232

Studi Patologi Kejadian Cysticercosis pada Tikus Putih

(PATHOLOGICAL STUDIES OF CYSTICERCOSIS CASES IN RATS )

I Ketut Berata1, Anak Agung Gde Arjana1, I Wayan Sudira1,I Made Merdana1, I Ketut Budiasa1, Ida Bagus Made Oka2

1Laboratorium Patologi, 2Laboratorium ParasitologiFakultas Kedokteran Hewan, Universitas Udayana

Jl Sudirman, Denpasar, Bali. Telp. 0361 223791E-mail : iketutberata@yahoo.co.id

ABSTRACT

Rats are commonly used as animal model in pathological and reproduction research, butunfortunately they are often infected with cysticercosis. The objective of this research was to determinethe pathological changes the of the rats (Rattus novergicus) tissues affected with cysticercus. Thisresearch using 24 of female rats. They were adapted to a new environment for a week and the feeding andwater were provided ad libitum. At the end of adaptation period rats were necropsied and the visceralorgans were examined for pathological changes especially the present of cysticercosis. The liver and kidneyof each rat were soaked in 10% phosphate buffered formalin. Following dehydration process, tissue wereembedded in paraplast, cut at 5 micron and stained with Harris hematoxylin eosin (HE). The resultshowed that 8 of 24 rats were affected by cysticercosis on the liver. The histopathological changes werenecrotic lesions and eosinophylic cells infiltration around the cysticercosis lesion. The results showed that8 of 23 rats were affected by cysticercosis. The presence of necrosis and cells inflammation could interferethe results of the study when such a rats are used. It is therefore necessary to screen rats for cysticercosis.

Key words : Prevalence, Histopathology, Cysticercosis, Necrose

ABSTRAK

Tikus putih banyak digunakan sebagai hewan coba pada penelitian patologi, reproduksi, dansebagainya, tetapi tikus seringkali mengalami sistiserkosis yang dapat mengganggu hasil penelitian.Untuk itu perlu dilakukan penelitian yang bertujuan mempelajari patologi organ tikus putih (Rattusnovergicus) yang terinfeksi cysticercosis. Tikus diadaptasikan dengan lingkungan baru selama seminggudan diberikan pakan serta air minum ad libitum. Tikus dinekropsi dan seluruh organ dalam diperiksaterhadap adanya perubahan patologis terutama adanya infeksi Cysticercus. Jaringan hati dan ginjaldiambil dan dimasukkan ke dalam pot yang telah diisi formalin 10% berbuffer fosfat. Setelah melaluiproses dehidrasi, jaringan diblok dalam parafin, dipotong dengan ketebalan 5 mikron dan diwarnai denganpewarnaan Harris hematoksilin eosin (HE). Hasil pemeriksaan patologi anatomi diperoleh bahwa 8 dari24 ekor tikus terinfeksi Cysticercus pada hati. Pada pemeriksaan histopatopatologi diamati adanya lesinekrosis disertai infiltrasi sel-sel radang eosinofil di sekitar lesi sistiserkosis. Adanya lesi histopatologisberupa nekrosis disertai infiltrasi sel radang dapat mengacaukan hasil penelitian jika tikus tersebutdigunakan untuk penelitian. Dari penelitian ini dianjurkan bahwa perlu uji skreening terhadap sitiserkosisjika memilih tikus sebagai hewan model untuk penelitian.

