que defienden a la planta de otras plantas, de algunos insectos y de
microorganismos. Los aceites esenciales se clasifican con base en diferentes criterios: su
46
consistencia, su origen y la composición química de sus componentes mayoritarios (Andrade et
al., 2017).
La actividad larvicida de los aceites esenciales y sus componentes generalmente se evalúan
con el método propuesto por la OMS en el 2005 para estandarizar los procedimientos de
evaluación de la actividad larvicida en el laboratorio y en campo. (Andrade et al., 2017).
Es más apropiado clasificar el aceite esencial de albahaca por su composición química que
por su origen botánico, criterio que perdura internacionalmente hasta nuestros días; definiéndose
cuatro grandes grupos (Vega et al., s.f):
● Grupo I. Tipo Europeo. Rico en Metil chavicol o estragol y Linalol; sin alcanfor.
Representa el aceite de mejor calidad por su fino olor.
● Grupo II. Tipo Reunión. Rico Metil chavicol o estragol y Alcanfor sin Linalol.
● Grupo III. Tipo Cinamato de Metilo. Rico en Metil chavicol o estragol, Linalol y
Cinamato de Metilo.
● Grupo IV. Tipo Eugenol. Rico en Eugenol
El aceite esencial de Ocimum basilicum es de color amarillo, con olor penetrante, a especias,
refrescante y ligeramente amargo. Sus principios activos son el Metilchavicol o Estragol: 65-
85%, Linalol: 1-25% y otros activos como cineol, eugenol (20%), acetato de linalilo.
Saponósidos. Flavonoides: quercetrósido, kenferol , esculósido. Ácido caféico (Lozano, 2011).
47
Su principal principio activo, el Estragol, (1-alil-4-metoxibenceno), es un potente carcinógeno
y genotóxico natural que en altas concentraciones puede ser neurotóxico; dicha toxicidad es un
derivado de los alquil bencenos. Concretamente, este metabolito es el hidroxiestragol, que a su
vez se metaboliza en sulfoxiestragol y en hidroxiestragol-2′,3′-óxido. Estos compuestos, a dosis
elevadas, pueden inducir mutaciones a nivel del ADN y, eventualmente, ser cancerígenos
(Mestres, s.f).
5.2. Antecedentes
Sabiendo que enfermedades tales como el dengue, la fiebre del zika, la fiebre amarilla y el
chikunguña son prevenibles mediante el control de Aedes aegypti, se ha tratado de dar una
respuesta mundial para el control de vectores (OMS, 2017).
En este mismo sentido Schaper et al (1998) afirman que la medida más efectiva contra el
dengue es el control de su insecto vector Aedes aegypti. Sin embargo Schaper et al. (1998)
resaltan que para alcanzar tal propósito la acción más común es el uso de insecticidas lo cual
resulta controversial porque es caro, solo afecta a los adultos, induce resistencia y contamina el
ambiente. La mayoría de programas de control de Aedes aegypti en el mundo utilizan piretroides
para el control de mosquitos adultos a través de la impregnación de materiales, como cortinas, o
las tapas de los tanques, en algunos casos además de usar piretroides como adulticidas en
tratamiento espacial o rociamiento intradomiciliario, también ha utilizado el organofosforado
clorpirifos, principalmente en el caso de epidemias lo que ha dado lugar a la resistencia de Aedes
aegypti en diferentes países de América Latina y el Caribe (Rodríguez et al., 2007).
48
Lo anterior hace necesario que haya acceso a una mayor variedad de insecticidas pues según
el estudio de Rawlins (1998) las poblaciones de mosquitos de Aedes aegypti no se pueden
controlar aun cuando presentan poca resistencia a los insecticidas y teniendo en cuenta que estos
insecticidas son a base de productos químicos que además de ser tóxicos para el medio ambiente
resultan costosos y para sociedades relativamente pobres, la elección de los métodos de control
de vectores está limitada por la disponibilidad de fondos, es por esto que las técnicas de control
biológico de Aedes aegypti se están volviendo cada vez más populares (Rawlins, 1998), pues
representan un escenario contrario al anteriormente mencionado.
Los insecticidas botánicos son sustancias que se derivan de plantas los cuales se caracterizan
por tener una toxicidad muy baja para los humanos y otros vertebrados, descomponerse en pocas
horas después de aplicados o ser específicos para el vector que deseamos controlar, por estas
razones son considerados ambientalmente benignos, su efecto en la vida silvestre y el medio
ambiente es menos perjudicial que el de los insecticidas convencionales (Farrill, 2008).
Los aceites esenciales forman las esencias odoríferas de un gran número de especies de
plantas y árboles, se extraen de flores, frutos, raíces, hojas, semillas entre otros y se caracterizan
por poseer acción insecticida (Farrill, 2008).
En este sentido se toma como referencia un estudio realizado por Amer y Mehlhorn (2006) en
el que evaluaron el efecto larvicida de los aceites esenciales de Ocimum bacilicum, Cymbopogon
winterianus, Lavandula angustifolia, entre otras, contra las larvas de tercer estadio de Aedes,
Anopheles y Culex, en donde, los autores aseguran que los mosquitos en estado larval son
49
objetivos atractivos porque estos se reproducen en el agua y, por lo tanto, es fácil tratarlos en este
hábitat, los resultados obtenidos en el estudio demostraron la acción larvicida de Ocimum
basilicum al alcanzar una mortalidad de 86.7% para un tiempo de 24 horas y concentración de 50
ppm en bioensayos con grupos de 10 larvas, para los mismo bioensayos y tiempos C.
winterianus, L. angustifolia alcanzaron una mortalidad de 63.3% y 60% respectivamente.
