03. analisis karbohidrat

8/18/2019 03. Analisis Karbohidrat

1/21


2/21

PEND HULU NEND HULU N

senyawa organik yang terdiri dari bahansenyawa organik yang terdiri dari bahanekstrak tanpa nitrogen (BETN ) dan seratekstrak tanpa nitrogen (BETN ) dan seratkasarkasarunsurnya terdiri dari karbon (C), hidrogenunsurnya terdiri dari karbon (C), hidrogen(H) dan oksigen (O).(H) dan oksigen (O).Karbohidrat merupakan komponen da amKarbohidrat merupakan komponen da ammakanan yang merupakan sumber energimakanan yang merupakan sumber energiutama bagi organisme hidup.utama bagi organisme hidup.


3/21


4/21

&ada tumbuhan, karbohidrat terdapat sebagai se u osa,&ada tumbuhan, karbohidrat terdapat sebagai se u osa,yaitu senyawa yang membentuk dinding se tumbuhan.yaitu senyawa yang membentuk dinding se tumbuhan.Karbohidrat berasa dari makanan, da am tubuhKarbohidrat berasa dari makanan, da am tubuhmenga ami perubahan atau metabo isme yang hasi nyamenga ami perubahan atau metabo isme yang hasi nyaada ah g ukosa yang terdapat da am darah.ada ah g ukosa yang terdapat da am darah.

Klasifikasi KarbohidratKlasifikasi KarbohidratKarbohidrat se$ara a ami dibagi men%adi ' monosakarida,Karbohidrat se$ara a ami dibagi men%adi ' monosakarida,o igosakarida dan po isakaridao igosakarida dan po isakaridaKarbohidrat dibagi men%adi dua go ongan pokok ' gu a danKarbohidrat dibagi men%adi dua go ongan pokok ' gu a dannon gu a.non gu a.

u a pa ing sederhana ada ah monosakarida yang dibagiu a pa ing sederhana ada ah monosakarida yang dibagiagi men%adi sub go ongan berdasar %um ah atom karbon.agi men%adi sub go ongan berdasar %um ah atom karbon.


5/21

. *+. *+ . -ONO! K / . -ONO! K /

Triose (CTriose (C 00 HH11 OO 00 ) ' isera dehide, /ihidroksiasetone) ' isera dehide, /ihidroksiasetoneTetrose (CTetrose (C 22 HH33 OO 22 ) ' Eritrose) ' Eritrose

&entose (C&entose (C 44 HH5656 OO 44 ) ' rabinose) ' rabinose

Heksose (CHeksose (C 11 HH5757 OO 11 ) ' 8ruktose, a aktose, ukose,) ' 8ruktose, a aktose, ukose,-annose-annose

B.B. / ! K / (C/ ! K / (C 5757 HH7777 OO 5555 ) ' !e obiose, +aktose, -a tose,) ' !e obiose, +aktose, -a tose,!ukrose, Treha ose!ukrose, Treha ose

C.C. T ! K / (CT ! K / (C 5353 HH0707 OO 5151 ) ' a9inose) ' a9inose

/./. TET ! K / (CTET ! K / (C 7272 HH2727 OO 7575 ) ' !takiose) ' !takiose


6/21

. NON# *+. NON# *+

a.a. HO-O&O+ ! K /EHO-O&O+ ! K /E&entosan&entosanHeksosanHeksosan

b.b. HETE O&O+ ! K /HETE O&O+ ! K /Hemise u oseHemise u ose

ummiummi

-usi age-usi age:at &eptik:at &eptik-ukopo isakaride dari hewan-ukopo isakaride dari hewan


7/21

Homopo isakarida ' po isakarida yang o ehHomopo isakarida ' po isakarida yang o ehhidro isis menghasi kan hanya satu ma$amhidro isis menghasi kan hanya satu ma$amgu a, misa ' g ukans hanya menghasi kangu a, misa ' g ukans hanya menghasi kang u$ose (atau dengan kata ain g ukang u$ose (atau dengan kata ain g ukanada ah po imer dari g u$ose), 9ruktansada ah po imer dari g u$ose), 9ruktans 9ru$tose, ;i ans9ru$tose, ;i ans ;i ose.;i ose.

