1 carbohydrate recognition site of interleukinr2 in relation to cell

41
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opyright 2001 by The American Society for Biochemistry and Molecular Biology, Inc. JBC Papers in Press. Published on June 4, 2001 as Manuscript M102789200 by guest on March 4, 2018 http://www.jbc.org/ Downloaded from

Upload: dinhkhue

Post on 06-Jan-2017

216 views

Category:

Documents


0 download

TRANSCRIPT

Page 1: 1 Carbohydrate recognition site of interleukinr2 in relation to cell

1

�������������� ����������������������������������������������������

������������������������������ ������������������������ ���������

!���������"��������������������������������������� ������

������������#�����$%$�%%&�������'(�#�)����'����������(*���������

����������#������ �+������,���������������#������ ����������������-�

���������� ������������������#�����$%$�%%&���,�����

�#����.����.���������������������/��������0����������������'���������

1�������0���2�3�$%$45$%6��������7����������(����������������������

�������������,����3�

�#��.��������������������������������8�!���������"�����������

���������������������������� ������������������#�����$%$�%%&���,����3�

#�8�95$�:�:�;6�:�5&<���=8�95$�:�:�;6��&-&<�(�����8���������>������3��3?��

'����� ���8��������������� �������������@���

Copyright 2001 by The American Society for Biochemistry and Molecular Biology, Inc.

JBC Papers in Press. Published on June 4, 2001 as Manuscript M102789200 by guest on M