La investigación desarrollada por Manzoor et al (2013) en The Journal of Animal & Plant
Sciences LARVICIDAL ACTIVITY OF ESSENTIAL OILS AGAINST Aedes aegypti and Culex
quinquefasciatus LARVAE (DIPTERA: CULICIDAE) donde se utilizaron aceites esenciales
como A. calamus, M. arvensis, O. basilicum, S. lappa, C. citraes a concentraciones de 500, 250,
125, 62.5, 31.25, 15.62, 7.81, 3.90, 1.90, 0.97 ppm con tres réplicas y con 2 ml de acetona al
100% por 24 horas; cuyos resultados arrojaron que a concentración de 250 ppm se logra el 50%
de muertes y con 1000 ppm se tiene el 100% de efectividad.
El aceite esencial de O. basilicum y su mayor constituyente, el metilchavicol son más
efectivos comparado con O. sanctum. Entonces los aceites esenciales y sus principales
componentes de O. basilicum fueron más tóxicos para Un. Stephensi, seguido por Ae. Aegypti
(L.) y Cx. quinquefasciatus. En la preparación del extracto, el aceite esencial fue separado del
agua y secado sobre sulfato de sodio anhidro y se almacena a 4 ° C para una mayor
experimentación.
50
Por último en la Universidad Nacional de Trujillo, Perú, Torres y Roldán (2015) evaluaron el
efecto insecticida del extracto alcohólico de hojas Ocimum basilicum a concentraciones de 1.5,
2.0 y 4.5% en larvas de cuarto estadio de dos cepas de Aedes aegypti, una endógena de Sullana,
Perú y una de referencia (Rockefeller), la concentración letal media (CL50) y la concentración
letal 90 (CL90) encontradas en el trabajo fueron CL50 de 2.900% y CL90 de 4.783% para la
cepa Sullana y un CL50 de 3.158% y CL90 de 5.924% para la cepa Rockefeller, lo que
demuestra el efecto larvicida del extracto de O. basilicum, en donde, las autoras afirman que esto
se debe a que la planta presenta alcaloides, glicósidos, flavonoides, fenoles, saponinos,
triterpenoides ,proteínas , resinas, esteroides y taninos los cuales se reconocen por tener
propiedades larvicidas.
Considerando los anteriores estudios que demuestran la eficacia del extracto etanolico de
Ocimum basilicum como larvicida para condiciones particulares, el presente trabajo tiene como
objetivo evaluar tal efecto siguiendo los lineamientos de la OMS (2015) sobre larvas de Aedes
aegypti de cuarto estadio, donde se considera la naturaleza orgánica del extracto, lo que implica
el uso de acetona en las diluciones para garantizar que el extracto sea miscible con el agua,
además de esto se contempla el uso del material vegetal de toda la planta de Albahaca (O.
basilicum), pues los aceites esenciales son sintetizados y almacenados en los tricomas
glandulares especializados que posee la planta, ubicados en diversos órganos (flores, hojas,
brotes, tallos y semillas), así mismo se tiene en cuenta que los aceites esenciales de O. basilicum
han mostrado variabilidad en su composición, con respecto a los diferentes factores
agronómicos, ambientales, genéticos, técnicas de extracción, variedades y al estado nutricional
de la planta, entre otros (Ramírez et al., 2013).
51
6. Metodología
El proyecto se llevó a cabo en condiciones de laboratorio acorde a los lineamientos de la
Organización Mundial de la Salud; Guidelines for laboratory and field testing of mosquito
larvicides (WHO, 2005) y para evaluar la eficacia del extracto etanólico se realizó el siguiente
procedimiento:
6.1. Obtención de Larvas
La evaluación del efecto larvicida del Ocimum basilicum, se realiza obteniendo las larvas de
Aedes aegypti cepa Rockefeller en el laboratorio de Zoonosis de la Facultad del Medio Ambiente
y Recursos Naturales de la Universidad Distrital Francisco José de Caldas. Para la crianza de las
larvas, se introdujeron los huevos en recipientes de polietileno en agua a una temperatura de
27°C – 30 °C (Figura 10), por el tiempo necesario hasta alcanzar el estadio 4 de desarrollo (5 – 7
días). Se alimentaron con comida para peces ya que contiene lo necesario para su desarrollo.
(Autoras).
Figura 10. Jaula de cria Aedes aegypti.
Fuente: (Autoras).
52
6.2. Obtención del Extracto
En la preparación del extracto se realizó con una cantidad aproximada de Ocimum basilicum
(Albahaca) entre 500 y 1000 gramos, adquirida en la Plaza de Mercado de Paloquemao, está
debió pasar por un proceso de eliminación de humedad dentro de la cámara de secado que se
encuentra en el laboratorio de Zoonosis de la Facultad del Medio Ambiente y Recursos Naturales
de la Universidad Distrital Francisco José de Caldas. El material (tallos, hojas y flores) se
cortaron en pedazos pequeños y se llevaron al secador durante dos días para retirar la humedad
en su totalidad; luego que el material estuvo listo se pesaron 500 gramos de material seco;
después con la ayuda del papel de filtro número 1, se formaron cartuchos de tamaño adecuado
para ser puestos en el extractor Soxlhet, con peso promedio de 50 gramos (Figura 11), A medida
que va aumentando la temperatura el solvente (etanol al 96%) a partir de la ebullición, comienza
a evaporarse y luego que se calientan las paredes del equipo, se empieza a condensar en el
refrigerante y a caer en forma de gotas sobre el cartucho, mientras esto sucede el cartucho
empieza a escurrir por la parte inferior hasta llegar al nivel de la bajada del sifón donde se extrae
hasta el balón inferior, a este paso se le llama sifonaje; a cada bolsa de material seco se le
realizaron entre 5-6 sifonajes; para obtener de manera efectiva sus aceites esenciales. El
resultado del proceso de extracción se concentró en un Rotoevaporador IKA RV10 (Figura 12),
con baño maría a 45°C, velocidad de rotación de 100 rpm y presión reducida a 80 milibares para
evaporar y destilar el etanol y así de esta manera obtener el extracto o solución madre
(EPA,1996). El extracto obtenido se almacenó en un frasco de vidrio color ámbar a temperatura
de refrigeración (4°C a 6 °C) para evitar cambios en su composición por alteración de sus
principios activos debido a la influencia de la luz o choques térmicos hasta el momento de su
utilización.
