роггенбук2

НовыеНовые

подходыподходы

кк

диагностикедиагностике антифосфолипидногоантифосфолипидного

синдромасиндрома

ДиркДирк

РоггенбукРоггенбук

КонфликтКонфликт

интересовинтересов: : генеральныйгенеральный

директордиректор

компанийкомпаний ««MedipanMedipan»»

ии

««Generic Assays GmbHGeneric Assays GmbH»»

1

Роггенбук Д.,IV Всероссийская школа по клинической иммунологии, 2013г.

Грэм

Хьюз

◦

Аутоиммунное

заболевание, сопровождающееся

тромбозом кровеносных

сосудов

Клинические

проявления:

◦

Привычное

невынашивание

беременности, повторные

случаи внутриутробной

потери

плода

◦

Тромбоцитопения, венозные

или

артериальные

тромбозы

Классификационные

критерии

АФС, г. Саппоро, 1999

Пересмотренные

критерии

АФС, г. Сидней

2006

Основные

представления

об антифосфолипидном

синдроме

(АФС)

2


Лабораторные

критерии

(для

постановки

диагноза необходимо

наличие, по

крайней

мере, одного

признака)o 2 и

> случаев

выявления

антифосфолипидных

антител

в

течение

12 недель

o средний/высокий

уровень

антител

к

кардиолипину

класса IgG и/или

IgM

в крови

o средний/высокий

уровень

антител

к

2

-гликопротеин

I класса

IgG и/или

IgM

в

сыворотке

крови

o наличие

волчаночного

антикоагулянта

Понятие

об

АФС

3


4

Летальность

от

АФСКривая выживаемости Каплана-Мейера, иллюстрирующая 94%-нуювероятность выживаемости группыбольных АФС спустя 5 лет с моментавключениявисследование

Cervera R et al. Ann Rheum Dis. 2009;68:1428-1432


5


аспекты

53/1000 (5.3%)

смертельных

исходов

вследствие:o бактериальных

инфекций

20.8%

o острого

инфаркта

миокарда

18.9%

o инсульта

13.2%

o катастрофического

АФС

9.4%

o эмболии

легочной

артерии

9.4%

Влияние

других

факторов

(системной

красной

волчанки, АФС, иммунотерапии, антикоагуляции, возраста) незначительно.

Cervera R et al. Ann Rheum Dis.

2009;68:1428-1432


66

Симптоматика

АФС


проявления

200/1000 (20.0%) –

различные

проявления

АФС

166/1000 текущие

тромботические

заболевания

(ТЗ)

o инсульт

2.4%

o преходящее

ишемическое

нарушение мозгового

кровообращения

2.3%

o тромбоз

глубоких

вен

2.1%

o эмболия

легочной

артерии

2.1%

Cervera R et al. Ann Rheum Dis.

2009;68:1428-1432


фосфолипидкофактор

антитело

человека

anti-huIgG-HRP

кофактор

антитело

человека

anti-huIgG-HRP

Фосфолипиды, взаимодействующие

с

кофакторомкардиолипин

фосфатидилсерин

фосфатидилинозитол

Кофакторы2


I

протромбин

протеины

S и

C

аннексин

V

Форматы

ИФА

Методы

диагностики

7


фосфатидилсерин

фосфатидилинозитол

кардиолипин

8

Мультилинейный

дот-анализ

(МЛДА)

2 -гликопротеин

I

Egerer K et al. Arthritis Res Ther. 2011;13(4):R118


9

Твердые фазы ИФА и МЛДА

МЛДА ИФА

Conrad K et al. Ann N Y Acad Sci 2007;1109:256-264

гидрофобный

гидрофильный


10

Антифосфолипидные

антитела, выявленные

методом

дот-анализа

1. аутоантитела

к

чистым

фосфолипидам

2. аутоантитела

к

кофакторам, взаимодействующим

с

чистыми

фосфолипидами

3.

аутоантитела

к

β2-

гликопротеину

I

Roggenbuck et al. Autoimmun Rev.

