diagnóstico laboratorial das infecções fúngicas

Diagnóstico laboratorial das infecções fúngicas

Universidade Estadual do Sudoeste da BahiaProjeto de Extensão

Prof. Dr. Gildomar Lima Valasques Junior

Doutor em Biotecnologia

Jequié

2015

Introdução

• Diagnóstico micológico:

– Exame microscópico

• Visualiza a morfologia

– Exame em cultivo

• Isola o micro-organismo para posterior identificação

– Necessária uma suspeita de diagnóstico

– Transporte adequado

– Meio e condições de cultivos adequados

– Podem apresentar-se como filamentosos ou leveduriforme

• Aspectos gerais do laboratório

– Área de trabalho

• Etiquetas de biossegurança

• Riscos biológicos

• Evitar entrada de pessoas desautorizadas

• Evitar consumo de bebidas e alimentos

– Recursos humanos

• Qualificação para o trabalho

• Treinamento específico

Introdução

• Aspectos gerais do laboratório

– Controle de qualidade

• Equipamentos com registro de uso

• Vidraria sempre lima e estéril

• Reagentes sempre dentro da validade e nos locais corretos

• Meios de cultura armazenados de maneira correta e validados quanto a esterilidade

• Livro de registro

• Cuidados com amostras biológicas

Introdução

Procedimentos Laboratoriais

• Raspado de pelo, pele e unha

– Preparação para a coleta

• Identificar o recipiente

• Separar os materiais de uso:– Lâmina, bisturi, tesoura, álcool etc.

• Pele:– Assepsia com álcool a 70%

– Raspar os bordos inflamados

– Colher a amostra em 2 lâminas de microscopia ou placa de petri

• Raspado de pelo, pele e unha

– Pele

• Método de porto– Adicionar fita colante transparente à lesão

– Pressionar levemente

– Retirar a fita

– Observar os aspectos das colônias ao microscópio

Procedimentos Laboratoriais

• Raspado de pelo, pele e unha

– Unha

• Assepsia com álcool a 70%

• Cortar a unha até o limite da lesão

• Coletar o material subungueal com lâminas estéreis

• Encaminhar ao laboratório

Procedimentos Laboratoriais

Esculpidor de Lecron

• Raspado de pelo, pele e unha

– Pêlo

• Não necessita assepsia

• Selecionar os pelos infectados (mínimo de 15)

• Remover com uma pinça estéril

• Colocar em recipiente limpo, seco e estéril

Procedimentos Laboratoriais

• Semeadura para pele, unha e pêlo

– Usar Ágar sabouraud com clorafenicol inclinado

• Suspeita de pitiríase vesicolor acrescentar azeite de oliva

• Com uma pinça de platina em L Transferir o material para o tubo

• Incubar a 30°C por 4 semanas

Procedimentos Laboratoriais

• Raspado de pelo, pele e unha

– Exame direto

• KOH 10-20% sobre uma lâmina de microscopia

• Depositar um fragmento do material e colocar a lamínula

• Aguardar a digestão (30min)

• Observar no microscópio (40X)– Hifas regulares e septadas

– Hifas escuras

– Organismos leveduriformes

– Nódulos compostos por fungos ligados ao pêlo

Procedimentos Laboratoriais

• Raspado de pelo, pele e unha

– Cultura

• Positivo para Levedura

Procedimentos Laboratoriais

• Raspado de pelo, pele e unha

– Cultura

• Positivo para fungo filamentoso

Procedimentos Laboratoriais

• Materiais de fragmento

– Coleta

• Identificar o recipiente

• Biópsia realizada pelo médico

– Semeadura

• Meio de cultura específico para a suspeita a depender do local do material obtido

• Fragmentar o objeto com bisturi estéril

• Incubar a 30°C e observar por 4 a 12 semanas– Suspeita de Histoplasmose

Procedimentos Laboratoriais

• Materiais de fragmento

– Exame direto

• Colocar uma gota de soro fisiológico na lâmina

• Esfregar um ou mais fragmentos na lâmina

• Colocar a lamínula

• Observar no microscópio (40X)– Organismos leveduriformes

– Hifas septadas de cor castanha ou marron

– Hifas claras sem septo

Procedimentos Laboratoriais

• Materiais de fragmento

– Coloração de gram

• Levedura é gram positivo

Procedimentos Laboratoriais

• Materiais de fragmento

– Realizar cultura

• Positivo para leveduras– Morfologia característica

• Positivo para fungo filamentoso– Morfologia característica

Procedimentos Laboratoriais

• Fungo de Líquor

– Coleta:

• Realizado pelo clínico

– Semeadura

• Cultivo em ágar niger para identificação de criptococos

• Teste de fenoloxidase

Procedimentos Laboratoriais

• Fungo de Líquor

– Semeadura

• Técnica de filtração em membrana

Procedimentos Laboratoriais

• Fungo de Líquor

– Exame direto

• Usado quando a disponibilidade de material é baixa

• Nigrosina– Numa lâmina colocar 1g de nigrosina

– Adicionar uma porção do sedimento do líquor

– Colocar a lamínula

» Positivo para leveduras semelhantes a cryotococcus sp

» Negativo

Procedimentos Laboratoriais

• Fungo de Líquor

– Semeadura

• Teste de urease

Procedimentos Laboratoriais

• Fungos de materiais líquidos

– Coleta:

• Punção de líquido (Pleural, ascítico, pericárdio, sinovial) ou aspirado gástrico

• Colocar em frasco estéril

– Semeadura

• Meio Ágar Sabouraud e BHI inclinado

• Centrifugar o material

• Fazer estrias com o precipitado

• Incubar por 30 dias a 30°C

Procedimentos Laboratoriais

• Fungos de materiais líquidos

– Exame direto

• Colocar 1 gota do sedimento

• Colocar a lamínula

• Aumentar em 40X– Aspectos das leveduras

– Aspectos morfológicos das hifas

• Usar Nigrosina se suspeita de Criptococose

• Coloração de gram– Leveduras gram positiva

Procedimentos Laboratoriais

• Fungos de materiais líquidos

– Cultura

• Positivo para levedura

• Positivo para fungo filamentoso

Procedimentos Laboratoriais

• Fungos de abscessos e secreções

– Coleta

• Punção de abscessos fechados

• Local já exposto– Lavar com soro fisiológico estéril

– Coletar com alça microbiológica descartável

– Coletar o material e passar pra solução salina estéril

– Refrigerar a 4°C por no máximo 4h

Procedimentos Laboratoriais

• Fungos de abscessos e secreções

– Coleta

• Secreção de conduto auditivo externo

• Secreções oculares

• Secreções de nariz e seios paranasais

• Secreções vaginais

Procedimentos Laboratoriais

• Fungos de abscessos e secreções

– Semeadura

• Ágar Sabouraud e Ágar BHI

– Materiais fluidos

• Centrifugar

• Realizar estrias com o precipitado

• Incubar por 4 semanas a 30°C

– Materiais mucóides (pús)

• Digerir com acetil-cisteína

• Aguardar 30min a 24h para digestão

• Proceder a semeadura

Procedimentos Laboratoriais

• Fungos de abscessos e secreções

– Cultura

• Positivo para Levedura– Comumente Candida

• Positivo para fungos filamentosos– Comumente aspergillus ou zigomicetos

Procedimentos Laboratoriais

• Fungos de secreções do Trato respiratório

– Coleta

• Catarro (pouca representatividade clínica)

• Broncoscopia

• Aspiração traqueal

• Escarro– Realizar higiene bucal

– Gargarejar com água fervida

– Recolher o escarro em frasco estéril

– Evitar contaminação com a saliva

Procedimentos Laboratoriais

• Fungos de secreções do Trato respiratório

– Semeadura

• Ágar sabouraud

• Ágar BHI

• Materiais fluidos devem ser centrifugados

• Semear o sedimento em estrias

• Incubar por 14 dias a 12 semanas a 30°C

– Exame direto

• 1 gota de solução fisiológica na lâmina

• Colocar a lamínula

• Observar no microscópio

Procedimentos Laboratoriais

• Fungos de secreções do Trato respiratório

• Exame direto com KOH 20%/DMSO– 1 gota na lâmina

– 1 gota do material

– Colocar a lamínula

– Esperar 30min

– Observar no microscópio (40X)

• Visualização com Nitrogrosina– Criptococose

• Coloração de gram– Gram positivo

• Cultura– Levedura (Candida ou criptococcus) ou Fungo

Aspergillus

Procedimentos Laboratoriais

• Fungos na urina

– Coleta

• Sondagem ou citoscopia

• Coleta de jato de urina médio– Processamento rápido da amostra

– Semeadura

• Meio ágar sabouraud em placa de petri

• Semeadura por esgotamento alça calibrada

• Infecção– Acima de 1000UFC/mL

Procedimentos Laboratoriais

• Fungos de urina

– Exame direto

• Colocar 1gota de solução fisiológica sobre a lâmina

• Colocar 1 ou 2 gotas do sedimento

• Colocar a lamínula

• Observar no microscópio

– Coloração de nigrosina

• Suspeita de criptococose

– Coloração de gram

• Leveduras são gram positivo

Procedimentos Laboratoriais

• Fungos de urina

– Cultura

• Candida e criptococcus são os mais isolados

• Raro encontrar fungos filamentosos

Ágar niger

Procedimentos Laboratoriais

Aspergillus

Trichophyton

Criptococcus

Candida

Rhysopus

Fusarium

Diagnóstico laboratorial das infecções fúngicas

Universidade Estadual do Sudoeste da BahiaProjeto de Extensão

Prof. Dr. Gildomar Lima Valasques Junior

Doutor em Biotecnologia

Jequié

2015