arch 4, 2018http://w

ww

.jbc.org/D

ownloaded from

Page 2: 1 Carbohydrate recognition site of interleukinr2 in relation to cell

2

��������

� �����������)�@��+�������������.���������������������������

����3� � �@���������������������� ������������ �������������������������

�A����������@����������������������A������������������ ����������

�����=�����@����@���������α, β,�����γ��������3� � #��������������������

���������� ����� ���������������������)�������������� ������������������

������4&��4:-$�4:-&���%%$+3� � #��������������������������� �������

�@����.��������.���������������������B���C�@������������ �����

������������������������������3� � D����������.�������B���C�@�������

���������������������������������������������������������������

��� ���������*��������������������������*��3� � 7���*����������������

0���&�����@���.���/������0��������*����������������������������

�������������� ���������*�������������������.���������������������

���*������� ��� ����0���&�����@��������*��*������������������

��� ��������3� � #����������� ��������������������� ���������

�@���������� ����������������� ���������������=��)�@����@��'α��β��γ+�������

���������������������@���������#��������������������

��������� ����������� ����� 3�

by guest on March 4, 2018

http://ww

w.jbc.org/

Dow

nloaded from

Page 3: 1 Carbohydrate recognition site of interleukinr2 in relation to cell

3

�����������

� �����������)�@���+��������.����������������������������������

�� ����� ����������������3� � #�������������@���)�@��'+��������������

����γ���������)�@��'α��β������γ)���������������������������������β�����γ�

��������������������.�����*���������������������������������� �

��������������,��$�����,��:�)$���+3� � #��������������������������

�����������@��'�������������������������������������� ���.������

�� ����� ����������������� �����������������������#0#:������#0#-�����

�����*��������������=�)$��:+3� � �@��'α��β������γ ���������������������

�@��������������������������������������������.���������)6�5+3� � D���

�@��'�α��β�����γ�.�������������=��������@��'α �������@���.�����.�

��������)���E$%�7+���@��'β �������@���.���*�����.���������)���E$%%�7+��

�����@��'γ �����������������������������@����.��������=�������@��'�α��

������������@���.�����*����� �����������������)���E�7+�);�$$+3� � D�

��������*�����������@����������@��'α ���� ��7���/��20���������

��������������A��������@��'����������������#@@����������������

������������ �������� ������������������� ���������������=����

�@����@��'�������� �����.�������� ����� �)$�+3�

� �@��'������@��:-��0� :5��1�6�������@��6:������������@���)5+�����

by guest on March 4, 2018

http://ww

w.jbc.org/

Dow

nloaded from

Page 4: 1 Carbohydrate recognition site of interleukinr2 in relation to cell

4

���������*����������.���������������������@���������.���

�� ������������ ������3� � 0�������� ������A���������� ��.���

�������������������������������������@�����������.����������=���

������������������������������������������ �������7"1�)�+�����.��

�����*��������������� ���������7"1�)0+�����7"1�)�+�)$:+3� � /��$-��0���&��

/���4��0��:%�����-5�����/��&4�����������������������*������ �7"1�)�+��

7"1�)0+��7"1�)�+������@��3� � ���$&�����@�$;������������.��7"1�)�+�

�����@����.�����@��$���������*������ �7"1�)�+��7"1�)�+������@��3� �

0������� ����.�������������������������/��$-��@�$;��@��$��0���&��

/���4��0��:%������/��&4������@����!20����1�'������������F��B���C�@���

������������ ���������������������������������������������

B���C�������3� � #����.���*�� �����������������.�������������

��� ���������*���������#@@����������������������*���������������3� �

����������������@���������F�������������������)���@��+����.��

��� �������������������������*���������� �������������������

�������$���������������� �������.���*�� ���������������������

���*������������������������������������������@����@��������������=3�

by guest on March 4, 2018

http://ww

w.jbc.org/

Dow

nloaded from

Page 5: 1 Carbohydrate recognition site of interleukinr2 in relation to cell

5

7�����������7�����

���������������������'��*��@�B���C��������)$$4-���G����+�

.�����������������0�������1���������"�����H��@�3�)"����� ���������

H�+3� � '����������"�)�������"��������*����������+�������������0��

�*������������� ��������������������������������.��������������

�� ���0���������3� � (���������� ����������������)(�����+�.����������

��������� ������ �����3��@�3�)#������,����+3� � "����=�����%%%��

������������ ��0�������������0��������*����������������)/�����������

@7D��������������+�������������.� ��������������������$���������

������� ������.����������������0�������1���������"�����H��@�3�

)H�+3� � �

����������������������!20������� ��������@���)'I!�

������(�����@�3��0��� �����H�+�.�������������������@������

���������������1��������(#:��)2�*� �����3��7��������D�+�.������������

#4�=���������������3� � 0���������������� �������������� ������������

�������@����!20�.����������.����������������������������(#:��

�����������=����������������)�(#:���@��+3� � #���(#:���@���.���

=�����������������������"@�$)!(:+��������������������#4�������3� � 0�

$-��������������������"@�$)!(:+��������� ��(#:���@���.��� ��.���*��� ��

by guest on March 4, 2018

http://ww

w.jbc.org/

Dow

nloaded from

Page 6: 1 Carbohydrate recognition site of interleukinr2 in relation to cell

6

����������������������������������-%%�������@�������������� �$%%�

µ G�������������3� � 0������������������3-������:4°��������.�����������

����������@���.���%3-��7��������������� �������������� ��.�������3-��3� �

���@���.���������������������������������������3� � #�������������������

������.����������F���������@���.������������������.��)$6+3� � #�������.��

���������������� ������������� ��F���������F������������

������������6°�3� � #�������.��������� ����$%�%%%���������$%����������

����������.���������3� � #������.���������*������%��7�#��������

������)���53:+��������� �$%��7�(!#0�����&�7� ��������������������3� �

#��������������.�������.���$%��7������� ������������$��7�

�=���F�� ������������������������7� ��������������������������53%3� �

#����������.�������.�������������$&�������������������������

�����F��� �����1"�3� � 0�����A���������@���.������?������!��10/(����� �

$�3-�J��������������� �����������������3� � #������� ��������*��������

����������@���.������������������������������������� ��#@@�������3� �

#������������@������������������� ���0���������3�.�������������������3� �

#�������������������.�������������"���'���1�����0��������

�� ������ ���*����������������������������3� � #������������@����������

���������.���$E$%�����G� 3�

by guest on March 4, 2018

http://ww

w.jbc.org/

Dow

nloaded from

Page 7: 1 Carbohydrate recognition site of interleukinr2 in relation to cell

7

����������������� !��������(#:���@����������������������

���*�.������������������������ ����������������������������������

#�#����������������������������)1��� �������������7��������D�+�

��������������B���C�������3� � #�����*������ ������������

������ ���������������� �������� ���.����=��.������%J��������

����*����������������)-�� G��+�)�%�µ�+����������� ����������� ���

.�����3� � #����� �������������������������������.������������������

�����������������������K������������3� � 0�����A������������������

��������.������?������!��10/(����� �$-J��������������� �������

�������� �����3� � 0�����A���.�����������?�������F�=��������

������� ���������� ����������$���������):%%������� ��$%������������

�����+�������������.���1"��)���.�����%3-���G���+�)0�������

1���������"�����H��@�3��"����� �������+3� � #���������$���������.���

������.���$%%µ�����:J�����������������������1"�����������

���������������������3� � #��������� �������������������.���������

��������B���C������������ ���1!�$%��������)0�������1���������

"�����H��@�3+�.���1"�������������������3� � L������������� �$µ ����

��������!20��������-�µ����������������%�µ������B���C������������*����

������������;:��� 63:���������B���C���@���)$3:��� $%�����G����+3� � #���������

B���C���@���.������������������������������������� ��#@@����������

by guest on March 4, 2018

http://ww

w.jbc.org/

Dow

nloaded from

Page 8: 1 Carbohydrate recognition site of interleukinr2 in relation to cell

8

�����������*3� � #���������B���C���@���������F�������� �����������������

��������������.��������-%�����G� 3�

���������"�����#�����$��#�������� ����B���C���@�����

�����������"���������������0�.�������������������������������� ������3� �

(�F��������������������������������)������ �������,������#����+�

.�������.���$%%�µ����������������"���������������0����%�µ G������1"��

��6°���*��� �3� � '����������"�����.���(������.�����������������

����� ���������3� � ����(������������$%�µ����������������=���

�������� �$%�� G��������������"�����%3%-�H�(��������%3$�7�

����������������������-3%�.�������������:4°������$5��3� � #�������

.��.�����.���%3%-J�#.���%����1"�������������.���1"���������� �

%3%-J�#.���%�����:J�������������������3� � �A����������������.��

����.������$%���������B���C���@����.������������������$-����������1"��

�������� �%3%-J�#.���%�����:J����������������������:4°��������3� �

0���.����� �.���%3%-J�#.���%����1"�����������B���C���@���.���

��������������.���$%%�µ�����$J��!�3� � #����������*���.����������

�����A���������������������3�

�����%��%���#�������#����������#@@���)'�"%&:4+�.���

by guest on March 4, 2018

http://ww

w.jbc.org/

Dow

nloaded from

Page 9: 1 Carbohydrate recognition site of interleukinr2 in relation to cell

9

��������������'��(2�����"����)���������,����+3� � �#@@��������.��

������������������'17�$&6%�������)/�"�L+����������.���$%J�

������*������������$%%����G������@�����:4°���������-�J��L��

�������3� � ���@�����-����G��������������������.�������������������

*���������3�#�������.��������������������������������$3-��$%��

����G���������������.����������3�

��������$�������������������������������������������������

��������������@�����������.��.���������������'17�$&6%������3� �

#���.����������������������������������������������������

.�����������������$%������G���.���$%%�µ����������.��3� � 0���������

���������������B���C���@������������$%%�µ�����������'17�$&6%�������

.����������3� � 0���������������������������:4°��.���-�J��L��������

�������%�µ���������#���;&�0A������������������ ��.��������������

.���������������������-�-����.����������������������������������������

.�*�� ������� ������������ ������������;:%%1��)������F������3�

����+3� � #������#���;&�0A������������������ ������������������

���������������*���.���������������1��� �������������)D�+3� � #��

��������������������������F����������������������������������� �

�� �������F���������������!������K���������������������������

by guest on March 4, 2018

http://ww

w.jbc.org/

Dow

nloaded from

Page 10: 1 Carbohydrate recognition site of interleukinr2 in relation to cell

10

&3%3�

L�� �������������7���/��20��0���)7-+�����7���/��20��0���

)7&+�.������������=�����*���������� ���������*�������������.�����

!�.=�-%�=���)�������+��������������� ������)�%%�6%%������$3-���=�$-%�

��+��������� ���������������������#���������)$-+3� � 7���/��20�������

7���/��20���.�����������������F������������7���/��20��0�������

7���/��20��0��������.������������������)$&+3� � 7���/��20������

7���/��20��.��������������7�����/��20��0������(�������� �����)$-+3� �

7���/��20����7���/��20����7���/��20�������7���/��20���.���������

�����: ��������������� ����������������F��������������.�������������������

����7�����/��20���.����������������"��/��1�6�)�����6%%�������3%����=�

$%%���+��������������� �����3� � (������� �����������.������*�����

���������� �������������������.���&����"�����������������

���������� ��������������)(����0+����������������� �������)$4+3� �

7�����/��20�/��20�2+�����7���/��20�2+�.��������������

7�����/��20�������7���/��20����������������� �2�"���������*��3� � #��

������������������������ ����������������� ����������� ������������

.����������������������������������������������)$5+�������������

�� ����������������������)$-+�����70@!��#L��7��)������F������3��������

by guest on March 4, 2018

http://ww

w.jbc.org/

Dow

nloaded from

Page 11: 1 Carbohydrate recognition site of interleukinr2 in relation to cell

11

,����+3�

���������������%�������� !�������#�����������������!20��

������ �B���C���@����($-!��@$;!��@�$!��2�&!��2�&M��/�40��2:%!������

(&4M�.�� ����������.�����1�'���������������������7����������

����)$;+3� � #�������.�� ��������.�����8�-K�#00#0�/0�#�0�#0#0///�

)��������+��-K�/�#0/##0##/�#�0/�//�)���������+��

-K��#/0�#�0/#0�##��#��0/�)����������+��

-K��#/�00##//0��0#�#/�#/�)����($-!+��

-K��0#�#/�#//0�/0#�#/�0/�)����@$;!+��

-K��#/�#//0#/0��0/0#/0##�)����@�$!+��

-K�0#/0##�#//0�//�0#�00#�)����2�&!+��

-K�0#/0##�#/�00//�0#�00#�)����2�&M+��

-K�0##�#/00#/��0#�00#00��)����/�40+��

-K�//�0#�00#�00#0�00/00��)����2:%!+��

-K�00/��/�#//0�/00/#0�##�)����(&4M+3� � 1�������������������

���������������������������3� � �������������������������������

.����������������������������<��������������������������������������

�������������������������������������1�'3� � ��������������������1�'��

�������� �.������*��������� ����.����������������=����������

by guest on March 4, 2018

http://ww

w.jbc.org/

Dow

nloaded from

Page 12: 1 Carbohydrate recognition site of interleukinr2 in relation to cell

12

������������� ������������������������������3� � #����� �����������

.������� ���.���������������������������� ��������(#:�3� � #��

����������������������1�'����*��������.���*���������!20��A����� 3� �

0���!20��A����� ��������������B���C��������������������@���

.�������������������.������.��������@��3�

by guest on March 4, 2018

http://ww

w.jbc.org/

Dow

nloaded from

Page 13: 1 Carbohydrate recognition site of interleukinr2 in relation to cell

13

'����� �

��������������� ������ ������������*�� ��������������������� �

�������@����.��������.������������*������������������B���C���@������

������ �����������������������������������3� � ����������������@���

���������@���������������������������������B���C���@�����������B���C�@���

������F����� ����3� � �������������.�������.����B���C���@�������������

��������������������������� ����*��������#@@�������������������

���*�����������������.������@��3� � #�����������������������@�����*�� �����

���������� ����*���.�������������������$���������������� �����3� �

#��������������������@���)6����G� +����.���*�������������������)�� 3�

$0+3� � ���������������������������������.������������������������.�

���.����������������3� � ��.*������#@@������������������*�������

�������*����������������@���.������������������������

����������� ���:%��!��)�� 3�$"+3� � L��������������.���B���C���@���.���

�����������F���������������������$���������������� ������������

=����B���C������������������*�������1!�$%��������������=������

5%J����B���C���@���.�����������������������������*���������������� �

��:%��!��������������� ��%J�����������*���������������� ���&%�

by guest on March 4, 2018

http://ww

w.jbc.org/

Dow

nloaded from

Page 14: 1 Carbohydrate recognition site of interleukinr2 in relation to cell

14

�!��)�� 3�$�+3� � ��.*�����B���C���@�������������� ���&%�!����������

.������)����������.�+3� � L������������������������� ���:%��!��

���.���������������������*���)�� 3�$!+������������������*���.���-%�

���G� �)��N7�����������7����O+3� � ������������������������

B���C���@������������������$-�%:%�!������������������������������A����

)�%+��B���C���@������������������������������������������1"�������3� �

#������������.������������ ������������������������������������� �

��������������.���������������� ���������*�������������

���������������*�������@��������3� � �

�������������� ��������� ��������������������������� ������ �D������������

������������������������*�� ��������������������������� �

��������������@�������������������������������������������������

���������������������(@��0������.�����������������*�������

���������������)����������.�+3� � B���C���@���.�������������� ��������

�����������B���C����������������.���������������=����

B���C�����������1!�$%��������������� ������)��N7�����������

7����O+3� � 0����������������B���C���@���.����������������������

���������������������� ������3� � #�������� ����������������������F��

������������������������=������.��������������� ��*��������)$-+��

by guest on March 4, 2018

http://ww

w.jbc.org/

Dow

nloaded from

Page 15: 1 Carbohydrate recognition site of interleukinr2 in relation to cell

15

����������� ��������)�$+�������*��������������"�)��+��������� �

�� ������������ ������3� � ��.�����������������������"�������.�����

B���C���@���������������.���*����������������������� ����*������� �

������ ����������3� � 0������� ��������������"�.�����������F�������

����3� � �������A���=���������%�µ G��������������"����$%%�µ�����1"��

.�����������F���������.�����������������*��� ���������������� �����

.���������.���1"���������� �:J�������������������3� � ������������� �

�� �����*����������������.����������������������������� �

������������������ 3� � #������-��$%����6��$%�����G������B���C���@���.���

�����������.�����������.�������������������:4�°C3� � #�������.�����

.�����.���%3%-J�#.���%����1"�����������������*������������

B���C���@���.����������������� ����������$�J��!�3� � 0�����.������� 3�

�0�)��+, �������� ����B���C���@����������������"�����������.���

����������������������6��$%�����G���):%��7+3� � �����������

B���C���@����������������������������0����������������� �������������

0�����������������������A������������������"�.���������2� ������

)�� 3��0����+3� � #������������.������������� �(����������

�����������"�����������)�� 3��0����+3� � #����������� ������

�������� ����B���C���@�������������F�������������"��������*���

7���/��20������7���/��20����.���������������������������"�)��+3� � �

by guest on March 4, 2018

http://ww

w.jbc.org/

Dow

nloaded from

Page 16: 1 Carbohydrate recognition site of interleukinr2 in relation to cell

16

�� ���������������������� �� �������������������������� ������ ������

�������������������������� ������ � ��������������������������@���

�������.���7���/��20�������7���/��20��0���)$:+3� � ��.*���������

����������������.����� ���������������������������� ������������

������������������������ �������3� � D�=��������������������������

*��������� ������������ �������)��#����$+������������ ����B���C���@���

�������������"����������3� � 0�����.������� 3��"��7-�����7&����.��

����������������.�����74��75��7;�����7:�������3� � 0���������F�����

#����$��������������7-����7&����-%J����������������������.���

����������%3��µ7��.�����������������74��75��7;����7:����.���

��������$�73� � �����7���/��20��0����7���/��20�������7���/��20��

���.������������������������.����������������������A������

����������� ����������������������� ��������'�(����������������

�������.����A���������7���/��20�2+ ����������.������������������3� �

#�������������������.��������������������������������������

��α$→&������������������������������������ ��������

6�)�)��������+������� ��������������������������A�����������

�������������*��3�

by guest on March 4, 2018

http://ww

w.jbc.org/

Dow

nloaded from

Page 17: 1 Carbohydrate recognition site of interleukinr2 in relation to cell

17

�������������������������!���"����� ������ ����������������������������

������ �D������������������������������� �������������B���C���@���.���

��������*����������������������� ����*�������������������.����

���������������� ���������*�������@�����������������@����������

�������������������*��3� � ��������������������������������)$:+������

������������������������@���=��������������� ������A���������� ��

.���������������������� ��������7"1�)�+�)�:+������.�������*��

������������� ���������7"1�)0+�����7"1�)�+�)�6+3� � /��$-��0���&��/���4��

0��:%�����-5�����/��&4�����������������������*������ �7"1�)�+��7"1�

)0+��7"1�)�+������@��3� � ���$&�����@�$;������������.��7"1�)�+�����

�@����.�����@��$���������*������ �7"1�)�+��7"1�)�+������@���)�6+3� �

7���*��������������������0���%������������ ���������@��'�/��$�&����

��������@��'γ������@��:-��0� :5��1�6���@��6:���������� ����������@��'α�

)5+3� � L���������������������.�������������������������/��$-��

@�$;��@��$��0���&��/���4��0��:%�����-5������/��&4������@����!20������

1�'������)��N7�����������7����O+������������F��B���C���@���

��������� �������������������B���C�������3� � D����������*�

��������.���*���������!��10/(�����*������F������������� �����������

���������.����� ������������������� ���$&��!��)����������.�+������

��.����������B���C���@�������� ����������������B���C���@���.��A������

by guest on March 4, 2018

http://ww

w.jbc.org/

Dow

nloaded from

Page 18: 1 Carbohydrate recognition site of interleukinr2 in relation to cell

18

������.�����*�B���C������������������������3� � 0��� ����� ��

���������������B���C����������������.��������������������������

�����������.�����������������$���������������� �����������������F��

����� 3�:�����#�����3� � �@�������� ���($-!��@$;!��@�$!��/�40������2:%!�

.�����������������������������������������������������������

��� ���������*���������������������������*���������-%�7�)�� 3�6��� ���

�� ����� ����� ����� �+3� � L�������������������2�&!��2�&M��

����(&4M�����������������������������.�������)�� 3�:(����������+3� � #��

�������������� ���������*�����������@�������� ���.��������*��

�������������.�������������������������"��������������3� �

0���� �������(&4M����.�������������� ����*��������.�������

)�� 360���� �+�������2�&M����.���� �������������������� ��������

)�� 360�����+�����������.��������@���)�� 360�����+��.����������

2�&!����.����.������������������� ����*���)�� 360�����+3� � #��

����������������� ���������������2�&!�����2�&M�����������������

��������������.���������.��������@������������������ ����*�������

2�&!�����2�&M����*�������������������"�����������.�������������

7-����7&��.�����74��75�����7;�����������.������������������

�������F�����#����:3� � #��-%J����������������������.���7-����7&�.���

%3��µ7��.������������74��75�����7;�.�� ��������$��73� � �������

by guest on March 4, 2018

http://ww

w.jbc.org/

Dow

nloaded from

Page 19: 1 Carbohydrate recognition site of interleukinr2 in relation to cell

19

�������������0���&�����������.���������������������=�����������

�����������������������P������������� ����������@���)�-+�)�� 3�-0+��*�����

0���&��������������0������/��������������������������������������� ��

���������������������������������@�����������.����������

�����3� � #����������� ������0���&������*��*������������������

������ �����@��3� � �

������������������������!���"����� ����������������������������������

������������ � D��������*�� ���.���������������������@������.��

�������� ��������*������������#�����������������������������.���

.��������@��3� � 0�����.���������*������������#@@����������������#�����

�����������������������������������@��3� � H��������������)$�$%��

����G.��+������������������ �������������B���C���@�������65����������

��������.�������������*��������.�����.��������������

��������������B���C���@��3� � #��=���������������������.����������

���������������)��N7�����������7����O+3� � #�������(&4M�������

�������������.�����������@��������#��������������������*���)�� 36"��

�� �+��.������������2�&M����.���� �������*�������������� �

#���������������������.�������� �������������������� ����*��3� � #��

�������������.�����-%J��������=��������������*��������.�������*��

by guest on March 4, 2018

http://ww

w.jbc.org/

Dow

nloaded from

Page 20: 1 Carbohydrate recognition site of interleukinr2 in relation to cell

20

�������������������2�&M�)%35��7+�)�� 3�6"�����+�.������������

��������.�������)4��7+�)�� 3�6"�����+3� � ������������������2�&!�

���.����.������*�������������� �#���������������������.��������.��

����������������� ����*��3� � #���������������.�����-%J������

��=��������������*��������.�������*��)�$��7+�)�� 3�6"�����+�.���

�������������.��������@��3� � ����������2�&!����2�&M��������������

���������������*���.����������������������������.���7-�)�������

���.�+3� � #����������� �����0���&����������.�������

�������������� �������������@��������0���&���������������������������

@��:-��0� :5��1�6�������@��6:�����@���������.������� 3�-0����������

7���/��20��������������������������@��'α,������*��3�

by guest on March 4, 2018

http://ww

w.jbc.org/

Dow

nloaded from

Page 21: 1 Carbohydrate recognition site of interleukinr2 in relation to cell

21

!����������

D��������������*����������������������������� ���������

�@�����������������=���������������������� �������������)$�+3� � �������������

.���������*�������������������@������������������� ��.������

������������� ��������)$:+������������������������������*��������

�������������� ���������*�������� ���3� �D�����������������

������������������� �������������@�����*��*��0���&3� � "����

������������ �����������.���������������F����������������������@����

.�����.��������F����������� �������������������3� � 0�����.������� 3�$��

���@�������������������������.����� ��������������������������������

�������������������$���������������� ������������ �����������

���������@���=�����*����������������������������*��3� � ��������@���

��������������������������������������������������������������� �����

������� �����������3� � #����������� ������������ ����F��������

�@��3� � ��F�� �������.�� ��������������� ����F�����)����������.�+3� � ���

��������B���C����������@������������������� ���������������������

�����������������������������B���C����������������������������

�������������.�����������������������������������*���������������

�����������@��������������������������.����������:4°�������*���������3� �

by guest on March 4, 2018

http://ww

w.jbc.org/

Dow

nloaded from

Page 22: 1 Carbohydrate recognition site of interleukinr2 in relation to cell

22

0������� ����B���C����������@������������������������������F���

������������.������������������ ���������*��������@����������

���������������*�������#@@�������3� � �

#����*�� ����������������������7-�����7&������������ ���

�����������"����������������@����������������������������.��

����������������������B���C���@���.���7-����7&�������������������

��=������������.����������3� � 0����*��������������������@������ ��F��

�������� ������������ �����������������������������@��'α�)$�+����

��������������������������.�������� �����������������

�� ������������ ���������������@��'���������������������A����

�����������������@�����������3� � 0�����������@���������������

7���/��20��������������������������@��'α����� �����������@����@��'α�

�����=��� ���������������������������������������� ��3� � 0���� ��

���'��K������������������������� ������������������������������� �����

������ �����@�����@��������������� � ���������� ������������� ���������

��������������� �7���/��20�/��20����������0��::��0��6:����0���%%��

�� ���������������������������@��'α,�������� ������3�

#������������������������ �������������@����.��������

�*�����@���������������������������*�����������������)$:+3� � �����

�@����������������������)�&+������������������������������������������

by guest on March 4, 2018

http://ww

w.jbc.org/

Dow

nloaded from

Page 23: 1 Carbohydrate recognition site of interleukinr2 in relation to cell

23

�������� ��������*��3� � ��.*��������������������������������*���

������������.�����=�����*����������������������������*��3� � ������ ����

����� ������������0���&�������������������������������

����������������� ����*����.�������<�������2�&M�.������������

.����������2�&!�������3� � 0������� ���0���&�.����������������

��*��*��������������������� ��������3� � D���������������������

�@������������@��'α��β������γ�.�������������������������������������

����������"������*��1�����!������)�4+��.�����.�����������������

P������������� �����������27'���������������������0���&�������

�����������������������*��*����������� ������������������������.��

���������������������������*�������)�� 3�-"+3� � #����������������������

��*�.�����@������ ��F���������@���������������������

�� ������������ �������������������� �������� ��������������������

=������������@�������������������� ��������������3� � D�����

�� ���������������=�����@��'α��β������γ�.���������*������@��������������

��� ����������������� �0���&���������������� ����������������� ����

�������3� � �@��'���������#@@������������������������ ������������

�����0��::��0��6:�����0���%%�)�5+�������������@��'α �����.���������

�� �����������������0��4%�����0��5;�)�;+����.������� ������������

�����������������3� � #��A������.������������������0��::��0��6:����G���

by guest on March 4, 2018

http://ww

w.jbc.org/

Dow

nloaded from

Page 24: 1 Carbohydrate recognition site of interleukinr2 in relation to cell

24

0���%%�����������@��'������������������� �����@�����������������*��

�������������3�

D����.���������*����������������������������@����@��'α�

�����=��� ��������������������� ���������������=�.�����������������@����

�@��'�������������������������)$�+3� � #���������������������*���

������������������ ���������*�������@�������������������������

�������������.�����.��������������������$���������������� �����3� �

����������������F���@��������@��'α�.������������������������$���$����

P������������� ������):%+����.����������������������������

������������������ ����)�@����@��'α��β��γ+������ �����������������

���������������������������������������������@��'�������

������������������������������������ ����� ��� ��������*���

��������3� �

� �*������������������� �������������������������������

���������*���������3� � ������ ��.���������):$+����������������

):�+�.��������������������$8����������������=�.��������������

��������P������������� ���������������3� � ������� ���������

��������������� �������)::+������������������ ��.��������):6+������������

):-+���������8����������������=�.��������������������@�&���@�&�

����������������� �$:%���������8�8�������=���������=�):&+3� � ��

by guest on March 4, 2018

http://ww

w.jbc.org/

Dow

nloaded from

Page 25: 1 Carbohydrate recognition site of interleukinr2 in relation to cell

25

���������������������������P������������� ���������27'����������.����

�@��������@��'����������8�8�8�����������������=������ ������

��������3�

by guest on March 4, 2018

http://ww

w.jbc.org/

Dow

nloaded from

Page 26: 1 Carbohydrate recognition site of interleukinr2 in relation to cell

26

� #��������

$3� 2������"3��3������D����������!3�73�)$;;5+�&� �����%������4%��$�5$�

�3� 0������3��#�������23���������23���� ������73��#��������#3��2���������73��

�������.���#3�������� ��������3�)$;;6+�*�� �������:-$���%$��%&�

:3� /�������3@3��@�����3 3������73��@����P3������ �������@3��/����D3�3��

����/���������7303�)$;;&+����������������4$���$:5$��$:;%�

63� Q���.������373��������,3@3������Q���.�����/3�)$;;%+����)�����;��

:5;;�:;%-�

-3� ������,3@3��7���?�����03������Q���.�����/3�)$;;�+����)�����$$���%64��%-:�

&3� R������3!3��@�����#313���������1373������'�����'3,3�)$;;:+�����������&����

���+ &��;%���6�5��6:��

43� 7������,3@3��"�������73����/�����!3�������������3��,��A���� 3��#������

03������#�F��,3�)$;;-+���������%������:���$%64�$%-&�

53� ���*���3��2��������73���������3��"�������13�����������(3��#�����D3�3��

��������,303����������,3������,���/3�)$;;$+�����������&���� ���+ &��55��

6&:&�6&6%�

;3� 0������23���������73����������3��������#3���������#3��#������73��L������

73������H���������#3�)$;;�+�����,��������$4&��$�&-�$�4��

$%3� #��������#3��L�������3��0������3�����������3��2���������73������

�� ��������3�)$;;�+�������%������$65���$-6��$-5�

$$3� 0��������!373�����������3��0������73��"�����,3��#�������73��@�������

03��/�����,3�����������23/3��/������!3,3��,�������2303��R�������R3R3��

���������!323��7��������3D3��1�����@3�3��������������!3�)$;;-+����������

������4%���;5&���;5&;�

$�3� ������������3������ ����������3�)�%%$+����������������&4��4:-$�4:-&�

$:3� ���������0313���������������23��!�����,373������7��������03R3�

)$;5;+�������%������$6:��;:;�;66�

$63� #��?���#3��2��� �.���'3���� ������23�����������������3�)$;54+�

���������$���&��:$�;�:$:6�

$-3� #����#3�� ����������3��L ���0����.���73��������23��7���������#3��

by guest on March 4, 2018

http://ww

w.jbc.org/

Dow

nloaded from

Page 27: 1 Carbohydrate recognition site of interleukinr2 in relation to cell

27

�.��������3�������� 3�������������03�)$;4-+����������������-%��5-&;�5-4-�

$&3� #����������3��7�F�������#3�������������03�)$;5�+���������-$������5:��

�&:��&5�

$43� ������� ���3��L�������#3�������03������ ����������3�)$;;;+�

.�$��"����#$��;��5::�5:;�

$53� ����������3��������03��7������� 3��#��?���03������������23������

�������03�)$;5:+�,3�"���3����3���-5��$%;5�$$%4�

$;3� 7����������3�������� ����03�)$;;�+��%����&�����/�����%��:4&�

�%3� #��� ������#3��7�������3����?����#3��#���������3�����������23�� ���������

'3��������������,3�)$;5:+����%���:%���:%-�:$%�

�$3� �����3�� ����������3���������'3/3�������������03�)$;44+�����������

01�2$�3��5$��$&�$�$&:$�

��3� @��� ���3�,3�� ����������3�������������03�)$;5%+�����������01�2$�3�55��

-$�-5�

�:3� (F��.�F��'303��!����@3(3�������������/303�)$;55+�����,��������$&4��

$%:6�$%6&�

�63� !����������3��!�������73�3������'��������@3�)$;5&+����������������&$��

&545�&554�

�-3� "����������"3,3��"�����#3��������D3�3������7������!3"3�)$;54+����������

������&���$�:%&�$�:%5�

�&3� "�F����,3�3�)$;;%+����%����#$�1���$��$$��:-%�:-6�

�43� "������� ���13���� �������3,3'3������'���������D3/3�)$;;6+� ��%��%��

0������3����&44�&5��

�53� �����F���03����������3��#�������3�� ������,3����������23��������3��L��.���

�3��!����������#3��2��������#3���������?���#3�)$;5-+��%�����&�����/����$:��

$-%-�$-$&�

�;3� @�������D3,3��!�����,373���������/3'3��'����������3��1��������,3��

'�����'3,3���������73���*�����13"3��1�����23,3������D���������#303�

)$;56+����%���:$$��&�&�&:$�

:%3� @������/3��������(303������D��������303�)$;5;+����������������&6��

$�4:%�$�4:&�

by guest on March 4, 2018

http://ww

w.jbc.org/

Dow

nloaded from

Page 28: 1 Carbohydrate recognition site of interleukinr2 in relation to cell

28

:$3� ��R����0373��H������73������������������0303�)$;;�+� �������--��:%&�:$��

:�3� �����'3�3��'�����3D3��@����3���������,3�3��0������3�3��@����"3��Q������3��

L��������#3!3�����������03,3��Q��� ��,3�������7�����,3��(�������3���������3��

��F��"303��7��.���!3,3��D����������,3,3��( ����,3�������������'373�

)$;;5+����%���:;-��-$$�-$&�

::3� 0�������73�������������23��L�������#3����������'3��L��� 3������

7�����.����3�)$;;;+����%���6%$��4$:�4$4�

:63� ������03����� �������73��(�����,3!3��@����13������L���F��!373�)$;;$+�

�����&6��566�565�

:-3� �.�������D3��2� �����3������������3��������#3����������#3��7���������#3��

���������3��#�������73��������� ������3�)$;;4+����)�����$&��&;:&�&;6&�

:&3� D�����@3!3������������03��/�������,3�3��7��.���,373���������@3��

7���F��'3@3��2����(3�3��D��������,3���������������'3,3�)$;;&+����������

������4$���%$:5��%$66�

by guest on March 4, 2018

http://ww

w.jbc.org/

Dow

nloaded from

Page 29: 1 Carbohydrate recognition site of interleukinr2 in relation to cell

29

�������

�#������*�������������8��@��������������<�1"������������������

�����<�7����������<�/��20���2����� ���������<�0���������� ��<�/����

������<��@��'���@��������<�(@��0���F��������������������������<�

7-��7���/��20��<�7&��7���/��20��<�74��7���/��20��<�75��7���/��20��<�

7;��7���/��20��<�7:��7���/��20��<�(�������

���������� ���������������3�

�������������3���������� 3������ ����������3������������������������3�

� by guest on March 4, 2018

http://ww

w.jbc.org/

Dow

nloaded from

Page 30: 1 Carbohydrate recognition site of interleukinr2 in relation to cell

30

Figure Legends

Fig.1. Size-fractionation of rhIL-2 produced in Eschericia coli and [35S]rhIL-2

synthesized by in vitro transcription and translation, and the cell proliferation activity

of each fractionate.

rhIL-2 produced in Eschericia coli (A, B) and [35S]rhIL-2 synthesized by in vitro

transcription and translation (C, D) as described in “Materials and Methods” were subjected

to gel filtration using Superose 12 columns. The amount of rhIL-2 produced in Eschericia

coli was measured by protein assay (Bradford method) (A) and the cell proliferation

activity of each fractionate was determined using Cell Titer 96 Aqueous one solution

reagent (see “Materials and Methods”) (B). C, radioactivity of [35S]rhIL-2; D, the cell

proliferation activity of [35S]rhIL-2. Arrows indicate the elution positions of blue dextran

2000 (V0, void volume), bovine serum albumin (m.w. 67 kDa) (1), ovalbumin (m.w. 43

kDa) (2), chymotrypsinogen (m.w. 25 kDa)(3), ribonuclease A (m.w. 13.7 kDa)(4), and

mannose (m.w. 180 Da) (5).

Fig. 2. Binding of [35S]rhIL-2 to ribonuclease B-coated plates (A) and effects of

high-mannose type glycans on binding (B).

Plates were coated with ribonuclease B, ribonuclease B treated with Endo H, or

ribonuclease A as described under “Materials and Methods”, and the amount of bound

[35S]rhIL-2 was measured using a liquid scintillation counter after being released with 1%

by guest on March 4, 2018

http://ww

w.jbc.org/

Dow

nloaded from

Page 31: 1 Carbohydrate recognition site of interleukinr2 in relation to cell

31

SDS. A, [35S]rhIL-2 concentration dependence. Plates coated with 20µg/ml

ribonuclease B (••), ribonuclease A (��), or ribonuclease B treated with Endo H

(∆∆) were incubated for 2h with various concentrations of [35S]rhIL-2 (up to 4 ×

105dpm/ml) in PBS. B, inhibition curves obtained for the binding of [35S]rhIL-2 to

ribonuclease B-coated plates in the presence of various high-mannose type glycans,

Man5GlcNAc2Asn (�), Man6GlcNAc2Asn (�), Man9GlcNAc2Asn (�), and

Man3GlcNAc2Asn (�). The inhibition curves obtained using Man7-8GlcNAc2Asn were the

same as those obtained using Man3GlcNAc2 (data not shown). Results are means of three

experiments (standard deviations were less than 5 %).

$����%�� � ��&����������������'��������������������������������� ������

Wild-type and mutant forms of [35S]rhIL-2 synthesized by in vitro transcription and

translation were analyzed using Superose 12 column chromatography. A, wild type; B,

E15D; C, L19D; D, L21D; E, N26D; F, N26Q; G, G27A; H, N30D; I, E67Q. Arrows

indicate the elution positions of bovine serum albumin (m.w. 67 kDa) (1), ovalbumin (m.w.

43 kDa) (2), chymotrypsinogen (m.w. 25 kDa) (3), ribonuclease A (m.w. 13.7 kDa) (4).

$����(�� � �������������'����'�������������������������������'�� ��������

��������������������������)���������������*!+���������������,����������

�����������*)+��

The binding assay and the CTLL-2 cell proliferation assay were performed as described in

by guest on March 4, 2018

http://ww

w.jbc.org/

Dow

nloaded from

Page 32: 1 Carbohydrate recognition site of interleukinr2 in relation to cell

32

“Materials and Methods”. ���, N26Q mutated IL-2; ���, wild type IL-2;����,

N26D mutated IL-2; ∆∆, E67Q mutated IL-2; ���, E15D mutated IL-2; ���, L19D

mutated IL-2; ���, L21D mutated IL-2; ◊�◊, G27A mutated IL-2; ♦�♦, N30D

mutated IL-2. Results are means of three experiments (standard deviations were less than

5 %).