53
Figura 11. Extractor Soxlhet
Fuente: (Autoras).
Figura 12. Rotoevaporador IKA RV10
Fuente: (Autoras).
54
6.3. Preparación de las Diluciones
Para la preparación de 1100 ppm, se tomó un balón aforado de 1L y se introdujeron 1,1 ml del
extracto (Figura 13), luego se le agregó 0.1% (1 ml) de acetona como emulsificante que
permitirá una mejor disolución del extracto en agua y se llenó el balón con agua declorinada,
hasta el aforo correspondiente a 1 L. Para la preparación de 1200 ppm, se introdujeron 1,2 ml del
extracto en el balón aforado y se sigue el procedimiento anterior; así se continuarán haciendo las
demás diluciones, hasta 1500 ppm, teniendo en cuenta que para la de 1300 ppm se introducirán
1,3 ml en el balón, para la de 1400 ppm 1,4 ml y finalmente para la de 1500 ppm 1,5 ml.
(Autoras)
Figura 13. Extracto de Albahaca
Fuente: (Autoras).
55
6.4. Bioensayos
Para los bioensayos se sirvió el extracto diluido, en vasos de polipropileno con capacidad de
200 ml; se utilizaron 525 larvas de IV estadio de Aedes aegypti, en el cual se distribuyeron, 25
larvas para cada una de las repeticiones de los 5 tratamientos experimentales y el grupo testigo.
Para el grupo testigo, sólo se adiciono 0.1% de acetona en el balón aforado y se completó el
volumen con agua hasta 1 litro. (Figura 14).
Figura 14. Montaje de Bioensayos
Fuente: (Autoras).
56
6.5. Lecturas de Mortalidad
Luego de realizados los montajes, se tomaron lecturas de mortalidad a las 0, 2, 12, 24, 36 y
48 horas, considerando como muerta una larva cuando no presenta movimientos natatorios, se
encuentran en el fondo del recipiente, no reacciona al ser tocada con una aguja de punta roma y
aquellas que se muestran moribundas.
6.6. Análisis
Para lograr una evaluación estadística completa, fue necesario obtener datos como (tiempo,
concentraciones y mortalidad) durante cada bioensayo; posteriormente se tabularon los datos en
Excel y se utilizó la fórmula de Abbott para corregir el porcentaje de mortalidad, además de
encontrar las dosis letales efectivas en los ensayos biológicos (CL 50 - CL 90) y luego de
tenerlos organizados se utilizó el software estadístico R versión 3.5.1 para el análisis estadístico
ANOVA de un factor.
7. Resultados
Al terminar los bioensayos planteados para el presente proyecto, se organizaron los resultados
recopilados como concentración, tiempos de exposición y mortalidad, a partir de la utilización
del extracto Ocimum basilicum (Albahaca) sobre larvas de Aedes aegypti en estadio IV, con el
fin de analizar los porcentajes de mortalidad sobre los individuos tratados en diferentes
concentraciones. A éstos resultados se les aplicó la fórmula de Abbott para ajustarlos corrigiendo
las mortalidades de acuerdo a las muertes naturales del grupo testigo en una tabla de Excel.
57
Tabla 3: Porcentajes de mortalidad corregidos con la fórmula de Abbott.
Tratamientos % de Mortalidad corregido con Abbott
0 Horas 2 horas 12 Horas 24 Horas 36 Horas 48 Horas
%
Promedio
%
Promedio
%
Promedio
%
Promedio
%
Promedio
%
Promedio
Testigo 0 0 0 0 0 4
1100 ppm 0 0 0 0 51 53.12
1200 ppm 0 0 0 0 54 59.37
1300 ppm 0 0 0 58 71 71.87
1400 ppm 0 0 0 60 82 90.62
1500 ppm 0 0 73 84 91 95.83
Fuente: Autoras.
% M. tratamiento: Mortalidad acumulada del tratamiento
% M. testigo: Mortalidad acumulada del testigo
% M. C: Mortalidad corregida en porcentaje.
58
7.1. Eficiencia del extracto natural de Ocimum basilicum (Albahaca) como
larvicida a las diferentes concentraciones experimentales
Se midió la eficiencia a través de los bioensayos experimentales como larvicida del
extracto de Ocimum basilicum en las concentraciones de 1100, 1200, 1300, 1400 y 1500 ppm en
un tiempo de 48 horas, evidenciando los siguientes resultados:
Tratamiento 1 (1100 ppm):
Se evidencia efectividad a partir de las 36 horas de exposición al tratamiento con una
mortalidad del 51%, superando la eficiencia superior al 50% así indicando que a partir de esta
concentración se tuvieron resultados satisfactorios y al finalizar el bioensayo a las 48 horas se
tuvo una mortalidad del 53,12% .
