anti bodi monoklonal
TRANSCRIPT
-
8/18/2019 Anti Bodi Monoklonal
1/26
laporan anti bodi monoklonal
BAB I
PENDAHULUAN
Selama beberapa dasawarsa, sejumlah besar (mungkin sampai jutaan
tahun) berbagai molekul antibodi (imunoglobulin) telah diketahui eksistensinya,
masing-masing bercirikan suatu tempat unik yang dapat mengikat diri pada
determinan molekular yang spesifik. Banyak ahli imonologi mula-mula mengira
bahwa semua antibodi itu terbuat dari rantai-rantai polipeptida yang sama dan
bahwa keunikan mereka itu disebabkan karena cara melipatnya rantai-rantai
polipetida mereka yang identik dan yang baru disintesis di sekitar antigennya. Teori
ini ternyata salah. Tiap antibodi mempunyai rangkaian asam amino sendiri, dan tiap
sel penghasil antibodi (sel plasma) hanya membuat suatu antibodi. ula-mula ini
merupakan penemuan yang menggelisahkan karena hal itu tampaknya berarti
bahwa harus ada gen tersendiri untuk setiap antibodi tertentu. !ika hal itu benar,
maka mungkin sebagian besar, jika bukan bagian yang terbesar, dari "#$-"#$
%ertebrata harus diperuntukkan bagi pengkodean molekul-molekul antibodi. Tetapi
spekulasi semacam itu tidak dapat diuji sebelum ahli kimia protein menetapkan
struktur dasar molekul antibodi. (&atson dkk ' **)
A.
Pengertian Antibodi
$ntibodi dibuat oleh tubuh untuk merespon serangan bakteri atau %irus.
$ntibodi ini melindungi tubuh terhadap serangan infeksi. $ntibodi dihasilkan oleh-oleh sel limfosit dan dapat juga dihasilkan dengan menumbuhkan sel-sel ini dalam
laboratorium. Sel-sel tersebut kemungkinan menghasilkan sejumlah besar antibodi
yang sejenis, ini dikenal sebagai antibodi monoklonal. +ntuk memahami bagaimana
hal ini bekerja, terlebih dahulu diperhatikan pengujian mekanisme alami dari tubuh
untuk membentuk antibodi. (http'id.sh%oong.comeact-sciencesbiology/010-
pembuatan-antibodi-monoklonal-dengan-hibridoma)
B. Penetapan Struktur Dasar Molekul Antibodi
http://id.shvoong.com/exact-sciences/biology/2274042-pembuatan-antibodi-monoklonal-dengan-hibridoma/http://id.shvoong.com/exact-sciences/biology/2274042-pembuatan-antibodi-monoklonal-dengan-hibridoma/http://id.shvoong.com/exact-sciences/biology/2274042-pembuatan-antibodi-monoklonal-dengan-hibridoma/http://id.shvoong.com/exact-sciences/biology/2274042-pembuatan-antibodi-monoklonal-dengan-hibridoma/
-
8/18/2019 Anti Bodi Monoklonal
2/26
2engertian yang pertama mulai muncul pada awal tahun 31-an ketika
diketahui bahwa unit dasar antibodi itu terdiri dari dua rantai ringan (4) dengan berat
molekul /.111 dan dua rantai berat yang identik (5) dengan berat molekul 67.111,
yang terikat menjadi satu dengan pengikat disulfida. (8stilah 9ringan: dan 9berat: ini
berkaitan dengan pembedaan dalam berat molekul rantainya). Setiap unit empat
rantai tersebut mengandung dua tempat pengikat identik untuk antigen dengan
suatu tempat yang sebagian terbentuk oleh asam-asam amino dari rantai ringan
spesifik dan sebagian oleh asam-asam amino rantai berat spesifik. !ika bagan dasar
antibodi telah ditentukan , maka rangkaian asam amino dari rantai-rantai komponen
ringan dan berat dapat ditentukan dengan menggunakan antibodi-antibodi
homogen yang dibuat oleh sel-sel myeloma spesifik. yeloma adalah sel-sel
(plasma) kanker yang memproduksi antibodi, dan pada tiap hewan semua sel tumor
myeloma merupakan keturunan dari satu sel kanker asli. 8ni menjelaskan mengapa
semua molekul antibodi dari sembarang myeloma mempunyai rangkaian asam
amino yang sama. Baik rangkaian rantai ringan maupun rantai berat ber%ariasi dari
tipe antibodi yang satu dengan yang lainnya, tetapi dengan suatu cara yang seorang
pun tidak dapat mermalkannya dari semula. eskipun setiap rantai mempunyai
rangkaian yang unik, namun hampir semua kespesifikan itu terbatas pada ujung-ujung terminal amino ("aerah-daerah %ariabel atau atau daerah-daerah ;).