2012;11:821–826


1111

2B. аутоантитела

к

кофакторам

в

префор-

мирующих

иммуных

комплексах

взаимодействующих

с


2A. аутоантитела

к

кофакторам, взаимо-

действующим

с

чистыми


и

менившим

конформацию

Иммуные

комплексы

из

сыворотки

крови

Антикофакторные


методом



121212

2A. Определение

фор-

мирующихся

иммуных

комплексов

2A. кофактор

взаимо-

действует

с

чистыми


и

меняет

конформацию

2A. аутоантитела

взаимо-

действуют

с

новыми

эпитопами

кофактора



методом



131313

2B. Определение

фор-


иммуных


2B. аутоантитела

взаимо-

действуют

с

растворимыми

кофакторами

в

первую

очередь

2B. кофакторы

префор-


иммуных


взаимо-

действуют

с

фосфолипидом



методом



141414

План

клинического

исследования

Пациенты

85 пациентов

с

АФС

65 контрольных

пациентов

79 доноров

крови

Методы

ИФА

(анти-кардиолипин

и

aнти-2


I IgG + IgM)


дот-анализ

(МЛДА)


15

Результаты

anti-CL IgG МЛДА anti-CL IgM МЛДА

positive negative n positive negative n

ИФА positive 32 15 47 ИФА positive 22 11 33

negative 11 171 182 negative 20 176 196

n 43 186 229 n 42 187 229

Тест

МакНамара:

расхождение

показателей

для

anti-CL IgG (1.75%) и

anti-CL IgM (3.93%)

было

недостоверным

(P = 0.5563, P = 0.1508, соответственно)

Egerer K et al. Arthritis Res Ther. 2011;13(4):R118


1616

РезультатыТест

МакНамара: расхождение

показателей

для

anti-β2GPI IgG

(1.75%) и

anti-β2GPI IgM (0.87%) было

недостоверным

(P = 0.3438, P = 0.1508, соответственно)

anti-β2GPI IgG МЛДА anti-β2GPI

IgM МЛДА

positive negative n positive negative n

ИФА positive 24 3 27 ИФА positive 21 16 37

negative 7 195 202 negative 14 178 192

n 31 198 229 n 35 194 229


17

чувствительнос

ть95%

CIспецифично

сть95%

CI +LR 95%

CI -LR 95% CI

по

меньшей

мере,

для

одного

аФЛ

антитела,

по

методу

ИФА

58.847.6 –

69.495.8 91.1 –

98.5 14.1 6.3 –

31.5 0.4 0.3 –

0.6

по

меньшей

мере,

для

одного

аФЛ

антитела,

по

методу

МЛДА

67.956.8 –

77.689.6 83.4 –

94.0 6.5 4.0 –

10.8 0.4 0.3 –

0.5

по

меньшей

мере,

для

одного

аФЛ

антитела

класса

IgG или

3 аФЛ

антител

класса

IgM,

по

методу

МЛДА

67.156.0

–

76.996.5 92.1

–

98.9 19.3 8.1

–

46.3 0.3 0.2

–

0.5

Сравнительная

характеристика

ИФА

и

МЛДА



с

АФС

8

самопроизвольных

абортов

62 случая

тромбоцитопении

57

случаев

тромбоза

глубоких

вен


с

системной

красной

волчанкой

10 мини-инсультов

5 инсультов

18

План

клинического

исследования


19


анализа

aPL IgG, полученные в ходе МЛДА при АФС

n = 85 aβ2GPI aCL aPS aPI

22 ++

99 ++

11 ++ ++

22 ++ ++

2020 ++ ++ ++

77 ++ ++ ++ ++

00 ++

00 ++

00 ++ ++

……

4444 -- -- -- --


20

IgM ,

выявленный

методом

МЛДА

aCL aß2‐GP I aPI aPS 3 aPL IgM

Мини‐

инсультp = 0.04 p = 0.001 p = 0.02 p = 0.02

Мини‐

инсульт

и/или

инсульт

p = 0.03 p = 0.003 p = 0.01

IgM,

выявленный

методом

ИФА

aCL aß2‐GP I aPI aPS 3 aPL IgM

Выкидышотсутствие

p = 0.02

Клиническая

связь

aPL IgM при

AФС


21

Антифосфолипидные

IgG+IgM у

больного

с артериальным

тромбозом

Roggenbuck et al. Arthr Rheum. 2012;69:2807-8


22222222

ЗаключениеМультилинейный

дот-анализ

может

быть

использован

для

выявления

анти- фосфолипидных

антител

Выявление

антифосфолипидных

антител класса

IgM методом

МЛДА

связано

с

цереброваскулярными

заболеваниями

при АФС

Egerer K et al. Arthritis

Res Ther. 2011;13(4):R118Roggenbuck et al. Arthr Rheum. 2012;69:2807-8


23

23

кофакторы: β2-гликопротеин

I, aннексин

V,

протромбин

фосфолипиды: кардиолипин, ф-глицерол, ф-серин, фосфатная

кислота, ф-инозитол

ф-этаноламинф-холин


дот-анализ

(МЛДА)