Tratamiento 2 (1200 ppm):
Para las 36 horas, el tratamiento tuvo un porcentaje de mortalidad del 54% mostrando mayor
efectividad que en el tratamiento 1 (1100 ppm) y para las 48 horas del bioensayo se evidencia
nuevamente la eficiencia teniendo una mortalidad del 59.37%.
Tratamiento 3 (1300 ppm):
El tratamiento tuvo un porcentaje de mortalidad del 58% a las 12 horas demostrando mejores
resultados que los dos tratamientos anteriores en cuanto al tiempo de exposición y así
paulatinamente hasta el 71.87 % a las 48 horas.
59
Tratamiento 4 (1400 ppm):
A las 24 horas aumentó el porcentaje de mortalidad llegando el 60% de eficiencia hasta llegar
al porcentaje de mortalidad del 90.62% al cabo de las 48 horas, este bioensayo demuestra la
eficiencia del extracto ya superando el 90%.
Tratamiento 5 (1500 ppm):
Se obtienen resultados satisfactorios a las 12 horas de exposición al tratamiento logrando un
porcentaje de mortalidad del 73%; al finalizar el bioensayo a las 48 horas alcanzando una
mortalidad del 95.83% siendo este un resultado satisfactorio para la investigación ya que supera
el 95% de eficiencia.
Bioensayos en el grupo testigo
Se tuvo una mortalidad acumulada del 4% que se considera que pudo haber sido por causas
naturales y que por su bajo porcentaje no afecta a los resultados obtenidos.
60
7.2. Análisis de mortalidades en los distintos tratamientos experimentales en
relación con el tiempo de exposición.
Tratamiento 1 (1100 ppm):
En este bioensayo se registró a las 36 horas la primera mortalidad llegando a un porcentaje de
51% donde se empiezan a ver indicios de toxicidad en los individuos al superar el 50% de
mortandad y finalizando el tratamiento a las 48 horas hay un 53.12% de mortalidad.
Tratamiento 2 (1200 ppm):
En el segundo bioensayo al igual que el primero, también se da la primera muerte a las 36
horas representando el 54 % que a diferencia del primer bioensayo al mismo tiempo, el
porcentaje fue mayor y finalmente a las 48 horas llega al 59.37% de mortandad, mostrando
buenos resultados.
Tratamiento 3 (1300 ppm):
En el tercer bioensayo se registra el porcentaje de letalidad a las 24 horas con un porcentaje
de 58% mejorando el tiempo de efectividad, luego a las 36 horas el porcentaje aumenta a 71% de
muertes de los individuos tratados y a las 48 horas llega a 71.87%.
Tratamiento 4 (1400 ppm):
En el cuarto bioensayo al igual que el tercer tratamiento la primera mortalidad se da a las 24
horas con la diferencia de que el porcentaje de mortandad aumenta al 60%, luego a las 36 horas
llega al 82% donde se evidencia resultados satisfactorios y al finalizar llegó al 90.62%
61
demostrando la relación entre el aumento de concentración con el tiempo de exposición y la
cantidad de individuos muertos
Tratamiento 5 (1500 ppm):
En el quinto bioensayo se evidencia una alta toxicidad y efectividad en relación al tiempo y
concentración registrando la primera muerte a las 12 horas con un porcentaje de 73%, luego a las
24 horas aumenta considerablemente al 84% de mortandad, luego a las 36 horas alcanzó al 91%
demostrando ser un buen resultado y finalizando a las 48 horas llega al 95.83% superando el
umbral del 95% para que la investigación sea satisfactoria
7.3. Análisis de regresión logarítmica, para el cálculo de las concentraciones
letales CL 50 y CL 90.
La curva logarítmica es también una recta pero en lugar de referirse a las variables originales
X e Y, está referida a logX y a Y, siendo logX la variable independiente o regresora y Y la
variable dependiente, el cambio en las variables originales conlleva a la transformación adecuada
de los datos de partida (Regresión y correlación, 2014), permitiéndonos así graficar el aumento
progresivo de las mortalidades para cada una de las concentraciones.
La presente gráfica fue realizada mediante la aplicación Microsoft Excel que nos permitió
realizar la curva logarítmica, esta nos muestra un crecimiento gradual de las mortalidades que es
directamente proporcional al aumento de las concentraciones en los tratamientos.
62
Figura 15. Gráfica Curva de regresión logarítmica para porcentajes de mortalidad y
concentraciones.
Fuente: Autoras.
En la parte inferior derecha de la gráfica se encuentra la ecuación de la línea de tendencia
logarítmica, en la cual la variable independiente x se reemplazó en un rango de las
concentraciones de 1050 ppm a 1600 ppm, en donde, la ecuación fue aplicada desde la
concentración mínima (1050 ppm) aumentando de a 5 ppm hasta llegar a la concentración
máxima (1600 ppm), tal como se puede observar en el Anexo 2, esto con el propósito de
calcular un aproximado en las dosis letales CL 50 y CL 90, cabe resaltar que se toma como
concentración de punto de inicio 1050 ppm, debido a que la concentración mínima usada en los
bioensayos (1100ppm) arrojó resultados por encima del 50% de la mortalidad.
Se determinó que el aproximado en la dosis letal CL 50 se encuentra en el rango de 1085 ppm
y 1090 ppm obteniendo como resultados de mortalidad 49.3% y 50.1% respectivamente, por otro
63
lado, para la dosis letal CL 90 encontramos que el rango de concentración se encuentra entre
1435 ppm y 1440 ppm, obteniendo resultados de mortalidad 89.8% y 90.3% respectivamente.
Dada la posibilidad de despejar la ecuación de la línea de tendencia logarítmica que nos
permite hallar la dosis de concentración exacta CL 50 y CL 90, a continuación se presenta la
respectiva ecuación despejada y los resultados obtenidos.