Kata-kata kunci : Prevalensi, Histopatologi, Cysticercus, nekrosis

Jurnal Veteriner Desember 2010 Vol. 11 No. 4 : 232-237ISSN : 1411 - 8327

233

PENDAHULUAN

Peran hewan coba sebagai hewan modeldalam penelitian-penelitian ilmiah telah menjadisejarah panjang dalam upaya para penelitimenyelamatkan manusia dan lingkungannya.Salah satu hewan coba yang banyak digunakandalam penelitian adalah tikus putih (Rattusnovergicus). Tikus putih banyak digunakanpada penelitian-penelitian toksikologi,metabolisme lemak, obat-obatan maupunmekanisme penyakit infeksius. Tikus putih baikdigunakan dalam penelitian karena mudahdipelihara, mudah berkembang biak sehinggacepat mendapatkan hewan coba yang seragamdan mudah dikelola di laboratorium. Penelitiantentang obat-obatan dan keracunan banyakmenggunakan hewan coba tikus dan mencit,karena mudah diperiksa melalui organ-organutama yang berperan yaitu hati dan ginjal(Leickteig, et al., 2007). Oleh karena itu organhati dan ginjal harus dalam keadaan sehat baiksecara klinis, patologi anatomi maupunhistopatologi, jika menggunakan tikus sebagaihewan model. Penetapan status sehat hanyaberdasarkan inspeksi banyak dilakukanterutama pada peneliti-peneliti pemula. Jikasecara klinis sehat, tetapi ternyata di dalamtubuh hewan coba terdapat parasit, tentu akandapat mengacaukan hasil penelitian atauvaliditas penelitian diragukan. Hal ini sangatberpengaruh terutama jika parasit tersebutterkait dengan fokus penelitian, misalnyainfeksi Cysticercus pada hati akan sangatmempengaruhi hasil penelitian tentang fungsihati. Infeksi Cysticercus secara klinis tidakmenunjukkan gejala, sebagaimana pada tikusyang digunakan sebagai penelitian pendahu-luan. Kejadian sistiserkosis terutama padahepar banyak dilaporkan terdapat di India (Preetdan Prakash, 2002). Di Indonesia belum banyakdilaporkan tentang kejadian sistisrkosis padatikus. Mengingat tikus merupakan makanankucing dimana manusia sangat dekat dengankucing, maka Cysticercosis menjadi objekpenelitian yang penting baik dari aspek hewankesayangan maupun hewan coba. Sebagaihewan kesayangan, maka kucing sangatmungkin sebagai inang definitif dari Cysticercussp pada tikus.

Penelitian pada mencit dilaporkan bahwabetina cenderung menolak pejantan yangterinfeksi Cysticercus sp dari Taenia crassiceps(Gourbal et al., 2004). Cysticercus sp. banyakdilaporkan terjadi pada ternak sapi, babi, anjing,

kucing dan mamalia lainnya. Tetapi belum adalaporan tentang Cysticercosis pada tikus.Penelitian observasional tentang sistiserkosispada tikus sebagai hewan coba bertujuan untukmempelajari patologi organ tikus putih yangterinfeksi Cysticercus sp.

METODE PENELITIAN

Sampel berupa tikus putih strain Wistar,jenis kelamin betina sebanyak 24 ekor yangdijual suplayer tikus untuk hewan coba di KotaDenpasar. Berat badan rata-rata tikus adalah120 gram

Sebelum dinekropsi semua tikus dipeliharasebagaimana mestinya yaitu diberi pakan peletkomersial (CP 521® C.V. Charun Phokpand) danair minum ad libitum. Tikus dipelihara dalamkandang plastik yang diberi penutup kawat dandiberi alas sekam. Setiap kandang diisi 6 ekortikus secara acak.

NekropsiLangkah-langkah dalam melakukan

nekropsi sesuai dengan metode Hussein (2008).Sebelum nekropsi, tikus dieuthanasia denganmenggunakan ether di dalam kotak plastik.Nekropsi dilakukan sesuai prosedur nekropsipada mamalia, kemudian seluruh organ dalamdiperiksa secara patologi anatomi (makroskopik).Organ-organ dalam seperti hati, ginjal, paru-paru dan usus diperiksa. Hanya organ-organyang mengandung Cysticercus sp. diambildengan ukuran 1x1x1 cm dan dimasukkandalam formalin buffer fosfat 10% selanjutnyadiproses untuk pembuatan sediaan histopa-tologis.