Setengah dari tiap rantai ringan dan tiga per empat dari tiap rantai berat mempunyai
rangkaian-rangkaian yang hampir identik (daerah tetap atau daerah-daerah
-
8/18/2019 Anti Bodi Monoklonal
3/26
sepuluh ribu limfosit yang berbeda. "an asing-masing limfosit menghasilkan
antibodi yang berbeda jika diperlukan oleh tubuh. (http'id.sh%oong.comeact-
sciencesbiology/010-pembuatan-antibodi-monoklonal-dengan-hibridoma)
D. Hibridoma dan Antibodi Monoklonal
Teknik 5ibridoma adalah penggabungan dua sel dari organisme yang sama
maupun berbeda sehingga menghasilkan sel tunggal berupa sel hibrid ( hibridoma )
yang memiliki kombinasi dari sifat kedua sel tersebut. Teknik hibridoma ini sangat
penting untuk menghasilkan antibodi dan hormon dalam jumlah yang besar.
Salah satu hasil dari teknik hibridoma ini adalah antibodi monoklonal .
$ntibodi monoklonal adalah antibodi yang diperoleh dari suatu sumber tunggal atau
sel klona yang hanya mengenal satu jenis antigen. 2embentukan antibodi
monoklonal dilakukan dengan menggunakan kelinci atau tikus.
BAB II
PEMBAHASAN
http://id.shvoong.com/exact-sciences/biology/2274042-pembuatan-antibodi-monoklonal-dengan-hibridoma/http://id.shvoong.com/exact-sciences/biology/2274042-pembuatan-antibodi-monoklonal-dengan-hibridoma/http://id.shvoong.com/exact-sciences/biology/2274042-pembuatan-antibodi-monoklonal-dengan-hibridoma/http://id.shvoong.com/exact-sciences/biology/2274042-pembuatan-antibodi-monoklonal-dengan-hibridoma/
-
8/18/2019 Anti Bodi Monoklonal
4/26
-
8/18/2019 Anti Bodi Monoklonal
5/26
@arena spesifitasnya yang tinggi maka Teknologi antibodi monoklonal dapat
digunakan untuk membunuh sel kanker tanpa mempengaruhi sel-sel yang sehat.
Selain kegunaannya untuk mendiagnosis penyakit pada manusia, Teknologi antibodi
monoklonal juga banyak dipakai untuk mendeteksi penyakit-penyakit pada tanaman
dan hewan, kontaminasi pangan dan polutan lingkungan.
(http'biologigonD.blogspot.com111membuat-antibody-monoklonal.html
$ntibodi untuk penyembuh kanker biasanya ditangani dengan sitotoksin yakni
Dat radioaktif pembunuh sel kanker. Senyawa campuran itu diinjeksikan ke dalam
tubuh penderita, dan akan meluncur ke sel-sel kanker dan membunuhnya, tanpa
merusak sel-sel lain yang normal 5al ini sangat dimungkinkan karena setiap Dat
antibodi akan mengenal antigennya. (2rawirohartono ' /)
A. Metode Pembuatan Antibodi Monoklonal
. 8munisasi mencit
$ntigen berupa protein atau polisakarida yang berasal dari bakteri %irus,
disuntikkan secara subkutan pada beberapa tempat atau secara intra peritoneal.
Setelah 6 minggu disusul suntikan antigen secara intra%ena sekali atau beberapa
kali suntikan. encit dengan tanggap kebal terbaik dipilih? hari setelah suntikan
terakhir, antibodi yang terbentuk pada mencit diperiksa dan diukur titer antibodinya,
mencit dimatikan dan limpanya diambil secara aseptis, kemudian dibuat suspensi sel
limpa untuk memisahkan sel B yang mengandung antibodi.
-
8/18/2019 Anti Bodi Monoklonal
6/26
oleh tubuh dilakukan suntikan imunisasi langsung pada limpa dan ternyata hasilnya
lebih baik dari cara kon%esional.
. Fusi sel limpa kebal dan sel mieloma
2ada kondisi biakan jaringan biasa, sel limpa yang membuat antibodi akan cepat
mati, sedangkan sel mieloma dapat dibiakkan terus-menerus. Fusi sel dapat
menciptakan sel hibrid yang terdiri dari gabungan sel limpa yang dapat membuat
antibodi dan sel mieloma yang dapat dibiakkan terus menerus, sehingga sel hibrid
dapat memproduksi antibodi secara terus-menerus, sehingga dalam jumlah yang
tidak terbatas secara in vitro.
Fusi sel diawali dengan fusi membran plasma sehingga menghasilkan sel
besar dengan dua atau lebih inti sel, yang berasal dari kedua induk sel yang
berbeda jenis yang disebut heterokarion. 2ada waktu tumbuh dan membelah diri
terbentuk satu inti yang mengandung kromosom kedua induk yang disebut sel hibrid.
Frekuensi fusi dipengaruhi beberapa faktor antara lain jenis medium? perbandingan
jumlah sel limpa dengan sel mieloma? jenis sel mieloma yang digunakan? dan bahan
yang mendorong timbulnya fusi (fusogen). 2enambahan polietilen glikol (2G=) dan
dimetilsulfoksida ("SE) dapat menaikkan efisiensi fusi sel.