● Ecuación de la línea de tendencia logarítmica → y = 144.06ln(x) - 956.84
Despejando x →
● Cálculo de CL 50 →
Donde y= 50
● Cálculo de CL 90 →
Donde y= 0.90
Dónde; CL 50 = 1084 ppm y CL 90 = 1431 ppm.
64
7.4. Análisis de tiempos letales TL 50 y TL 90.
Figura 16. Gráfica Porcentajes de mortalidad corregidos con Abbott en relación con el tiempo.
Fuente: Autoras.
De acuerdo a la relación entre el porcentaje de mortalidad corregida y el tiempo medido en
horas, con la figura 16 se puede analizar que todos los bioensayos superaron el 50% de
mortalidad total acumulada, demostrando que desde 1100 ppm se obtienen resultados favorables.
Los tiempos letales TL 50 son alcanzados en 1100 ppm a las 35 horas, en 1200 ppm a las 33
horas, en 1300 ppm a las 22 horas, en 1400 ppm al mismo tiempo que el bioensayo anterior y en
1500 ppm a las 8 horas de iniciado el tratamiento.
El tiempo letal TL 90 fue alcanzado en 1400 ppm a las 48 horas y en 1500 ppm a las 37 horas de
iniciado el tratamiento.
65
7.5. Análisis Estadístico ANOVA de un factor
Para realizar el análisis ANOVA de un factor se utilizó el software estadístico R versión
3.5.1 para comparar una hipótesis nula (H0) y una hipótesis alternativa (H1), con el fin de
demostrar si se presentó diferencias significativas sobre los promedios de mortalidad en la
investigación y así mismo permitirá rechazar una u otra de las siguientes hipótesis:
● La Hipótesis nula (H0) observa que los promedios de mortalidad sobre los tratamientos
realizados con Ocimum basilicum (Albahaca) no difieren significativamente.
● La Hipótesis alternativa (H1) es válida cuando por lo menos un par de los promedios de
los tratamientos tienen diferencias significativas, es decir, se observa un efecto
significativo del larvicida para al menos una de las concentraciones empleadas.
Entonces si se rechazara la hipótesis alternativa (H1) la concentración de los tratamientos no
tiene alguna significancia en los resultados de las mortalidades, y en caso que se rechazara la
hipótesis nula (H0), las concentraciones de los tratamientos si inciden o tienen mucha
significancia en el porcentaje de mortalidad de las larvas.
Es importante tener en cuenta que la hipótesis alternativa (H1) no es tenida en cuenta cuando
un P-valor es decir la significancia es mayor a 0.05; en cambio es válida cuando el P-valor es
menor a 0.05.
66
Tabla 4. Análisis de varianza ANOVA de un factor
ANÁLISIS DE VARIANZA
Fuente de
variación
Grados
de
libertad
Suma de
cuadrados
Promedio de
los
cuadrados
F Pr(>F)
Entre grupos 4 5187 1296,8 63,987 0,000000003032
Dentro de los
grupos
15 304 20,3
TOTAL 19 5491
Fuente: Autoras.
En la tabla 4 se detalla el análisis realizado con el programa teniendo en cuenta las
concentraciones desde 1100 ppm hasta 1500 ppm y las mortalidades en cada uno de los
tratamientos y luego de revisar el Valor de la probabilidad = 0,000000003032 siendo inferior al
rango de error: 0,05 que expresa esta prueba estadística, es decir, que se rechaza la Hipótesis
nula (H0) al evidenciarse que los promedios de las mortalidades son estadísticamente diferentes
y por consiguiente son de gran significancia.
67
8. Discusión y análisis de resultados
La capacidad larvicida del extracto etanólico de Ocimum basilicum (Albahaca) sobre las larvas
del estadio IV del Aedes aegypti muestra los primeros resultados de mortalidad en el primer
bioensayo 1100 ppm a las 36 horas del tratamiento con un porcentaje del 51% y al cabo de las
48 horas se logra un porcentaje del 53,12%, lo que demuestra resultados favorables con el hecho
de superar el 50% de mortalidad acumulada. Cuando se aumenta la concentración a 1200 ppm
aumenta el porcentaje de mortalidad de 54% a las mismas 36 horas y a las 48 horas llega al
59.37%, donde se denota el progresivo aumento de la actividad larvicida. En el bioensayo de
1300 ppm se observa un aumento en la capacidad tóxica del extracto a las 24 horas de exposición
con un porcentaje del 58% de mortalidad, a las 36 horas aumenta al 71% y logrando un leve
aumento a las 48 horas con el 71.87%, en 1400 ppm se vuelven a obtener resultados positivos a
las 24 horas con el porcentaje del 60% y así sucesivamente aumentando progresivamente hasta
que a las 48 horas con el 90.62% de la mortalidad demuestra la toxicidad en cuanto a la
exposición al extracto y finalmente en 1500 ppm la efectividad mejora considerablemente al
obtenerse resultados a partir de las 12 horas con un porcentaje de mortalidad del 73%, así
aumenta al 84% a las 24 horas, a las 36 horas con el 91% y finalmente llega al 95.83% de
mortalidad acumulada de mostrando que al aumento de concentración está estrechamente
relacionado con la efectividad del larvicida.
De los bioensayos realizados los tiempos letales TL 50, se alcanzaron desde el primer
bioensayo en 1100 ppm, en donde en el tratamiento 1 con el 51% a las 36 horas, el tratamiento 2
con el 54% a las mismas 36 horas, indicando que el TL 50 se presenta en promedio a las 24
68
horas de exposición al tratamiento. Para los tiempos letales TL 90 la concentración de 1400 ppm
a las 48 horas de exposición muestra un porcentaje de 90.62% y el 1500 ppm a partir de las 36
horas se encuentran resultados superiores con el porcentaje del 91% y a las 48 horas el 95.83%
demuestra la efectividad y la toxicidad del Ocimum basilicum (Albahaca) en la eliminación de
las larvas expuestas.