Heteropo isakarida ' po isakarida $ampuranHeteropo isakarida ' po isakarida $ampuranyang o eh hidro isis menghasi kan $ampuranyang o eh hidro isis menghasi kan $ampuranmonosakaride dan produk ain.monosakaride dan produk ain.


8/21

&ati ' po imer dari&ati ' po imer dari im yang menghidro isis

se u ose), hanya diproduksi o ehse u ose), hanya diproduksi o ehmikroba sa uran pen$ernaan.mikroba sa uran pen$ernaan.


9/21

Penentuan Karbohidratenentuan Karbohidrat

!ebe umnya sampe dibebaskan dri >at7 $ampuran dan!ebe umnya sampe dibebaskan dri >at7 $ampuran dan

di akukan pen%ernihan terhadap arutan yg akandi akukan pen%ernihan terhadap arutan yg akandiana isis.diana isis.Hrus digi ing sampai ha us dan di%ga tdk ter%diHrus digi ing sampai ha us dan di%ga tdk ter%diperubahan7 komposisi kimiawinya dan si9at7 ain yg tdkperubahan7 komposisi kimiawinya dan si9at7 ain yg tdk

dikehendaki.dikehendaki.*ntuk kandungan ipida ? k oro9i dihi angkan dgn $ra*ntuk kandungan ipida ? k oro9i dihi angkan dgn $radiekstraksi dgn eter (suhu tdk bih 46diekstraksi dgn eter (suhu tdk bih 46 66 C).C).!e ama proses ekstraksi, sebaiknya ditambahkan!e ama proses ekstraksi, sebaiknya ditambahkanka sium karbonat untuk menetra kan.ka sium karbonat untuk menetra kan.

pabi a terdpt en>im yg dpt menghidro isis gu a, maka pabi a terdpt en>im yg dpt menghidro isis gu a, makahrus ditmbahkan merkuri k orida atau diekstraksi dgnhrus ditmbahkan merkuri k orida atau diekstraksi dgna koho (etano 36 @) dan sampe dipanaskan se ama 06a koho (etano 36 @) dan sampe dipanaskan se ama 06menit.menit.


10/21

PREP R SI S MPELREP R SI S MPEL

A -enghi angkan emak-enghi angkan emakA -etode ekstrak utk KH dgn B- rendah'-etode ekstrak utk KH dgn B- rendah'

di arutkan da am a koho 36@di arutkan da am a koho 36@A g arut da am a koho 'g arut da am a koho '

-onosa$$harides dan o igosa$$harides-onosa$$harides dan o igosa$$haridesA g tidak arut d m a koho 'g tidak arut d m a koho '

proteins, po ysa$$harides, seratproteins, po ysa$$harides, serat


11/21

A Pelarut alkohol dievaporasi shgPelarut alkohol dievaporasi shgmenghasilkan larutan KH sajamenghasilkan larutan KH saja

A atatan penting ! bila diduga sampel mshatatan penting ! bila diduga sampel msh

mengandung komponen lain seperti ! asammengandung komponen lain seperti ! asamamino" asam organik" pigments" vitamins"amino" asam organik" pigments" vitamins"mineralsminerals dll maka dilakukan :dll maka dilakukan : Penambahan bahan penjernih" #th ! Pb AsetatPenambahan bahan penjernih" #th ! Pb Asetat $ele%atkan sampel pada resin pertukaran ion$ele%atkan sampel pada resin pertukaran ion

PREP R SI S MPELREP R SI S MPEL(lanjutanlanjutan


12/21

METODE N LISIS K RBOHIDR TETODE N LISIS K RBOHIDR T!" SEDERH N" SEDERH N

& KH ' ()) * & Ka + & Prot + &,mk + & Abu& KH ' ()) * & Ka + & Prot + &,mk + & Abu

Perhitungan ini dapat dijadikan kontrolPerhitungan ini dapat dijadikan kontroluntuk penentuan kadar KH bila terjadiuntuk penentuan kadar KH bila terjadierrorerror dalam perhitungann-adalam perhitungann-a


13/21

Pen#ujian KarbohidratPen#ujian Karbohidrat

*%i Kua itati9 '*%i Kua itati9 '5. eaksi Darna5. eaksi Darna7. *%i pembentukan O>ason7. *%i pembentukan O>ason0. Kromatogra9i +apis Tipis (K+T)0. Kromatogra9i +apis Tipis (K+T)