6. Gliminasi sel induk yang tidak berfusi
Frekuensi terjadinya hibrid sel limpa-sel mieloma biasanya rendah, karena
itu penting untuk mematikan sel yang tidak fusi yang jumlahnya lebih banyak agar
sel hibrid dalam media selektif yang mengandunghypoxanthine, aminopterin,
dan tymidine (5$T).
$minopterin menghambat jalur biosintesis purin dan pirimidin sehingga
memaksa sel menggunakan salvage pathway . Seperti kita ketahui sel mieloma
mempunyai kelainan untuk mensintesis nukleotida. Sel mieloma tidak mempunyai
enDim timidin kinase atau hypoxanthine phosphonibosyltransferase, sehingga sel
mieloma yang tidak berfusi akan mati karena tidak memiliki enDim tersebut,
sedangkan sel hibrid karena mendapatkan enDim tersebut dan sel mamalia yang
difusikan dapat menggunakan salvage pathway sehingga tetap hidup dan
berkembang.
0. 8solasi dan pemilihan klan hibridoma
-
8/18/2019 Anti Bodi Monoklonal
7/26
Sel hibrid dikembangbiakan sedemikian rupa, sehingga tiap sel hibrid akan
membentuk koloni homogen yang disebut hibridoma, tiap koloni kemudian dipelihara
terpisah satu sama lain. 5ibridoma yang tumbuh diharapkan mensekresikan antibodi
ke dalam medium, sehingga antibodi yang terbentuk bisa diisolasi.
+mumnya penentuan antibodi yang diinginkan, dilakukan dengan
cara enzyme linked immunosorbent assay (G48S$) atauradioimmunoassay (>8$).
2emilihan klon hibridoma yang dapat menghasilkan antibodi? dan yang kedua adalah
memilih sel hibridoma penghasil antibodi monoklonal yang potensial menghasilkan
antibodi monoklonal yang tinggi dan stabil.
(http'%i%alapharmacy.blogspot.com116teknologi-pembuatan-antibodi-
monoklonal.html )
B. Metode Pembuatan Antibodi Monoklonal Seara In !itro dan In !i"o
$ntibodi monoklonal adalah antibodi yang spesifik terhadap satu macam
epitop. "alam pembuatan antibodi monoklonal dapat dilakukan dengan cara in %itro
dan in %i%o. Secara in %itro antibodi monoklonal diproduksi dengan cara hibridisasi
sel myeloma dan sel limfa kemudian dibiakkan pada mikroplate 3 well dan
diinkubasikan pada inkubator 6/H< yang mengandung
-
8/18/2019 Anti Bodi Monoklonal
8/26
Pembekuan sel
Sel yang akan dibekukan sebaiknya sel yang berumur -6 hari agar setelah
di thawing sel yang hidup lebih banyak. Sel yang akan dibekukan pada
setiap tube/cryotube mengandung sel kurang lebih 1.
-
8/18/2019 Anti Bodi Monoklonal
9/26
7. 2ada saat fusi, mencit dibunuh dan limfa diambil secara aseptis?
3. 4imfa dimasukkan ke dalam medium yang bebas serum sebanyak 1 ml yang telah
dipanaskan 6/H< dan kemudian dengan glass objek disayat-sayat kemudian ditekan
dengan pinset?
/. Sisa jaringan kemudian dimasukkan pada tabung 71 ml dan letakkan pada inkubator
selama 7 menit?
*. Supernatan diambil dan kemudian disentrifugasi selama 7 menit pada le%el 6-0
dengan kecepatan 311 g atau 111 rpm?
. 2elet kemudian diresuspensikan dengan 1.*6I #50
-
8/18/2019 Anti Bodi Monoklonal
10/26
/. 2elet diberi 5$T dan diinkubasikan pada inkubator selama 61 menit, lakukan dengan
pelan-pelan?
*.
asukkan ke dalam plate klonisasi 17well sekitar tetes, 3 plate 3 well
17well sampai kurang lebih 1 Ll untuk plate?
. Setiap 6-0 hari di makan 6 5$T dan 5T dan setelah itu setiap 1 hari diuji . +ntuk
lebih jelas lihat gambar 6.
=ambar 6. BS-%itro, "econe 1 #S, "econ 1. 5al lain yang perlu
diperhatikan adalah cryotube untuk membekukan sel boleh digunakan hanya satu
kali, di samping 8tu juga material dan alat-alat harus diberi tanda khusus untuk kultur
sel dan tdak diperbolehkan digunakan yang lainnya.
2enyimpanan bahan-bahan plastik harus diberi sirkulasi udara yang baik
sehingga tidak terjadi kerusakan bahan tersebut, karena banyak mengandung
formaldehid yang sangak toksik terhadap sel. Eleh karena itu palstik yang lama tidak
dapat dipergunakan lagi. @ualitas air pada laboratorium tissue culture harus
disediakan beberapa tingkatan kualitas air terutama untuk fusi sel seperti proses
pertukaran ion sangat penting misalnya osmose diperlukan kualitas air tingkat 88 atau
aMua bidest. Selain itu juga diperlukan dimineralisasi dengan cara pertukaran ion
yaitu kation dan anion yang nantinya digunakan selain untuk pengenceran atau
membuat larutan juga untuk pencucian alat. $Mua destilata yang diproses dengan
menggunakan spiral pemanas dari besi atau metal tidak bisa digunakan, sebaiknya
dari glas kuarsa karena tidak merusak proses ionisasi. Eleh karena itu kualitas air merupakan syarat utama dalam mengerjakan kultur sel.