A través de la regresión logarítmica se logró establecer el valor exacto de la dosis de
concentración para así obtener el valor para CL 50 y CL 90, valores que se encuentran en el
Anexo 2, allí se evidencia que en el rango de 1085 ppm y 1090 ppm se obtiene la CL 50 y en el
rango de concentración entre 1435 ppm y 1440 ppm se obtiene la CL 90. este resultado está
precisado a través de la fórmula de regresión logarítmica que aparece en la figura 15, donde se
muestra que se necesita una concentración de 1084 ppm para alcanzar la CL 50 y una
concentración de 1431 ppm para alcanzar la CL 90.
Pero se evidencia, con lo anteriormente mencionado que al realizar el experimento con el
extracto etanólico de Ocimum basilicum, no se encuentra convergencia con investigaciones
como, por ejemplo, el estudio de Manzoor et al (2013) ya que en un periodo de 24 horas se logró
el 50% de las muertes a 250 ppm y el 100% de las muertes con 1000 ppm, es importante tener en
cuenta que en el momento de la elaboración del extracto del estudio de referencia se usó como
agente de secado el Sulfato de Sodio Anhidro para separar el extracto del agua debido al uso de
La trampa Dean-Stark; a diferencia de la presente investigación que se desarrolló sin más
aditivos químicos; si no solamente acetona como emulsificante para mejorar la disolución del
69
extracto en agua y se utilizó el Rotoevaporador IKA RV10 para obtener la solución madre
separando el etanol del extracto.
Reconociendo los resultados positivos que fueron obtenidos se afirma que el extracto de
Ocimum basilicum se puede usar selectivamente en lugares donde el agua está estancada y por
consiguiente afectaría las larvas expuestas al extracto. Es necesario realizar estudios adicionales
sobre formulaciones contra mosquitos sobre su eficacia y rentabilidad, pues tal como lo
establece Manzoor et al (2013) los productos basados en estos aceites esenciales pueden
contribuir en gran medida a la reducción de la química ambiental y a una reducción general de la
densidad de población de vectores significativos como A. aegypti.
9. Conclusiones
● El extracto etanólico de Ocimum basilicum posee una eficiente capacidad larvicida, pues
este muestra una toxicidad superior al 50% sobre las larvas de cuarto estadio de Aedes
aegypti para todas las concentraciones evaluadas.
● Se encontró que el extracto etanólico de Ocimum basilicum tiene una capacidad larvicida
del 100% para 1535 ppm sobre las larvas de cuarto estadio de Aedes aegypti.
● La eficiente capacidad larvicida de Ocimum basilicum representa una potente
herramienta de control biológico contra los mosquitos Aedes aegypti.
70
● Se determinó por medio del método de regresión logarítmica que la concentración letal
que causa mortalidad sobre el 50% de las larvas de cuarto estadio de Aedes aegypti es
1084.67 ppm y la concentración letal que causa mortalidad sobre el 90% de las larvas es
1431.81 ppm.
● La validación de la Hipótesis alternativa (H1) demuestra que hay un efecto significativo
del larvicida sobre las larvas de cuarto estadio de Aedes aegypti para las concentraciones
empleadas, según el análisis estadístico de varianza ANOVA de un factor.
● Las concentraciones utilizadas en los bioensayos cumplen con lo establecido por la OMS
sobre el valor máximo de concentración establecido que fue inferior a 5000 ppm.
● Se demostró que la mortalidad de las larvas de cuarto estadio de Aedes aegypti es
directamente proporcional a las concentraciones empleadas, encontrándose que a mayor
concentración mayor mortalidad.
71
10. Recomendaciones
● Es importante contar con la disponibilidad de los huevos de Aedes aegypti como base
fundamental para poder dar lugar a la realización de los bioensayos, pues no todos los
huevos logran eclosionar y dar lugar al desarrollo de la etapa larvaria del mosquito.
● Se debe tener la certeza de la fase larvaria (cuarto estadio) en la que se encuentran los
mosquitos, desde su momento de eclosión, pues el paso de la fase de larva de cuarto
estadio a pupa en los bioensayos puede ser común que se presente y esto conlleva a la
invalidez de la prueba realizada.
● Evaluar la eficiencia del extracto etanólico de Ocimum basilicum como insecticida o
repelente para mosquitos adultos de Aedes aegypti, sabiendo que la toxicidad del extracto
tiene efecto sobre las diferentes etapas de vida del mosquito.
● Determinar el potencial larvicida de una mezcla de extracto naturales de plantas
aromáticas pertenecientes al género Ocimum que al igual que el Ocimum basilicum
presentan propiedades insecticidas y repelentes, con el fin de obtener un extracto de
mayor eficiencia por cotoxicidad.
● Evaluar la eficiencia del extracto etanólico de Ocimum basilicum sobre otras especies de
dípteros de la familia culicidae que representan también un escenario problemático en
72
salud pública tales como Anopheles stephensi, Anopheles albimanus, Aedes albopictus,
Culex quinquefasciatus, entre otros.
73
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82
12. Anexos
ANEXO 1. Registro de mortalidades en los tratamientos.
Registro de mortalidades en el tratamiento de 1100 ppm entre las 0 y 48 horas.
