ג. אנזימי הגבלה - restriction enzymes
DESCRIPTION
ג. אנזימי הגבלה - Restriction Enzymes. אנזימים שחותכים את הקשר הפוספודיאסטרי ב- DNA . אנזימים אילו נתגלו לאחר שנמצא, שבמקרים מסוימים, לא ניתן היה להעביר תורשתי בין חיידקים. - PowerPoint PPT PresentationTRANSCRIPT
Restrictionאנזימי הגבלה - ג.Enzymes.
.DNAאנזימים שחותכים את הקשר הפוספודיאסטרי ב-•
אנזימים אילו נתגלו לאחר שנמצא, שבמקרים מסוימים, •לא ניתן היה להעביר תורשתי בין חיידקים.
אנזימים אילו כנראה שייכים •למנגנוני העמידות של
החיידקים מפני תוקפנותם של ( bacteriophage)נגיפים
המחדירים את החומר התורשתי שלהם לחיידקים
ופוגעים בהם.
המאפיינים של אנזימי ההגבלה Restriction enzymes))
בין האנזימים השוני•השונים בא לידי ביטוי:
ברצף הנוקלאוטידים א.באתר החיתוך.
באופי החיתוך חיתוך ב.ישר או מדורג.
במספר הבסיסים ג. או 4,6באתרי החיתוך
8.
קיימים מאות סוגים של אנזימים הגבלה.
לכל אנזימי ההגבלה הוא, שיש להם אזורי החיתוך המשותף •המתאפיינים ברצף נוקלאוטידים של פלינדרום.
.” sticky ends)“חיתוך עם קצוות דביקים )
מפת הגבלה
תיאור קווי של אתרים בדנ"א הנחתכים על ידי •אנזימי הגבלה.
השיטה:•
עם אנזים ההגבלה.DNAהדגרה של מקטע ה- •
באלקטרופוריזה DNAהפרדה של מקטעי ה-•בג'ל
שימושים שונים לאנזימי הגבלה
ברצפים הגנומיםDNA. גילוי מקטעי 1•
לתוך נשא. DNA. שיבוט – החדרת מקטע 2•
בשיבוט משתמשים ב – פלסמידים או וירוסים•
DNAרקומביננטי
DNAיצירת •רקומבינטי
חיתוך שני מקטעי 1.DNA הגן והפלסמיד :
ע"י אותו אנזים הגבלה.
איחוי של שני 2.המקטעים בעזרת
אנזים ליגאז.
אלקטרופוריזה בג’יל
דגימות הדנ”א לאחר שטופל באנזימי הגבלה •מועברות לתוך גומה בג’יל.
מספקים זרם חשמלי•
הדנ”א חומצי לכן טעון במטען שלילי, לכן •הדנ”א ינוע לכיוון הקוטב החיובי.
במהלך ההרצה המקטעים הקצרים יעברו •מרחק גדול, ואילו הארוכים יתקדמו למרחק
קצר.
ההבחנה במולקולות של דנ”א בג’ל
מולקולות הדנ”א לא נראות לעין.•
מוסיפים לג’יל אתידיום ברומיד•
האתדיום ברומיד נקשר לבסיסים של הדנ”א •ומצטבר בתוכן
U.V אם מניחים את הג’יל בקרינת•
מתקבל דגם של פסים זוהרים•