Tahap-tahap Pembuatan Sediaan Histo-patologi

Tahap pembuatan sediaan histopatologidilakukan sesuai metode Kiernan (2001). Fiksasijaringan dengan cara merendam dalam formalinbuffer fosfat 10% selama 24 jam, kemudian diiris(trimming) agar dapat dimasukkan dalam kotakuntuk diproses dalam tissue processor. Tahapberikut, jaringan tersebut dimasukkan ke dalamalkohol 70%, alkohol 80%, alkohol 90%, alkohol96%, toluena 1 dan toluena 2 masing-masingselama 2 jam. Selanjutnya jaringan dimasukkanke dalam parafin cair dengan suhu 56oC selama2 jam sebanyak 2 kali. Jaringan kemudiandiambil dengan pinset, dilanjutkan denganpemblokan menggunakan parafin blok yang

Berata et al Jurnal Veteriner

234

berukuran sesuai dengan ukuran tempat blokdi mikrotom. Pemotongan (cutting) dilakukandengan menggunakan mikrotom denganketebalan 4-5 µm. Jaringan yang terpotongdikembangkan di atas air dalam waterbath,kemudian ditangkap dengan gelas objek.Kemudian dikeringkan dalam suhu kamar danpreparat siap diwarnai dengan HE. Tahapanpewarnaan HE metode Harris adalah sebagaiberikut. Preparat di atas gelas objek direndamdalam xylol I 5 menit, dilanjutkan xylol II, IIImasing-masing 5 menit. Kemudian preparatdirendam dalam alkohol 100% I dan II masing-masing 5 menit, selanjutnya ke dalam aquadesdan kemudian direndam dalam Harrishematoxylin selama 15 menit. Celupkan kedalam aquades dengan cara mengangkat danmenurunkannya. Preparat kemudian dicelup-kan ke dalam acid alkohol 1% selama 7-10celupan, direndam dalam aquades 15 menit, dandalam eosin selama 2 menit. Selanjutnyapreparat direndam dalam alkohol 96% I dan IImasing-masing 3 menit, alkohol 100% I dan IImasing-masing 3 menit, dan dalam xylol IV danV masing-masing 5 menit. Preparat dikeringkandan dilakukan mounting dengan menggunakanentelan. Preparat diperiksa di bawah mikroskopcahaya.

Pemeriksaan Patologi Anatomi danHistopatologi

Pemeriksaan patologi anatomi pada organ-organ dalam yaitu hati dan ginjal dilakukanterhadap adanya Cysticercus sp. berupa lesiberbentuk gelembung putih. Sediaanhistopatologi organ yang mengandungCysticercus sp. diperiksa terhadap adanyajaringan yang diinvasi dan perubahanhistopatologi pada struktur jaringan/selpenyusunnya, infiltrasi sel-sel radang, serta lesinekrosis yang terjadi.

Analisis Hasil PenelitianData prevalensi kejadian sistiserkosis dan

hasil pemeriksaan patologi anatomi danhistopatologi dianalisis secara deskriptif.

HASIL DAN PEMBAHASAN

Setelah tikus dinekropsi, seluruh organ-organ dalam diperiksa terhadap adanya lesi-lesipatologis. Berdasarkan hasil pemeriksaanpatologi anatomi diperoleh 8 dari 24 ekor tikus

putih terinfeksi Cysticercus sp. pada hatinya.Tidak ditemukan adanya lesi sistiserkosis padaginjal maupun organ lainnya. Lesi infeksiCysticercus ditandai dengan adanya gelembungputih pada permukaan jaringan hepar. Setiaptikus mengandung lesi tersebut bervariasiantara 1 sampai 3 gelembung. Setelah diperiksadi bawah mikroskop tampak skolek danrostelum Cysticercus sp. (Gambar 1). Identifikasiterhadap spesies Cysticercus sp tersebut belumdapat ditentukan.