2. Kromatogra9i as (K )2. Kromatogra9i as (K )4. Kromatogra9i Cair Kiner%a Tinggi (KCKT)4. Kromatogra9i Cair Kiner%a Tinggi (KCKT)*%i Kuantitati9 '*%i Kuantitati9 '5. -etode 8isika5. -etode 8isika

7. -etode Kimia7. -etode Kimia0. -etode En>imatis0. -etode En>imatis2. -etode Kromatogra9i2. -etode Kromatogra9i


14/21

Uji Kualitati$ Uji Kualitati$

5.5. eaksi Darna 'eaksi Darna '

a.a. *%i -o is$h*%i -o is$h '' karbohidrat sampe direaksikan dengankarbohidrat sampe direaksikan dengan


15/21

%ont&&&ont&&&d.d. *%i Benedi$t*%i Benedi$t '' !ampe ditambah pereaksi (Cu#su 9at, Na#sitrat dan Na#!ampe ditambah pereaksi (Cu#su 9at, Na#sitrat dan Na#

karbonat) dan dipanaskan adanya endapan merah $ok at menun%ukkankarbonat) dan dipanaskan adanya endapan merah $ok at menun%ukkan

adanya gu aadanya gu a pereduksi gu a inGersi (g ukosa dan 9ruktosa)pereduksi gu a inGersi (g ukosa dan 9ruktosa) ..e.e. *%i 8eh ing '*%i 8eh ing ' !ampe ditambah pereaksi (Cu#su 9at da am suasana!ampe ditambah pereaksi (Cu#su 9at da am suasana

a ka is,NaOH, ditambaha ka is,NaOH, ditambah Chelating Agent Chelating Agent (ka ium natrium tartrat)) dan(ka ium natrium tartrat)) dandipanaskan adanya endapan berwarna merah $ok at menun%ukkandipanaskan adanya endapan berwarna merah $ok at menun%ukkanadanya gu a pereduksiadanya gu a pereduksi gu a inGersi (g ukosa dan 9ruktosa)gu a inGersi (g ukosa dan 9ruktosa) ..

9.9. *%i odium*%i odium '' !ampe diasamkan dengan HC kemudian ditambah iodin!ampe diasamkan dengan HC kemudian ditambah iodinda am arutan K . Darna biru berati (F) adanya pati dan warna merahda am arutan K . Darna biru berati (F) adanya pati dan warna merah(F) g ikogen.(F) g ikogen.

g.g. *%i Bar9oed '*%i Bar9oed ' !ampe ditambah pereksi (Cu#asetat dan asam asetat)!ampe ditambah pereksi (Cu#asetat dan asam asetat)kemudian dipanaskan, endapan merah bata menun%ukkan Fkemudian dipanaskan, endapan merah bata menun%ukkan Fmonosakarida ? disakarida (tdk ada endapan merah ke$ua i per akuanmonosakarida ? disakarida (tdk ada endapan merah ke$ua i per akuanyg diper ambat.yg diper ambat.


16/21

7.7. *%i pembentukan O>ason ' hasi berbentuk krista yg dpt*%i pembentukan O>ason ' hasi berbentuk krista yg dpt

diamati dgn mikroskop.diamati dgn mikroskop.a.a. dosa ketosa F 9eni hidra>in dosa ketosa F 9eni hidra>in krista kuning krista kuningb.b. /ekstrosa F 7#9eni hidra>in/ekstrosa F 7#9eni hidra>in dekstrosa>on, 7Hdekstrosa>on, 7H 77 OOdan COdan CO 77

0.0. Kromatogra9i +apis Tipis (K+T)Kromatogra9i +apis Tipis (K+T) di akukan dgndi akukan dgnmembandingkan ni ai 9 sampe dan baku karbohidrat.membandingkan ni ai 9 sampe dan baku karbohidrat.

2.2. Kromatogra9i as (K )Kromatogra9i as (K ) senyawa yg mudah menguap.senyawa yg mudah menguap.Hasi nya dengan me ihat waktu retensinya (tHasi nya dengan me ihat waktu retensinya (t r r ).).