1100 ppm Hora 0 Hora 2 12 Horas 24 Horas 36 Horas 48 Horas
Testigo 0 Larvas muertas
0 Larvas muertas
0 Larvas muertas
0 Larvas muertas
0 Larvas muertas
0 Larvas muertas
Vaso 1 0 Larvas muertas
0 Larvas muertas
0 Larvas muertas
0 Larvas muertas
12 Larvas muertas
1 Larvas muertas
Vaso 2 0 Larvas
muertas
0 Larvas
muertas
0 Larvas
muertas
0 Larvas
muertas
14 Larvas
muertas
1 Larvas
muertas
Vaso 3 0 Larvas
muertas
0 Larvas
muertas
0 Larvas
muertas
0 Larvas
muertas
12 Larvas
muertas
2 Larvas
muertas
Vaso 4 0 Larvas
muertas
0 Larvas
muertas
0 Larvas
muertas
0 Larvas
muertas
13 Larvas
muertas
0 Larvas
muertas
Fuente: Autoras del proyecto.
Registro de mortalidades en el tratamiento de 1200 ppm entre las 0 y 48 horas.
1200 ppm Hora 0 Hora 2 12 Horas 24 Horas 36 Horas 48 Horas
Testigo 0 Larvas
muertas
0 Larvas
muertas
0 Larvas
muertas
0 Larvas
muertas
0 Larvas
muertas
0 Larvas
muertas
Vaso 1 0 Larvas
muertas
0 Larvas
muertas
0 Larvas
muertas
0 Larvas
muertas
13 Larvas
muertas
2 Larvas
muertas
Vaso 2 0 Larvas
muertas
0 Larvas
muertas
0 Larvas
muertas
0 Larvas
muertas
14 Larvas
muertas
1 Larvas
muertas
Vaso 3 0 Larvas
muertas
0 Larvas
muertas
0 Larvas
muertas
0 Larvas
muertas
15 Larvas
muertas
2 Larvas
muertas
Vaso 4 0 Larvas muertas
0 Larvas muertas
0 Larvas muertas
0 Larvas muertas
12 Larvas muertas
2 Larvas muertas
Fuente: Autoras del proyecto.
83
Registro de mortalidades en el tratamiento de 1300 ppm entre las 0 y 48 horas.
1300 ppm Hora 0 Hora 2 12 Horas 24 Horas 36 Horas 48 Horas
Testigo 0 Larvas
muertas
0 Larvas
muertas
0 Larvas
muertas
0 Larvas
muertas
0 Larvas
muertas
2 Larvas
muertas
Vaso 1 0 Larvas
muertas
0 Larvas
muertas
0 Larvas
muertas
19 Larvas
muertas
2 Larvas
muertas
1 Larvas
muertas
Vaso 2 0 Larvas
muertas
0 Larvas
muertas
0 Larvas
muertas
10 Larvas
muertas
4 Larvas
muertas
0 Larvas
muertas
Vaso 3 0 Larvas
muertas
0 Larvas
muertas
0 Larvas
muertas
17 Larvas
muertas
3 Larvas
muertas
0 Larvas
muertas
Vaso 4 0 Larvas
muertas
0 Larvas
muertas
0 Larvas
muertas
12 Larvas
muertas
4 Larvas
muertas
1 Larvas
muertas
Fuente: Autoras del proyecto.
Registro de mortalidades en el tratamiento de 1400 ppm entre las 0 y 48 horas.
1400 ppm Hora 0 Hora 2 12 Horas 24 Horas 36 Horas 48 Horas
Testigo 0 Larvas muertas
0 Larvas muertas
0 Larvas muertas
0 Larvas muertas
0 Larvas muertas
1 Larvas muertas
Vaso 1 0 Larvas
muertas
0 Larvas
muertas
0 Larvas
muertas
15 Larvas
muertas
4 Larvas
muertas
3 Larvas
muertas
Vaso 2 0 Larvas muertas
0 Larvas muertas
0 Larvas muertas
14 Larvas muertas
5 Larvas muertas
3 Larvas muertas
Vaso 3 0 Larvas
muertas
0 Larvas
muertas
0 Larvas
muertas
16 Larvas
muertas
7 Larvas
muertas
1 Larvas
muertas
Vaso 4 0 Larvas
muertas
0 Larvas
muertas
0 Larvas
muertas
15 Larvas
muertas
6 Larvas
muertas
2 Larvas
muertas
Fuente: Autoras del proyecto.
84
Registro de mortalidades en el tratamiento de 1500 ppm entre las 0 y 48 horas.
1500 ppm Hora 0 Hora 2 12 Horas 24 Horas 36 Horas 48 Horas
Testigo 0 Larvas
muertas
0 Larvas
muertas
0 Larvas
muertas
0 Larvas
muertas
0 Larvas
muertas
2 Larvas
muertas
Vaso 1 0 Larvas
muertas
0 Larvas
muertas
17 Larvas
muertas
4 Larvas
muertas
2 Larvas
muertas
1 Larvas
muertas
Vaso 2 0 Larvas
muertas
0 Larvas
muertas
19 Larvas
muertas
3 Larvas
muertas
2 Larvas
muertas
0 Larvas
muertas
Vaso 3 0 Larvas
muertas
0 Larvas
muertas
18 Larvas
muertas
2 Larvas
muertas
1 Larvas
muertas
2 Larvas
muertas
Vaso 4 0 Larvas
muertas
0 Larvas
muertas
19 Larvas
muertas
2 Larvas
muertas
2 Larvas
muertas
1 Larvas
muertas
Fuente: Autoras del proyecto.
Anexo 2. Cálculo de las aproximaciones de las concentraciones letales CL 50 y CL 90.