Prevalensi sistiserkosis pada tikus putihyang disediakan untuk penelitian-penelitian diKota Denpasar adalah 33,33%. Hasil inimenunjukkan prevalensi yang cukup tinggi dandapat menyebabkan hasil-hasil penelitianterutama yang berfokus pada uji fungsi hatimenjadi tidak valid. Pada penelitian-penelitianuntuk mengetahui metabolisme obat-obatan,toksin dan sejenisnya, maka organ hati danginjal merupakan organ yang utama harussehat pada hewan coba (Lickteig et al., 2007).Oleh karena itu pemilihan tikus sebagai hewancoba sangat menentukan validitas hasilpenelitian. Pemeriksaan klinis dapat dilakukandengan inspeksi, adanya infeksi Cysticercuspada tikus sulit diketahui. Tetapi ada laporanpenelitian untuk mengetahui adanya infeksiCysticercus pada tikus dilakukan dengan caramemeriksa cairan plasma darah atau cairanperitoneal. Pada tikus yang terinfeksiCysticercus terjadi peningkatan ion chlorindalam plasma dan dapat digunakan sebagaiteknik diagnosis (Preet dan Prakash, 2002).Adanya infeksi Cysticercus pada tikusmenunjukkan adanya kesalahan manajemenpemeliharaan tikus percobaan. Oleh karena itusistem pemeliharaan hewan coba sangat pentingmemperhatikan lingkungan, pakan, air minumserta faktor-faktor penyebab kontaminasi dalamkandang (Muthalib, 2008; Smith dan Mangkoe-widjojo, 1987). Penelitian sistisekosis yangdihubungkan dengan perubahan tingkah lakudalam perkawinan rodensia (Gourbal et al.,2004)merupakan faktor yang perlu diperhatikandalam penggunaan tikus sebagai hewan model.Dilaporkan bahwa infeksi Cysticercus padamencit jantan menyebabkan mencit betinamenolak untuk dikawini.

Hasil pemeriksaan histopatologi hati tikusyang terinfeksi Cysticercus memperlihatkanterjadi perubahan berupa hilangnya jaringanhepar akibat invasi Cysticercus, nekrosisdisertai infiltrasi sel-sel radang baik di sekitar

Jurnal Veteriner Desember 2010 Vol. 11 No. 4 : 232-237

235

daerah invasi parasit maupun pada arteri atauvena (Gambar 2). Sel-sel radang yang dominanmenginfiltrasi hepar tikus terinfeksi Cysticercusadalah eosinofil (Gambar 3).

Hasil pemeriksaan histopatologi lebihmeyakinkan bahwa validitas penelitian-penelitian yang berkaitan dengan aspek

histopatologi hati sangat dipengaruhi oleh akibatinfeksi Cysticercus. Akibat peradangan yangterjadi, menyebabkan peningkatan enzimtransaminase baik serum glutamic piruvictransaminase (SGPT) maupun serum glutamicoxaloacetic transaminase (SGOT). Peningkatanenzim transaminase pada sistiserkosis tersebut

Gambar 2. Tampak batas antara invasi Cysticercus sp.(cyst) dengan jaringan hati bagian venasentralis yang terdesak (v) (Gambar kiri). Gambar kanan menunjukkan strukturjaringan hati rusak akibat invasi Cysticercus sp.

Gambar 3. Terdapat ianfiltrasi sel-sel radang eosinofil akibat infeksi Cysticercus sp.(kiri). Strukturjaringan hepar tikus yang normal (kanan)

Berata et al Jurnal Veteriner

Gambar 1. Lesi Cysticercus sp. pada permukaan hati. Tampak lokasi cyst ditandai dengan adanyagelembung putih (kiri). Cysticercus sp. setelah diperiksa di bawah mikroskop tampakskolek dan rostelum seperti gambar kanan

236

akan mengacaukan pemeriksaan hasilpenelitian yang diharapkan. Selain menga-caukan hasil pemeriksaan fungsi hepar, jugadapat mempengaruhi organ lain terutama ginjalkarena regulasi dari bahan yang diekskresikanakan melalui ginjal (Lickteig et al., 2007).Untuk mengatasi infeksi Cysticercus secaraumum dapat diberikan obat-obat antiparasit.Obat antitumor yang dikombinasikan denganantiparasit seperti fenbendazole (Gao et al., 2008)ternyata memiliki daya kerja sinergis yaitumenurunkan pertumbuhan tumor dibanding-kan obat antitumor jika diberikan sendiri. Olehkarena itu pemberian fenbendazole tidakdianjurkan dalam penelitian penelitianantitumor, karena akan mengacaukan hasilpenelitian. Mekanisme peran fenbendazoledalam kombinasi terapi antitumor belumdiketahui pasti (Gao et al., 2008). Penelitian-penelitian kanker pada hewan coba mutlakmemerlukan hewan coba yang bebas penyakit(Hamid, 2008). Secara umum perlakuan hewancoba sebelum digunakan penelitian harus benar-benar terkontrol pakan, minum, lingkungan danpenyakitnya (Hariharan, 1993).