4.4. Kromatogra9i Cair Kiner%a Tinggi (KCKT)Kromatogra9i Cair Kiner%a Tinggi (KCKT) identik denganidentik denganK , yaitu dgn membandingkan wktu retensi sampe dgnK , yaitu dgn membandingkan wktu retensi sampe dgnbaku karbohidrat.baku karbohidrat.


17/21

Uji Kuantitati$ Uji Kuantitati$

5.5. -etode 8isika-etode 8isika metode po arimeter metode po arimeter (rotasi optis) re9raktometer (indeks bias)(rotasi optis) re9raktometer (indeks bias) ..

-enurut Hukum Biot '-enurut Hukum Biot '

566


18/21

7. -etode Kimia ' berdasarkan si9ar mereduksi gu a7. -etode Kimia ' berdasarkan si9ar mereduksi gu a(g ukosa(g ukosa ,, ga aktosa, dan 9ruktosa (ke$ua i sukrosaga aktosa, dan 9ruktosa (ke$ua i sukrosa

karena tidak memi iki gugus a dehid)karena tidak memi iki gugus a dehid) ))a.a. -etode +u99#!$hoor '-etode +u99#!$hoor '# &ersiapan sampe# &ersiapan sampe# &enetapan kadar gu a sebe um inGersi# &enetapan kadar gu a sebe um inGersi

# &enetapan kadar gu a sete ah inGersi# &enetapan kadar gu a sete ah inGersiI Kadar gu a sebe um inGersi 'I Kadar gu a sebe um inGersi ' J 9 J 9 55 ; &; & 55 ; 566 @ B ; 5666; 566 @ B ; 5666I Kadar gu a sete ah inGersi 'I Kadar gu a sete ah inGersi '

+ J 9 + J 9 77 ; &; & 77 ; 566 @; 566 @ B ; 5666 B ; 5666I Kadar kese uruhan 'I Kadar kese uruhan ' ( +) ; 6, 4 @( +) ; 6, 4 @


19/21

b.b. Ko orimeter 'Ko orimeter '# &embuatan KurGa Baku# &embuatan KurGa Baku# &enetapan u a reduksi da am sampe# &enetapan u a reduksi da am sampe

$.$. -unsom Da ker ' banyaknya suatu-unsom Da ker ' banyaknya suatu

karbohidrat yg terbentuk dengan $arakarbohidrat yg terbentuk dengan $arapenimbangan atau dgn me arutkan ke da ampenimbangan atau dgn me arutkan ke da ampe arut yg sesuai kemudian dititrasi dgn Na.pe arut yg sesuai kemudian dititrasi dgn Na.tiosu 9at. (disesuaikan dgn tabe Hammond)tiosu 9at. (disesuaikan dgn tabe Hammond)

d.d. +ane Eynon ' menitrasi dgn so;h et (Cu!O+ane Eynon ' menitrasi dgn so;h et (Cu!O 22 K#K#Na. tartrat) dgn sampe yg diana isis (tabe +aneNa. tartrat) dgn sampe yg diana isis (tabe +ane Eynon) Eynon)

Cont...


20/21

0. *%i En>imatis0. *%i En>imatis sangat tepat digunakan untuk penentuan kagarsuatu gu a se$ara indiGidua , disebabkan ker%a en>im yang

sangat spesi9ik. Contoh en>im yang dapat digunakan ia ahglukosa oksidase dan heksokinase. Keduanya digunakanuntuk mengukur kadar g ukosa ''a. ukosa oksidasia. ukosa oksidasi

## &embuatan KurGa baku&embuatan KurGa baku ## &enentuan ukosa &ada sampe&enentuan ukosa &ada sampe (dapat diukur pada L

426 nm)b. Heksokinase (dengan menggunakan en>imb. Heksokinase (dengan menggunakan en>im ) () (dapat diukur

pada L 002 nm)2.2. -etode Kromatogra9i (K+T, KCKT, K dan E ektro9oresis)'-etode Kromatogra9i (K+T, KCKT, K dan E ektro9oresis)'

a. -onosakarida dan /isakaridaa. -onosakarida dan /isakaridab.b. O igosakarida dan &o isakarida, serta produk7O igosakarida dan &o isakarida, serta produk7dekomposisinya.dekomposisinya.

Cont...


21/21

03. analisis karbohidrat

Documents