Concentración
Mortalidad en valores
de probabilidad
Concentración
Mortalidad en valores
de probabilidad
1050
45.31993654
1280
73.85388832
1055
46.00430837
1285
74.41552646
1060
46.68544439
1290
74.97498347
1065
47.36337506
1295
75.53227623
1070
48.03813039
1300
76.08742143
1075
48.70974
1305
76.64043554
85
1080
49.37823308
1310
77.19133488
1085
50.04363842
1315
77.74013554
1090
50.70598441
1320
78.28685346
1095
51.36529906
1325
78.8315044
1100
52.02160999
1330
79.37410391
1105
52.67494445
1335
79.91466739
1110
53.3253293
1340
80.45321008
1115
53.97279106
1345
80.98974701
1120
54.6173559
1350
81.52429308
1125
55.25904961
1355
82.056863
1130
55.89789766
1360
82.58747134
1135 56.53392518 1365 83.11613248
1140
57.16715697
1370
83.64286067
1145
57.7976175
1375
84.16767
1150
58.42533091
1380
84.69057438
1155
59.05032104
1385
85.21158761
1160
59.67261143
1390
85.7307233
1165
60.29222529
1395
86.24799495
86
1170
60.90918554
1400
86.7634159
1175
61.52351483
1405
87.27699933
1180
62.1352355
1410
87.7887583
1185
62.7443696
1415
88.29870574
1190
63.35093891
1420
88.80685441
1195
63.95496496
1425
89.31321697
1200
64.55646896
1430
89.81780593
1205
65.1554719
1435
90.32063367
1210
65.7519945
1440
90.82171243
1215
66.34605719
1445
91.32105435
1220
66.9376802
1450
91.81867143
1225
67.52688348
1455
92.31457553
1230
68.11368673
1460
92.80877842
1235
68.69810944
1465
93.30129172
1240
69.28017084
1470
93.79212695
1245
69.85988993
1475
94.2812955
1250
70.43728549
1480
94.76880866
1255
71.01237608
1485
95.25467758
87
1260
71.58518001
1490
95.73891333
1265
72.15571541
1495
96.22152685
1270
72.72400017
1500
96.70252896
1275
73.29005198
Fuente: Autoras del proyecto
Anexo 3. Formato registro para porcentajes de mortalidades acumuladas durante los
bioensayos.
UNIVERSIDAD DISTRITAL FRANCISCO JOSÉ DE CALDAS FACULTAD DEL MEDIO AMBIENTE Y
RECURSOS NATURALES
ESTUDIO DE LETALIDADES LARVAS Aedes aegypti CON EXTRACTO DE Ocimum basilicum (Albahaca).
TRATAMIENT
OS
Cont
eo
inici
al
MORTALIDADES EN EL TIEMPO Nº
ACUMUL
ADO
TOTAL
%
Mortalidad
final
%
PROME
DIO TTO
0 HORAS 2 HORAS 12
HORAS
24
HORAS
36
HORAS 48 HORAS
Nº
%
Nº
%
Acu
m
Nº
%
Acu
m
Nº
%
Acu
m
Nº
%
Acu
m
Nº
%
Acum
TESTIGO
R 1 25 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
4
R 2 25 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
R 3 25 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 2 8 2 8
R 4 25 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 4 1 4
R 5 25 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 2 8 2 8
Promedio
testigo
0
0
0
0
0
4
4
T 1 - 1100
PPM
R 1 25 0 0 0 0 0 0 0 0 12 48 1 52 13 52
55
R 2 25 0 0 0 0 0 0 0 0 14 56 1 60 15 60
R 3 25 0 0 0 0 0 0 0 0 12 48 2 56 14 56
R 4 25 0 0 0 0 0 0 0 0 13 52 0 52 13 52
Promedio
1100ppm
0
0
0
0
51
55
55
T2 - R 1 25 0 0 0 0 0 0
0 13 52 2 60 15 60 61
88
1200PPM R 2 25 0 0 0 0 0 0
0 14 56 1 60 15 60
R 3 25 0 0 0 0 0 0
0 15 60 2 68 17 68
R4 25 0 0 0 0 0 0
0 12 48 2 56 14 56
Promedio
1200ppm
0
0
0
0
54
61
61
T3-
1300PPM
R 1 25 0 0 0 0 0 0 16 64 2 72 1 76 19 76
73
R 2 25 0 0 0 0 0 0 13 52 4 68 0 68 17 68
R 3 25 0 0 0 0 0 0 17 68 3 80 0 80 20 80
R4 25 0 0 0 0 0 0 12 48 4 64 1 68 17 68
Promedio
1300ppm
0
0
0
58
71
73
73
T4 -
1400PPM
R 1 25 0 0 0 0 0 0 15 60 4 76 3 88 22 88
91
R 2 25 0 0 0 0 0 0 14 56 5 76 3 88 22 88
R 3 25 0 0 0 0 0 0 16 64 7 92 1 96 24 96
R4 25 0 0 0 0 0 0 15 60 6 84 2 92 23 92
Promedio
1400ppm
0
0
0
60
82
91
91
T5 - 1500
PPM
R 1 25 0 0 0 0 17 68 4 84 2 92 1 96 24 96
96
R 2 25 0 0 0 0 19 76 3 88 2 96 1 100 25 100
R 3 25 0 0 0 0 18 72 2 80 1 84 2 92 23 92
R4 25 0 0 0 0 19 76 2 84 2 92 1 96 24 96
Promedio
1500ppm
0
0
73
84
91
96
96
Fecha de Inicio 6/10/2018
Fecha de
Finalización 6/30/2018
Responsable(s)
de la prueba
Ingry Paola Pérez - Sandra Paola Mejía
89
Anexo 4. Gráfica de análisis estadístico de factor ANOVA