SIMPULAN

Perubahan histopatologi berupa nekrosisjaringan hepar disertai infiltrasi sel-sel eosinofilmenunjukkan bahwa lesi sistiserkosis padatikus dapat mengurangi validitas penelitian,jika tikus tersebut digunakan sebagai hewancoba.

SARAN

Perlu dilakukan uji skrining antara laindengan serologi atau uji kawin yang bertujuanmendiagnosis apakah tikus hewan cobaterinfeksi Cysticercus sp. sebelum digunakandalam penelitian.

UCAPAN TERIMA KASIH

Terima kasih kepada Kepala LaboratoriumPatologi, Farmakologi dan Parasitologi FKHUnud, atas fasilitas yang diberikan untukpenelitian ini.

DAFTAR PUSTAKA

Gao P, Dang CV, Watson J. 2008. UnexpectedAntitumorigenic Effect of Fenbendazolewhen Combined with SupplementaryVitamins. J Am Assoc Lab Anim Sci. 47(6):37–40.

Gourbal B, Fran E, Gabrion C. 2004. A study ofMate Choice in Mice with ExperimentalTaenia crassiceps cysticercosis: Can mmalesChoose? Canadian J.Zoology 82(4), pp. 635-643

Hamid IS. 2008. Cancer Models for AnimalLaboratory. Workshop on the Care and Useof Lab An Res. Collaboration Fac.Vet.Med.Airlangga Univ. and Fac.Vet. Med. UPM

Hariharan S. 1993. Husbandry and Hygiene forMaintaining Healthy Animal Colonies. In:Fujikura, T., Hovell, GJR., Hanninen, Oand Pelkonen, K (Eds). Guidelines forBreeding and Care of Laboratory Animals.57-64

Hussein FN. 2008. Anesthesia and Euthanasiain Laboratory Animals. Workshop on theCare and Use of Lab An Res. CollaborationFac.Vet.Med. Airlangga Univ. and Fac.Vet.Med. UPM. Surabaya.

Kiernan JA. 2001. Histological andHistochemical Methods. 3rd Ed. Toronto.Arnold Pub. Pp. 330-354.

Lickteig AJ, Fisher CD, Augustine LM,Aleksunes LM, Besselsen DG, Slitt AL,Manautou JE, Cherrington NJ. 2007. EffluxTransporter Expression and AcetaminophenMetabolite Excretion Are Altered in RodentModels of Nonalcoholic Fatty Liver Disease.Drugs, Metabolism and Disposition J.35:1970-1978.Akses tgl.4 Agustus 2009.

Lee G, Luna HT. 1968. Manual of HistologicStaining Methodes. New York-Toronto-London-Sydney. McGraw-Hill.1-258.

Malole, MBM. And Pramono, CSU. 1989.Penggunaan Hewan-Hewan Percobaan diLaboratorium. Bogor. PAU BioteknologiIPB.1-161

Muthalib AR. 2008.Diseases and ManagementRelated Problems in Rodents and Rabbits.In: Guidance Workshop on the Care andUse of Laboratory Animal Research.Collaboration Faculty of Vet.Med.AirlanggaUniv. and Faculty of Vet.Med.Univ.PutraMalaysia.p.83-95

Jurnal Veteriner Desember 2010 Vol. 11 No. 4 : 232-237

237

Berata et al Jurnal Veteriner

Preet S, Prakash S. 2002. Cysticercosis in RatInfected with Cysticercus fasciolaris (Rud):the Possible Role of Plasma and CysticAnions in Diagnosis. J Parasitic Disease.24(2): 135-139

Smith JB, Mangkoewidjojo S.1987. The Care,Breeding and Management of ExperimentalAnimals for Research in the Tropics.Canberra. IDP. 1-52