-
8/18/2019 Anti Bodi Monoklonal
11/26
-
8/18/2019 Anti Bodi Monoklonal
12/26
"alam penggunaan serum sebagai salah satu bahan penumbuh sel sebelum
dipakai harus dites terlebih dahulu dengan berbagai konsentrasi misalnya 1I, 7I,
atau I. 5al ini sebaiknya juga dites pada hibridoma yang sudah establish.
$da beberapa serum charge seperti 77I charge foetal calf serum, 7I
charge newborn calf serum, 0 charge calf serum, /6I charge bo%ine serum.
Serum-serum ini sudah banyak dipasarkan. +ji untuk serum dapat dilakukan dengan
sel hibrid yang establish dan dilakukan pengamatan selama -6 minggu setelah fusi
atau menggunakan sel myeloma dengan phase pertumbuhan dengan cara
memasukkan sel sebanyak 111 sel per well padamikroplate kemudian setelah satu
minggu diuji dengan mikroskop fase kontras atau dilihat kadar protein dan jumlah sel
yang tumbuh. !ika jumlah selnya meningkat maka serum tersebut dapat digunakan
untuk hibridoma.
Makrofag ( Makrofag Feeder Cells )
akrofag dalam produksi antibodi monokoonal diperlukan untuk memfagosit
sel mati pada saat fusi sel limfosit dan sel myeloma. Sel ini dikultur pada mikroplate
3 lubang (well ) atau mikroplate 0 lubang yang dapat ditumbuhkan sampai 0
minggu sebelum di campur dengan sel hasil fusi. Sehingga siap untuk memfagosit
sel-sel mati yang tidak fusi.
akrofag dapat dikmoleksi dari limpa mencit yang sama, tetapi disarankan
menggunakan mencit yang berbeda karena akan mempengaruhi faktor
pertumbuhan. encit yang sering digunakan untuk mengkoleksi makrofag
sebagai feeder cells adalah jenis Balbc dan #>8. inimal mencit yang akan
diambil makrofagnya ekor. Tetapi jika makrofag dikoleksi dari mencit yang telah
diimunisasi hanya diperlukan mencit.
akrofag yang paling cocok untuk feeder cells adalah makrofag hasil kultur
monosit berasal dari darah perifer manusia yang distimulasi dengan $B-serum.
Bahan dan Reagensia
encit strain balbc atau #>8 atau mencit lainnya, tabung conical 71 ml,
tabung sentrifuse 7 ml, medium >28 301 (*11)' *1I >28 301, 1I medium
, garam Garles, 2BS tanpa
-
8/18/2019 Anti Bodi Monoklonal
13/26
. Bagian yang akan difiksasi dibuat aseptis dengan ethanol *1I, kemudian kulit perut
dibuka.
6. asukkan - ml 2BS dengan pipet pasteur dan lakukanlah pipetisasi keluar masuk
dengan pelan-pelan (sedot dan tekan).
0.
-
8/18/2019 Anti Bodi Monoklonal
14/26
Produksi $ntibodi Monoklonal &ada Mencit
"alam memproduksi antibodi monoklonal pada mencit banyak faktor yang
harus diketahui, karena produksi antibodi monoklonal dengan cara ini memerlukan
situasi yang betul-betul memenuhi persyaratan terutama pertumbuhan tumor untuk
membentuk asites di dalam ruang peritoneum mencit. Semakin cepat dan banyak
asites yang terbentuk semakin tinggi produkti%itasnya antibodi monoklonal. Eleh
karena itu dalam kapital selanjutnya akan membahas dasar produksi antibodi
monoklonal pada mencit dan faktor-faktor apa yang harus diperhatikan, standar
metode yang digunakan. Selain itu juga faktor penandaan (priming).
'asar &roduksi antibodi monoklonal &ada mencit
Terdapat persyaratan khusus untuk memproduksi antibodi poliklonal dalam
ruang peritoneum mencit, sehingga dapat memproduksi antibodi monoklonal.
Terutama perkembangan tumor sangat perlu diperhatikan. 5al ini semenjak tahun
3 oleh 2otter dan
=ambar 7. Skema standar etode 2roduksi $ntibodi onoklonal pada mencit
Boyce sudah membuat dan mengamati pada mencit setelah diinjeksi dengan
mineral oil dan mineral adju%ant terbentuk plasmacytoma. "ari efek inilah sehingga
dapat menstimulasi hibridoma sel untu dapat proliferasi di dalam ruang peritoneum
mencit. $danya reaksi ini mengakibatkan berdatangan sel adheren seperti
granulosit, makrofage ke dalam ruang peritoneum. Sehingga dengan adanya
pertumbuhan sel hibridoma terlihat terjadi keradangan pada perutruang peritoneum
mencit. 5al ini menandakan immunoglobulin diproduksi berupa asites dalam perut
mencit.