$����-�� � ������������������ �������������� ������������������������

�����������������

03�0�������������������������@��������������"������*��1�����

!�������1!"�)$���+�����.���������A������������������3� � #������������

���0���&�������.���������������������������3�@��:-��0� :5��1�6������@��6:��

.���������������@��'�������������������3�

"3�0������������������@��������������������������������.�����

.�������������������1!"�)$���+3� � �@���������.��������<���������

��������������)α+�� ���)β+��������A�����)γ+3� � #��0���&����������.��3�

by guest on March 4, 2018

http://ww

w.jbc.org/

Dow

nloaded from

Page 33: 1 Carbohydrate recognition site of interleukinr2 in relation to cell

by guest on March 4, 2018

http://ww

w.jbc.org/

Dow

nloaded from

Page 34: 1 Carbohydrate recognition site of interleukinr2 in relation to cell

Table 2. Yields of dimer in wild-type [35S]rhIL-2 and eight [35S]rhIL-2 muteins.

Protein Yield of dimer (dpm) a % ratio

IL-2 1.21 �106 � 6.30 � 104 b 100

E15D 2.12 �105 � 1.10 � 104 17.0

L19D 9.50 �104 � 4.80 � 102 7.9

L21D 0 0

N26D 1.25 �106 � 6.10 � 104 103

N26Q 1.19 �106 � 5.60 � 104 98

G27A 0 0

N30D 1.81 �105 � 9.08 � 103 14.9

E67Q 1.30 �106 � 6.20 � 104 107

Each result was obtained from one reaction of in vitro transcription and translation using 2.5 µg of

plasmid DNA template, 200 µl of lysate, and 200 µCi of [35S]methionine. Following the reaction,

the dimeric form of each IL-2 was recovered by Superose 12 column chromatography. a % ratio was calculated as [dimer of mutated IL-2 (dpm)] / [dimer of wild-type IL-2 (dpm)] b Standard deviations were calculated from 5 independent experiments.

by guest on March 4, 2018 http://www.jbc.org/ Downloaded from

Page 35: 1 Carbohydrate recognition site of interleukinr2 in relation to cell

Table 3. Inhibition of mutated [35S]rhIL-2 binding to plates coated

with ribonuclease B by oligomannosyl derivatives

Concentration for 50% inhibition

Compounds N26Q N26D

M5 0.2µM 0.2µM

M6 0.2µM 0.2µM

M7 >1mM >1mM

M8 >1mM >1mM

M9 >1mM >1mM

by guest on March 4, 2018

http://ww

w.jbc.org/

Dow

nloaded from

Page 36: 1 Carbohydrate recognition site of interleukinr2 in relation to cell

2 030

40

O

.

D

.

(

5

9

5

n

m

)O

.

D

.

(

5

2

5

n

m

)R

a

d

i

o

a

c

t

i

v

i

t

y(

d

p

m

×

1

0-

4 ) 0 . 2

0 . 10

0 . 2

0 . 10

0 . 2

0 . 10 210

21

43

5V

oO

.

D

.

(

5

2

5

n

m

)ABCD

F i

g

.

1

by guest on March 4, 2018 http://www.jbc.org/ Downloaded from

Page 37: 1 Carbohydrate recognition site of interleukinr2 in relation to cell

A

0

1

2

3

B

[3

5S

]

r

h

I

L

-

2

(

d

p

m

×

1

0-

5/

m

l

)

Concentration (M)

1 0 1

0 1

0 1

0 1

0

100

5 0

0

1 2 3 4

- 6 -

5- 7- 8-

9

R a

d

i

o

a

c

t

i

v

i

t

y

(

d

p

m

×

1

0-

3

)

I n h

i

b

i

t

i

o

n

(

%

)

M5M6

M9

M3

F

i

g

.

2

by guest on March 4, 2018

http://ww

w.jbc.org/

Dow

nloaded from

Page 38: 1 Carbohydrate recognition site of interleukinr2 in relation to cell

1 2 3 4

wild type1

0

0

1

0

1

A

B

C

E15D

L19D

D

E

F

L21D

N26D

N26Q

20 30 40

G

E67Q

20 30 4020 30 40

G27A

N30DH

I

0 0

Time (min)

Fig. 3

1 2 3 4 1 2 3 4

by guest on March 4, 2018 http://www.jbc.org/ Downloaded from

Page 39: 1 Carbohydrate recognition site of interleukinr2 in relation to cell

1 2 3 4

2

4

6

E

6

7

Q

N26Q

N26D

1 .

0

0.5

0

O .

D

.

(

5

2

5

n

m

)

B

A

[35S]rhIL-2 (pM)

502 512

0

6.23 .

01

.

50.

7

50

.

3

7

wild type

[3

5S

]

r

h

I

L

-

2

(

d

p

m

×

1

0-

5/

m

l

)

R a

d

i

o

a

c

t

i

v

i

t

y

(

d

p

m

×

1

0-

3

)

N

2

6

Q

N

2

6

D

w

i

l

d

t

y

p

e

E

6

7

Q

F

i

g

.

4

◆◆◆◆ ◇◇◇◇ ◇◇◇◇◇◇◇◇ ◇◇◇◇◆◆◆◆ ◆◆◆◆ ◆◆◆◆

◇◇◇◇◇◇◇◇ ◇◇◇◇ ◇◇◇◇ ◇◇◇◇ ◇◇◇◇ ◇◇◇◇◆◆◆◆ ◆◆◆◆ ◆◆◆◆ ◆◆◆◆ ◆◆◆◆ ◆◆◆◆ ◆◆◆◆

by guest on March 4, 2018

http://ww

w.jbc.org/

Dow

nloaded from

Page 40: 1 Carbohydrate recognition site of interleukinr2 in relation to cell

by guest on March 4, 2018

http://ww

w.jbc.org/

Dow

nloaded from

Page 41: 1 Carbohydrate recognition site of interleukinr2 in relation to cell

Keiko Fukushima, Sayuri Hara-Kuge, Hiroko Ideo and Katsuko YamashitaCarbohydrate recognition site of interleukin-2 in relation to cell proliferation

published online June 4, 2001J. Biol. Chem. 

  10.1074/jbc.M102789200Access the most updated version of this article at doi:

 Alerts:

  When a correction for this article is posted• 

When this article is cited• 

to choose from all of JBC's e-mail alertsClick here

by guest on March 4, 2018

http://ww

w.jbc.org/

Dow

nloaded from