24


дот-анализ

(МЛДА)

Prof. Rene Humbel, Luxembourg


2525252525

Сотрудничество

Шарите

-

Университетская

медицина

Берлина, Отделение

ревматологии

и

клинической

иммунологии:Карл

Эгерер, Аннушка

Кон, Барбара

Леманн, Ойген

Файст, Томас

Дернер, Герд-Рюдигер

Бурместер

Университет

прикладных

наук

в

Зенфтенберге:Рико

Химанн

Дженерик

Эссейс

Лтд:Томас

Бюттнер


26

Спасибо

за

внимание!


ИФА МЛДА

anti-CL anti-β2GPI anti-PS anti-PI anti-CL anti-β2GPI

IgG IgM IgG IgM IgG IgM IgG IgM IgG IgM IgG IgM

APS

n = 85

45 32 27 33 28 17 7 3 39 33 31 27

DC

n = 65

1 1 0 0 1 0 0 0 2 3 0 3

NHS

n = 79

1 0* 0 4 1 1 0 0 2 6* 0 5


Количество

положительных

aPLAb

в

одном

образце

1 2 3 4 5 6 7 8

ИФА APS 9 12 12 17 - - - -

DC 2 0 0 0 - - - -

NHS 5 0 0 0 - - - -

МЛДА APS 13 5 20 5 4 9 0 1

DC 5 2 0 0 0 0 0 0

NHS 2 5 1 0 0 0 0 0


sensitivity 95%

CI specificity 95%

CI +LR 95%

CI -LR 95%

CI

anti-CL IgG 52.9 41.8

–

63.9 98.6 95.1

–

99.8 38.1 9.5

–

153.2 0.5 0.4

–

0.6

anti-CL IgM 37.6 27.4

–

48.8 99.3 96.2

–

100.0 54.2 7.5

–

309.6 0.6 0.5

–

0.7

anti-β2GPI IgG 31.8 22.1

–

42.2 100.0 97.5

–

100.0 ∞ 0.7 0.6

–

0.8

anti-β2GPI IgM 38.8 28.4

–

50.0 97.2 93.0

–

99.2 14.0 5.1

–

38.1 0.6 0.5

–

0.8

at least 1 aPL

antibody58.8 47.6 –

69.4 95.8 91.1 –

98.5 14.1 6.3 –

31.5 0.4 0.3 –

0.6


ИФА


sensitivity 95%

CI Specificity 95%

CI +LR 95%

CI -LR 95%

CI

anti-PS IgG 32.9 23.1

–

44.0 98.6 95.1

–

99.8 23.7 5.8

–

97.1 0.7 0.6

–

0.8

anti-PS IgM 20.0 12.1 –

30.1 99.3 96.2

–

100.0 28.8 3.9

–

212.6 0.8 0.7

–

0.9

anti-PI IgG 8.2 3.4

–

16.2 100.0 97.5

–

100.0 ∞ 0.9 0.9

–

1.0

anti-PI IgM 3.5 0.7

–

10.0 100.0 97.5

–

100.0 ∞ 1.0 0.9

–

1.0

anti-CL IgG 45.9 35.0

–

57.0 97.2 93.0

–

99.3 16.5 6.1

–

44.6 0.6 0.5

–

0.7

anti-CL IgM 38.8 28.4

–

50.0 93.8 88.5

–

97.1 6.2 3.1

–

12.3 0.6 0.6

–

0.8

anti-β2GPI IgG 36.5 26.7

–

47.6 100.0 97.5

–

100.0 ∞ 0.6 0.5

–

0.8

anti-β2GPI

IgM 31.8 22.1

–

42.8 94.4 89.4

–

97.6 5.7 2.7

–

12.1 0.7 0.6

–

0.8

at least 1 aPL 67.9 56.8 –

77.6 89.6 83.4 –

94.0 6.5 4.0 –

10.8 0.4 0.3 –

0.5

at least 1 aPL

IgG

or at least 3

aPL

IgM

67.1 56.0

–

76.9 96.5 92.1

–

98.9 19.3 8.1

–

46.3 0.3 0.2

–

0.5


МЛДА


роггенбук2

Documents

o igg igm o

igm egerer

igm roggenbuck

ci antips igg32

apl igg

antips igm20

antipi igg8

antipi igm3