+ntuk dapat mengkoleksi cairan asites dari mencit dilakukan dengan cara
melakukan punksi.
-
8/18/2019 Anti Bodi Monoklonal
15/26
kerugiannya adalah kebanyakan antibodi monoklonal yang diproduksi dan di dapat
sekitar 7-1I mengandung antibodi bukan antibodi monoklonal. 2roblem lainnya
yang muncul adalah pada saat menginjeksikan sel hibridoma ke dalam rongga
peritoneum terkadang terkontaminasi dengan bakteri, jamur dan mykoplasma.
Pemilihan dan Penanganan #ewan Coba
"alam pemilihan hewan coba biasanya dikaitkan dengan asal sel myeloma
dan sel limfa yang akan digunakan. Sebagai contoh, jika sel linie myeloma
K36.$g*.376 berasal dari mencit balbc dan kemudian difusikan dengan sel limfa
dari mencit balbc pula, maka hewan coba yang paling baik untuk menumbuhkan sel
tersebut adalah menggunakan mencit balbc. eskipun dapat juga menggunakan
generasi hibrid F dari balbc dengan strain lainnya.
!enis hewan lainnya yang dapat digunakan adalah heterolog hibridoma
mencit dan juga pada tikus (rat), tetapi harus dibuat imunodefisiensi terlebih dahulu
dengan cara pengambilan thymus (Thymus apalstich), penyinaran sinar ultra%iolet,
dan atau dengan cara
pemberian bahan imunosupresi atau S
-
8/18/2019 Anti Bodi Monoklonal
16/26
2embuatan asites sangat tergantung tentang pengalaman dalam
penanganan sebelum sel hibridoma diinjeksikan ke dalam rongga peritoneum. 5al
ini karena jika kurang optimal, maka asites yang diproduksi tidak akan banyak.
Bahan yang sering digunakan sebagai priming antara lainmineral oil pristan
(#$%$&'$&-tetramethyl pentadecan) dan sebuah rantai alkan. Serta aju%ant freund
incompletes. $gen lainnya yang juga dapat menstimulir makrofage yaitu
thioglykolaat dan proteose-pepton. "ari banyak bahan yang digunakan
untuk priming ini dan hasilnya yang paling baik adalah selain !ncompleet reund*s
+d,uvant (8F$).
!ika setelah sekali injeksi sel hibridoma ke dalam ruang peritoneum tidak
muncul adanya tumor, maka dapat diulangi sekali lagisetelah -7 hari atau dapat
dilakukan ulangan berkali-kali. !adi efek dari priming adalah mempercepat
pertumbuhan sel hibridoma dalam rongga peritoneum mencit.
%aktu dan !olume Priming
2ada mencit yang diberi priming pristan 1-1 hari sebelum diinjeksi dengan
sel hibridoma mempunyai kecenderungan pertumb uhan sel hibridoma lebih cepat
dibandingkan dengan pemberian priming hari sebelum diinjeksi, dan asites yang
dibentukotomatis lebih cepat. "ari beberapa waktu pemberian priming di atas yang
paling baik untuk produksi asistes dan dapat menghasilkan antibodi yang tinggi
adalah pemberian priming 1 hari sebelum diinjeksi sel hibridoma.
2emberian priming dengan incomplete adju%ant dapat membentuk
plasmacytoma seperti dengan pristan, tetapi waktu yang baik pemberiannya adalah
6 hari sebelum diinjeksi dengan sel hibbridoma. Tetapi kedua bahan priming di atas
dalam stimulasi pembentukan asites pristan lebih lama dibandingkan dengan 8F$.
!umlah dosis maksimal pemberian ppristan pada mencit adalah o,7
mlmencit. 4ebih dari - ml dapat menurunkan produksi secara drastis. !adi 1,6
mlmencit paling baik pada mencit dengan berat badan 1 gram dan 1,7 ml untuk
hewan coba yang lebih berat.
+plikasi sel ibridoma
-
8/18/2019 Anti Bodi Monoklonal
17/26
Sel hibridoma dimasukkan ke dalam rongga peritoneum melalui penyuntikan
intraperitoneal sekitaar 17 sel. Selain itu juga dapat dilakukan melalui rute intra%ena
retrobulbar atau intralimfa (intraspleen). !ika penyuntikan dilakukan langsung pada
limfa maka sel yang perlu dipersiapkan adalah 10sel. "engan jumlah sel ini sudah
mampu untuk berkembang di dalam mesenterium dari rongga perut. Tetapi jika
menginginkan produksi antibodi monoklonal yang cepat dan banyak maka jumlah sel
minimal 3-6 17selmencit. Tetapi kerugiannya adalah biasanya hewan cepat
mati, jika dibandingkan dengan pemberian sel yang lebih sedikit, dan juga produksi
immunoglobulinnya sedikit.
Pengambilan $sites
$sites dapat diambil jika sudah terlihat adanya produksi asites. $sites dapat
diambil berkali-kali, sehingga didapatkan %olume aistes lebih banyak. @erugiannya
jika diambil lebih dari sekali terkadang mencit mati. 2engambilan dengan cara
punksi ini maksimal pengambilan aistes 0-3 kali. $gar dalam pengambilan
mendapatkan cairan asites yang banyak maka perlu diinjeksi terlebih dahulu
dengan 7 ml cairan fisiologis larutan kochsal sebelum pengambilan.
Penggunaan sel asites
Sel hibridoma yang dipanen dari rongga perut mencit adalah merupakan sel
yang sudah adaptasi di dalam rongga perut oleh karena itu setelah dilakukan
pemanenan asites, sel dapat diinjeksikan kembali pada mencit baru tanpa didahului
dengan pemberian priming. Sel ini dapat disimpan pada -*1H< dan tahan sampai 3
bulan.
Produksi humanantibodi monoklonal &ada rongga &erut mencit
2roduksi human-antibodi monoklonal pada mencit sulit dan terdapat
beberapa kendala karena sel hibridoma pada mencit terjadi enotransplantat dan
terjadi reaksi yang berlebihan. Eleh karena itu hewan coba perlu dilakukan
pelemahan sisten imun dengan cara penyinaran ultra %iolet. 2roduksi asites human-
antibodi monoklonal relatif lebih sedikit dibandingkan dengan sel hibridoma normal
pada mencit. Eleh karena itu diperlukan beberapa tahapan. 2ertama ditumbuhkan
pada mencit melalui penyuntikan sel tumor secara in %itro. $khirnya sel diinjeksikan
kembali untuk produksi asites.
-
8/18/2019 Anti Bodi Monoklonal
18/26
@erugian produksi human-antibodi monoklonal adalah.
. Berlangsung lama dan harus aktif untuk adaptasikan sel dalam perut mencit dan
selanjutnya dilakukan kokulti%asi secara in %itro selama 6 bulan.
. Sulit mendapat hewan S2F dan juga harganya mahal?
6.
$lat untuk penyinaran kadang sulit untuk mendapatkannya?
0. 2embentukan tumor pada setiap hewan sekitar -7 mlmencit dengan konsentrasi
antibodi maksimal mg 8g=ml.
C. Dasar Hibridisasi Dan Produksi Antibodi Monoklonal
Si&at dan produksi sel m'eloma dan sel linie tumor
Sebagai bahan dasar dalam pembuatan antibodi monoklonal terdapat
empat persyaratan yang harus dipenuhi antara lain '
. Sel tidak dapat mensistesi antibodi kompler atau imunoglobulin 4-chain dan 5-chain
sendiri?
. Sel tidak boleh mempunyai enDim defek, supaya setelah seleksi fusi dapat dieliminir?
6. Sel harus mempunyai sifat fusi yang yang baik, sehingga didapatkan sel hibridoma
yang banyak dan baik?
0. Sel harus dapat membawa sifat molekul dalam hibridoma untuk menginduksi
sintesis antibodi monoklonal yang tinggi.
(anpa sekresi imunoglobulin
Sel myeloma atau sel tumor mempunyai sifat fisik yang tidak dapat
memproduksi atau mensintesis sendiri antibodi secara utuh atau rantai antibodi,
tetapi dapat memproduksi setelah hibridisasi. 5al ini karena terdapat sisternalkombinasi kompartment dari kromosom , 0, (manusia) atau 3, , dan 3 pada
mencit dari sel asal, selain itu juga sel myeloma tidak dapat mensintesis antiboodi,
sehingga dapat menseleksi untuk memproduksi antibodi monoklonal yang intak
dengan kromosom sel B saja. Terdapat beberapa sel myeloma etablish
seperti maus myeloma yang berkode antara lain 26 36$g*.376, S2E-$g0 dan
26-#S-$g0- tetapi kadang terjadi mutan. Sedang 26-#S--$g0- secara
intraseluler bebas rantai kappa, tetapi tidak dapat berdifusi dengan baik.
-
8/18/2019 Anti Bodi Monoklonal
19/26
De&ek en)im untuk seleksi
Setelah dilakukan fusi terdapat empat kemungkinan populasi sel yang
berbeda yanitu tidak terjadi fusi di antara sel myeloma, tidak terjadi fusi di antara sel
limfosit, tidak terjadi hibridoma yang salah dan terjadi hibridoma yang benar. $pa
yang terjadi setelah fusi terhadap keempat macam sel fusi tersebutO Sel yang tidak
fusi dengan sel B akan mati beberapa hari setelah fusi atau paling lama 6 minggu.
Sel yang salah fusi dengan dua sel B dan satu sel myeloma, dua sel myeloma
dengan satu sel B, keduanya sel B, sel B dan sel T tidak mempunyai kemampuan
hidup dan akan mati dalam beberapa hari. Sel hibridoma yang sempurna fusi akan
tumbuh terus dan paling tidak dalam hibridisasi paling sedikit akan didapatkan sel
hibridoma sekita 1-0 meskipun masih ada sel yang tidak fusi seperti sel myeloma
yang dapat tumbuh cepat dan dapat proliferasi, maka diperlukan trik untuk
menyiasati sel tersebit agar cepat tereliminer atau mati maka perlu ditambahkan
medium hymidin inase (T@) agar terjadi defek enDim, atau
ditambahkan ypoxanthin 0uanidin "hosphoribosyl ranferase (5=2>T). "engan
adanya defek enDyme, maka sel akan mati, sedang sel hibridoma (sel fusi) tidak
akan mati.
Si&at &usi 'ang baik
Sifat fusi yang baik adalah dapat mengahsilkan sel hibridoma yang banyak.
!ika sel linie tumor sesuai dengan kriteria sebagai persyaratan membuat hibridoma
maka akan mendapatkan sel partner yang baik, dan otomatis akan menghasilkan
sel hibridoma yang baik pula. Selain itu juga tidak ditemukan sel adanya sel mutasi
pada tingkat subklone.
*ualitas Hibridoma
5ibridoma dikatakan baik jika daya sintesis antibodi monoklonal tinggi.
2ernyataan ini sangat penting jika menginginkan produksi antiboodi monoklonal
dalam kapasitas yang cukup banyak. $pakah ingin memproduksi atau mendapatkan
kultur hibridoma 1 Lgml atau 71 Lgml. Sampai saat ini sel myeloma dapat
menginduksi sintesis antibodi monoklonal. Eleh karena itu sekarang teknik ini
berkembang pesat untuk memproduksi antibodi monoklonal anti human. Selain itu
juga tidak banyak ditemukan mutagenesis pada subklone. "engan demikian melalui
-
8/18/2019 Anti Bodi Monoklonal
20/26
teknologi gen teknik kemungkinan yang akan datang didapatkan sel yang baik,
sehingga menghasilkan fusi yang baik. (>antam ' 116)
D. Cara *er+a Antibodi Monoklonal
Tidak seperti kemoterapi dan radioterapi, yang bekerja secara kurang
spesifik, tujuan pengobatan antibodi monoklonal adalah untuk menghancurkan sel-
sel limfoma non 5odgkin secara khusus dan tidak mengganggu jenis-jenis sel
lainnya. Semua sel memiliki penanda protein pada permukaannya, yang dikenal
sebagai antigen. $ntibodi monoklonal dirancang di laboratorium untuk secara
spesifik mengenali penanda protein tertentu di permukaan sel kanker. $ntibodi
monoklonal kemudian berikatan dengan protein ini. 5al ini memicu sel untuk
menghancurkan diri sendiri atau memberi tanda pada siinduk kekebalan tubuh untuk
menyerang dan membunuh sel kanker.
Sebagai contoh, rituimab, antibodi monoklonal yang dipakai dalam
pengobatan limfoma non 5odgkin, mengenali penanda protein ituimab secara efektif menyerang sel limfoma agar dapat dihancurkan siinduk
kekebalan tubuh dan membunuh sel-sel kanker.
-
8/18/2019 Anti Bodi Monoklonal
21/26
agar memberikan hasil yang terbaik sampai saat ini belumlah diketahui secara
pasti.Tahapannya '
. embuat sel kanker lebih dikenali oleh sisten 8mmun
Sistem immun akan aktif jika terdapat musuh (antigen) dalam tubuh. Sekali sisten
immun mengenali adanya musuh tubuh, maka ia akan memanggil teman-temannya
untuk melawan musuh ini. Tapi tidak selamanya sistem antibodi monoklonal
mengenali sel kanker. >ituimab bekerja agar sistem immun lebih kenal dengan sel
kanker sehingga sistem pertahanan tubuh bisa bekerja lebih efektif dalam rangka
menghajar sel kanker.
. enghambat Faktor-faktor 2ertumbuhan Sel @anker
!ika sebuah Dat kimia yang disebut sebagai =rowth Factor menempel pada
sel kanker, maka pertumbuhan sel kanker yang ditempeli akan meningkat drastis,
kalo pertumbuhan sel kankernya tambah banyak secara otomatis kankernya akan
bertambah ganas. "idasarkan fakta inilah, obat-obatan $ntibodi onoklonal seperti
cetuimab bekerja menghambat ikatan antara growht factor dengan reseptor pada
sel.
6. enghantarkan >adiasi ke Sel @anker
@ombinasi obat antibodi monoklonal dengan partikel radioaktif, kita bisamenghantarkan radiasi langsung tepat sasaran pada sel kanker. 5al ini digunakan
untuk memastikan radiasi tersebut tidak merusak sel yang sehat. "engan adanya
obat yang penggunaannya masih dalam pengawasan F"$ ini, maka efektifitas
radioterapi pada pasien kanker bisa lebih ditingkatkan.
-. Dosis dan Pemberian Antibodi
"osis dan pemberian ber%ariasi untuk setiap antibodi yang diberikan.
Sebagai contoh, rituimab, antibodi monoklonal yang umum digunakan dalam
pengobatan #54 diberikan intra%ena, melalui jarum yang masuk ke dalam pembuluh
darah , biasanya di lengan. >ituimab diberikan sebagai PtetesanQ yang berarti obat
dimasukkan dulu ke dalam kantong infus, kemudian cairan menetes perlahan ke
dalam pembuluh darah dengan mengandalkan kekuatan gra%itasi.
!ika antibodi monoklonal digunakan dalam kombinasi dengan kemoterapi,
rituimab biasanya diberikan sesaat sebelum kemoterapi pada awal setiap siklus
pengobatan. Sebelum tetesan infus diberikan, obat lain untuk mencegah beberapa
-
8/18/2019 Anti Bodi Monoklonal
22/26
efek samping antibodi monoklonal diberikan R contohnya parasetamol untuk
mengurangi demam dan anti-histamin untuk mengurangi kemungkinan reaksi alergi.
eski demikian, efek samping antibodi monoklonal umumnya ringan dan sementara
serta dapat diatasi dengan mudah. !ika terjadi efek samping saat obat diberikan,
tetesan infus dapat diperlambat atau bahkan dihentikan hingga efek samping
berakhir.
+ntuk pengobatan pertama, pasien menginap di rumah sakit atau
sementara tinggal di sana sebelum pulang ke rumah.4lanjutan biasanya lebih cepat
dan efek sampingnya lebih sedikit. @ebanyakan orang dapat mendapat pengobatan
lanjutan ini sebagai rawat-jalan dan pulang ke rumah pada hari itu juga.
. E&ek Samping Antibodi Monoklonal
Seperti semua obat, antibodi monoklonal dapat menyebabkan efek samping.
ituimab dapat menyebabkan reaksi alergi. =ejalanya dapat berupa'
- =atal atau mendadak muncul warna kemerahan
- Batuk, mengi atau sesak napas
- 4idah bengkak atau rasa bengkak di tenggorokan
- Gdema, atau pembengkakan karena kelebihan cairan dalam jaringan tubuh
-
8/18/2019 Anti Bodi Monoklonal
23/26
>eaksi alergi berat terhadap rituimab jarang ditemukan dan pasien diamati
selama masa pengobatan akan munculnya gejala-gejala ini. 2asien harus
melaporkan gejala yang dialaminya begitu muncul. Seringkali, yang perlu dilakukan
hanyalah memperlambat atau menghentikan sementara tetesan intra%ena sampai
reaksi alergi berakhir. 2asien umumnya diberikan anti-histamin sebelum mulai
pengobatan untuk membantu mencegah atau mengurangi masalah ini.
2enggunaan antibody monoclonal sebagai terapi kanker juga mampu
menimbulkan efek samping, mulai efek samping yang ringan sampai efek samping
yang menjadikan pasien dalam kondisi gawat darurat.
Gfek Samping +mum '
>eaksi alergi seperti gatal dan bengkak.
=ejala seperti flu, padahal bukan flu
#ausea
"iare
2engeringan @ulit
Gfek Samping yang jarang terjadi, namun berbahaya.
2erdarahan hebat
=angguan jantung
>eaksi anafilaksis (hipersensitif)
2enurunan jumlah hitung darah
BAB III
*ESIMPULAN
(eknik Hibridoma adalah penggabungan dua sel dari organisme yang
sama maupun berbeda sehingga menghasilkan sel tunggal berupa sel hibrid
( hibridoma) yang memiliki kombinasi dari sifat kedua sel tersebut. Teknik hibridoma
ini sangat penting untuk menghasilkan antibodi dan hormon dalam jumlah yang
besar.
-
8/18/2019 Anti Bodi Monoklonal
24/26
Salah satu hasil dari teknik hibridoma ini adalah antibodi monoklonal .
$ntibodi monoklonal adalah antibodi yang diperoleh dari suatu sumber tunggal atau
sel klona yang hanya mengenal satu jenis antigen. 2embentukan antibodi
monoklonal dilakukan dengan menggunakan kelinci atau tikus.
-
8/18/2019 Anti Bodi Monoklonal
25/26
sehat. "engan teknologi yang ada, dapat dibuat antibodi monoklonal yang hanya
menyerang protein dan menyerang sel-sel tanpa mempengaruhi sel-sel yang sehat.
*egunaan antibodi monoklonal lainn'a adala, sebagai berikut
. untuk mendeteksi kandungan hormon korionik gonadotropin ( 5
-
8/18/2019 Anti Bodi Monoklonal
26/26
&atson, !ames "., etc. **. 67+ 8ekombinan$ Suatu "ela,aran Singkat . Grlangga,
!akarta.
http://4putradaritimur.blogspot.com/2012/05/laporan-anti-bodi-monoklonal.html
http://4putradaritimur.blogspot.com/2012/05/laporan-anti-bodi-monoklonal.htmlhttp://4putradaritimur.blogspot.com/2012/05/laporan-anti-bodi-monoklonal.html